尖吻蝮(Agkistrodon acutus)蛇毒的研究——Ⅱ.透明质酸酶的纯化和性质

用CM-Sephadex C-50,Sephadex G-75以及CM-Sephadex C-25柱层析,从尖吻蝮蛇毒中分离提纯透明质酸酶,得到一个电泳均一的纯品,活力提高45倍。纯品不具有出血活性。用凝胶过滤方法测得分子量为33,000±330,等电点约10.3,PAS染色证实是糖蛋白。纯化的透明质酸酶的最适pH为3.5～5.0,最适温度是37℃,在中性和碱性环境中迅速失活,不耐热。Fe~( )、Cu~( )、肝素对酶活力有明显的抑制作用。     

天花粉蛋白T18肽片段的溶液构象及T14、TDK和T18肽构象比较

用１ＨＮＭＲ法测定Ｔ１８肽在ＤＭＳＯ（ＭＳ１８）和５０％六氟异丙醇（ＦＰ１８）中的溶液构象．ＭＳ１８含有Ｉｌｅ３～Ｇｌｎ７和Ａｌａ１２～Ｇｌｎ１６两段β－折叠链;而ＦＰ１８则转变为α－螺旋结构。综合分析Ｔ１４,Ｔ１８和ＴＤＫ三个模型肽的结构性质和稳定性,比较肽链序列和溶剂作用,提出肽链局部优势结构的概念,并据此讨论天花粉蛋白小结构域折叠起始过程．     

S-磺酸型胰岛素A链的二体

用凝胶过滤法测定胰岛素A链的分子量,发现当用过量的亚硫酸钠和四硫硫酸钠将胰岛素拆开成S-磺酸型A及B链时,A链以单体和二体两种形式存在。一旦除去亚硫酸钠和四硫硫酸钠,冷冻干燥后,A链单体大部分转变成二体。将A链样品长期放置,还会有四体、六体的聚合物出现。将回收的A链二体透析冻干后,再用四硫硫酸钠及亚硫酸钠处理,A链二体能拆开成单体,说明A链单体间以硫硫键相连成二体。     

半夏蛋白变性过程的圆二色性研究

测定了半夏蛋白的紫外圆二色谱,远紫外谱显示不常见的单一的226nm负峰,[θ]_(226)=-4.42×10~3度·厘米~2/分克分子;近紫外谱给出295nm 及286nm 的正峰,248nm 的负峰,265～280nm 的宽峰。这些CD 峰的峰值因加入胍而降低,降低过程相互间大体平行,[θ]对胍浓度曲线的转折点都在2.75M 胍左右,与一般蛋白质相同。还测定了6M 胍中变性的半夏蛋白的重天然化过程,发现分两个过程,一快一慢。慢过程的一级反应速度常数是0.144分~(-1),快过程的是3.57分~(-1)。     

S-磺酸型胰岛素A链的二体

用凝胶过滤法测定胰岛素A 链的分子量,发现当用过量的亚硫酸钠和四硫硫酸钠将胰岛素拆开成S-磺酸型A 及B 链时,A 链以单体和二体两种形式存在。一旦除去亚硫酸钠和四硫硫酸钠,冷冻干燥后,A 链单体大部分转变成二体。将A 链样品长期放置,还会有四体、六体的聚合物出现。将回收的A 链二体透析冻干后,再用四硫硫酸钠及亚硫酸钠处理,A 链二体能拆开成单体,说明A 链单体间以硫硫键相连成二体。     

兔小肠刷状缘膜蔗糖酶—异麦芽糖酶复合体的圆二色光谱研究

在磷酸钾缓冲液中,pH6.8,25℃时,S-I酶复合体的近紫外CD谱显示280～281nm的负峰,293～294nm的正峰。在288,269,和263nm处有3个肩膀。溶液pH值变化和对此酶的热失活处理都能使280～281nm负峰缩小,可能表示酪氨酸残基微环境和酶活力有关。S-I酶复合体的远紫外CD谱显示较大的215nm负峰和较小的192nm正峰,表示其骨架构象以β-折迭和无规卷曲为主。此远紫外CD谱在pH2.3～11范围里维持不变,也不受55℃热失活处理的影响。Na~+和tris对此酶CD谱不产生影响。高浓度盐酸胍能改变其近紫外和远紫外CD谱形。     

胰岛素作用原理的研究 Ⅵ.胰岛素片段与胰岛素受体的相互作用

研究了用胰凝乳蛋白酶限制性酶解和化学合成方法所获得的若干胰岛素片段与脂肪细胞胰岛素受体的结合。它们在低浓度时几乎观察不出与胰岛素受体结合,而在高浓度时除五肽HTyr·Thr·Pro·Lys·AlaOH外都有明显的专一性结合。说明它们具有部分与胰岛素受体的结合部位。与前文关于胰岛素结合部位设想是一致的。讨论了胰岛素结合部位的性质,并讨论了五肽HArg·Gly·Phe·Phe·TyrOH加强胰岛素与其受体亲合力的可能性。     

胰岛素类似物的直线聚合

与胰岛素相似,去B链羧端五肽胰岛素(DPI)及去B链羧端八肽胰岛素(DOI)的酸性溶液于沸水浴中加热,会转变成粘度很高的溶液,该溶液具有流动双折射性质。于电子显微镜下观察,看到该两种类似物的纤维。这些纤维与胰岛素纤维相似,经常由几根微丝绞合成螺旋状。微丝的直径大约是30,与胰岛素微丝的直径相当。上述现象说明,这些类似物的直线聚合过程与胰岛素者是类同的。因此胰岛素B链羧端肽段并非胰岛素直线聚合所必须。     

从胰岛素A及B链重合成胰岛素

(1)用亚硫酸盐及四硫硫酸盐将胰岛素的硫-硫键拆成S-磺酸基后,再经过离子交换或板型电泳分离,可以得到纯的A及B链。(2)用小白鼠惊厥法检查,S-磺酸型A及B链都不具有生物活力。用过量巯基乙酸将纯的A或B链的S-磺酸基还原为巯基,然后分别将还原型的A或B链溶液(pH 8.5)单独在空气中氧化也不产生活力。但将还原型A及B链混合,在同样条件下氧化时,可以获得有活力的产物。活力一般恢复到原活力的5-10%左右。(3)用还原型的A或B链分别与S-磺酸型的B或A链共同保温都可以得到有活力的产物。(4)将恢复活力的重氧化产物进行提纯的结果得到比活力为每毫克18.4国际单位的结晶。这样所获得的晶体其结晶形状、降血糖性质、电泳性质以及在三种溶剂系统中的比移都和结晶胰岛素相同。(5)以上晶体和结晶胰岛素的胃蛋白酶酶解图谱也基本上相同。     

S-磺酸型胰岛素B链的直线聚合作用 Ⅳ.几种有机物质的影响

前此报导了S-磺酸型胰島素B鏈(以下簡称B鏈)的直綫聚合作用,关于纤維中B鏈单体間的連接鍵及直綫聚合与单体构型間的关系,亦曾有过一些推測。蛋白质溶液中加入有机溶剂可以改变溶剂的介电常数,因而要影响蛋白貭分子間或分子內的作用力