尖吻蝮毒液类凝血酶的克隆及序列分析

以类凝血酶的RT—PCR产物为模板,PCR扩增出其cDNA片断克隆尖吻蝮的毒液类凝血酶cDNA,分析其密码子运用的特点。用软件进行多序列比对并分析。克隆出多个尖吻蝮毒液类凝血酶的cDNA,得到其基因密码子运用的有关数据。结果表明尖吻蝮毒液类凝血酶同时存在着保守性与多样性,有着较明显的密码子偏好性,在进化中承受了碱基组成和自然选择的压力。     

慢病毒介导的RNA干涉对乳腺癌SKBR3细胞HER2受体的下调及生长抑制

大约30％的乳腺癌中有表皮生长因子受体家族蛋白HER2的过表达,此类癌症的预后差,恶性程度高。RNA干涉（RNAi）是最近发展起来能特异性抑制哺乳动物细胞中基因表达的新技术。本文在以往获得的能够产生良好基因沉默效应的小干涉RNA（siRNA）的基础上,构建了U6和H1双启动子siRNA表达载体,并转染HER2高表达乳腺癌SKBR3细胞定量测定了其HER2下调效应。随后,siRNA表达盒经LR重组反应被克隆入慢病毒载体中,在成功包装成病毒后,感染SKBR3并经荧光定量PCR、蛋白印迹杂交和流式细胞仪一系列实验证明慢病毒介导的RNAi确实能有效地下调肿瘤抗原HER2的表达。细胞长期增殖实验表明经慢病毒处理后细胞生长得到抑制。我们的研究为进一步阐明HER2与癌症恶化的关系以及发展新的基因治疗药物提供了工具和可能。     

富含二硫键的膜蛋白p185胞外区在大肠杆菌中的可溶性表达和性质鉴定

Her2/c-erbB-2基因（其产物为膜蛋白p185）是表皮生长因子受体（EGFR）基因家族的一员,在约30％的乳腺癌中发现了其过量表达。为了鉴定抗p185单克隆抗体的抗原表位并进一步研究它们的相互作用,采用PCR的方法从含Her2/c_erbB_2基因的pBabe/erbB_2质粒中扩增了p185胞外区的富含二硫键的第一、二结构域和第四个结构域。产物克隆到pGEX/4T-1载体后,转化大肠杆菌Origami B（DE3）pLysS菌株,用低浓度IPTG进行低温过夜诱导后将菌体压力破碎,SDS-PAGE检测表达上清,得到了可溶性表达的融合有GST的目的蛋白。经ELISA、Western blot等方法鉴定,可溶性表达产物具有完全的抗体结合活性,且当用凝血酶把GST切掉后该活性仍然保留。P185胞外区融合蛋白的成功表达将为二硫键富含类蛋白的表达提供参考;并为将来具有肿瘤细胞生长抑制活性的抗p185单克隆抗体的抗原表位鉴定,以及为EGFR家族受体的结构和功能关系的研究打下基础。     

c-erbB-2单克隆抗体A18在乳腺癌中表达特性的研究

目的：研究一株自制的c-erbB-2单克隆抗体A18在乳腺癌中表达的特性。方法：应用免疫组织化学SP法、蛋白质印迹分析法和荧光激活的流式细胞分选检测技术检测A18在635例乳腺癌组织、100例癌旁乳腺组织、不表达c-erbB-2的NIH／3T3（鼠成纤维细胞）和NE91（转表皮生长因子受体基因的NR6鼠成纤维面积）细胞株及高表达c-erbB-2的T6－17（转c-erbB-2－基因的NIH／3T3细胞）和SKBR3（人乳腺癌细胞）细胞株中的表达状况,并与市售进口c-erbB-2抗体（MaximBiotech产品）进行了平行对照研究。A18系采用细胞表面区域表位包埋法免疫小鼠制备而成,,结果：A18阳性染色定位于细胞膜,部分伴微弱的细胞浆着色,无明显非特异性染色,A18和进口抗体对NIH／3T3、NE91细胞均呈阴性,T6－17、SKBR3细胞均呈阳性,在乳腺癌组织中,A18的阳性率为60．3％,明显高于癌旁乳腺组织的5．0％,A18与进口同类单抗的阴性、阳性及总符合率分别为84．0％、82．8％及83．2％,与进口同类多抗的阴性,阳性及总符合率分别为88．0％、90．2％和89．5％。A1和进口同类单抗与乳腺癌临床病理特征的关系一致。经反复冻融7次或4℃保存10个月A18效价仍保持在3μg/ml。结论：A18特异性强,定位准确,效价高而稳定、可用于临床乳腺癌的检测。     

皖南尖吻蝮蛇中11个C型凝集素类似蛋白亚单位的cDNA克隆和序列分析

通过放射性标记DNA探针筛选和PCR克隆筛选 ,从皖南尖吻蝮蛇毒腺的λgt11cDNA文库中 ,克隆得到了 11个编码C型凝集素类似蛋白亚单位的cDNA .其中 2个克隆分别含有编码an tithrombinA的A链和B链的序列 .另外 6个则含有编码如下肽链的序列 :antithrombinC的A链和B链、agkisacutacin的A链和B链、抗凝血因素的A链和B链 ,其它 3个克隆含有编码未知蛋白质的序列 .有趣的是 ,在编码AntithrombinC的序列中 ,每条链中除了含有 7个与所有C型凝集素类似蛋白位置一致的Cys外 ,在B链上还含有一个额外的Cys3;2条B链上的Cys3可能形成一对新的链间二硫键 .氨基酸序列的比较及进化分析显示 ,C型凝集素类似蛋白B链起源于一个单系类群 ,A链至少有 4个进化起源     

沙打旺胚性原生质体培养优化及高频再生植株

外植体类型和光照条件决定沙打旺胚性愈伤组织的形成。用生长10d的胚性愈伤组织可分离到1.2×10⁶个/g(原生质体/细胞),活力超过80%。当原生质体以1.0×10⁵/mL的植板密度培养在含0.6%琼脂糖附加1.5mg/L 2,4-D、0.5mg/L BA和0.5mol/L葡萄糖的培养基(无机盐降为1/4)中,植板率为16.8%。条件培养基显著促进原生质体的生长发育。长大的细胞克隆经2周4℃低温处理后转到含0.1mg/L NAA和1.0mg/L BA分化培养基上,体细胞胚胎发生频率高达70%,每克细胞产生的体细胞胚数在200个以上。成熟的体细胞胚转到无激素的1/2MS培养基中即分化成苗,再生植株为正常的二倍体。     

广西产金环蛇(Bungarus fasciatus)蛇毒中类心脏毒素物理化学性质的研究

前文我们报道了广西产金环蛇蛇毒中类心脏毒素a 及b 的分离。本文就它们的物理化学性质作了进一步研究。二种毒素氨基酸组成十分相似,通过凝胶过滤,测得它们的分子量分别为15,900和12,100。它们N 端的二个氨基酸顺序完全相同,为Gly·Leu…。经羧肽酶A降解测得它们的C 端顺序为……Ala·Cys·Tyr。等电聚焦测得它们的等电点分别为8.8和9.2。紫外吸收光谱显示它们279nmE_(1厘米)~(1%)分别为11.7和12.7。     

拟南芥突变体uro的表型分析表明URO基因参与生长素调节的植物发育过程

在筛选拟南芥(Arabidopsisthaliana L.)叶突变体的过程中获得拟南芥upright rosette(uro)突变体.uro为半显性突变体,因突变体在幼苗生长期莲座叶竖直生长而得名.对uro突变体的表型进行了详细的分析,结果表明:uro突变不仅造成叶生长模式的改变,还出现多种其他异常表型.uro杂合和纯合突变体都表现出植物顶端优势的丧失,纯合突变体表现得更为严重.uro纯合突变体的一些二级分枝会被叶取代,这种叶的叶柄与叶片远轴面连接.突变体的花发育也有多种异常表型,主要表现为花瓣及雄蕊数目的改变、花器官的同源异型转化和不同花器官的融合.uro突变体茎软,细胞学水平分析表明突变体的内皮层组织发生增生,束间纤维发育及维管束分化受阻.顶端优势的丧失及维管组织的异常发育表明,URO基因可能参与生长素对植物发育的调节.pin1 uro双突变体表型的分析表明,虽然双突变茎表型出现了两亲本表型的叠加,但双突变体的花却出现了新的表型,说明URO-与PIN1基因在调节植物发育过程中具有部分遗传上的相互作用,这一结果进一步证明URO基因参与了生长素调节的植物发育过程.     

保持培养细胞原位、原形的超薄切片制备法

本文介绍先用环氧树脂Epon812包埋剂制成丘状膜,再在膜上培养细胞,直接将膜与细胞一起包埋,制备超薄切片。此种方法不仅能克服以往培养细胞需要离心成团,容易造成细胞破碎、变形的缺点;还能避免琼脂预包埋法悬浮细胞造成的抗原封闭;并能得到为数较多的连续超薄切片。它操作简便,较好地保持了培养细胞生长的原来位置及原有形状,为培养细胞进行免疫电镜的操作和提高制备培养细胞超薄切片的数量和质量提供了一种有效的途径。