卡他莫拉菌实时荧光PCR检测方法的建立

[目的]建立基于SYBR GreenⅠ染料法的卡他莫拉菌实时荧光PCR检测方法。[方法]选取卡他莫拉菌两个的基因(uspA1和copB)设计特异性引物;提取卡他莫拉菌、嗜肺军团菌等11种呼吸道病原体的DNA,通过常规PCR和实时荧光PCR对引物的特异性进行验证;以卡他莫拉菌DNA为模板进行实时荧光PCR,获取扩增曲线、标准曲线、熔解曲线和熔解峰图,并判断检测方法的灵敏度;进行重复性试验,评估检测方法的组内和组间重复性;通过模拟临床样本,对检测方法的灵敏度进行验证。[结果]共设计出3对引物,对嗜肺军团菌等10种呼吸道病原体具有特异性;对卡他莫拉菌的最低检出浓度为1.0×10^(3)cfu/mL;组内和组间最大变异系数分别为1.78%、1.89%;模拟的临床试验结果与预期相符。[结论]成功建立了卡他莫拉菌的实时荧光PCR检测方法,与10种常见的呼吸道病原体无交叉反应,且重复性变异系数小于2%,模拟临床试验灵敏度结果达到1.0×10^(3)cfu/mL。     

双头蝮蛇畸型一例报告

对于两头蛇人们的传说很多,但多将盲蛇(钝尾两头蛇)误认为两头蛇。真两头蛇为双头连体畸型,一般在颈部分叉,并列长着两个头。属于罕见,蝮蛇双头畸型未见报道,现发现一例报告如下:此蛇为东北长白山地区白眉蝮蛇,于1987年9月12日发现于辽宁省清原第二三八医院蛇园。系当年产仔蛇,体为黑褐色,     

卡他莫拉菌UspA1蛋白多克隆抗体的制备及鉴定

为制备抗卡他莫拉菌(Moraxella catarrhalis,Mc)表面蛋白UspA1胞外结构域的多克隆抗体(PcAb),对UspA1蛋白进行生物信息学分析,获取胞外结构域中抗原表位最为丰富的肽段,找到其对应的基因序列并引入大肠杆菌偏好性密码子,对其优化后化学合成全基因序列。将该基因序列按常规方法克隆入表达载体p ET-28a(+)后表达重组UspA1-His融合蛋白并纯化。以该纯化抗原免疫新西兰大白兔,经4次免疫后,用Protein A亲和层析柱从抗血清中纯化出抗UspA1-His融合蛋白PcAbIgG。经免疫荧光法、酶联免疫吸附法及Western blotting鉴定,抗UspA1-His融合蛋白PcAb能特异性识别UspA1蛋白的表面暴露区。该多抗的制备为下一步建立卡他莫拉菌快速检测技术奠定了基础。     

~(125)Ⅰ—标记尖吻蝮蛇出血毒素Ⅰ在家兔体内的药代动力学研究

用~(125)Ⅰ标记从尖吻蝮蛇(Agkistrodon acutus)毒中分离出的出血毒素(Ⅰ Aa-HI),得到Ⅰ~(125)Ⅰ—AaHI。静脉注射~(125)Ⅰ—AaHI到家兔体内,对~(125)Ⅰ—AaHI在动物体内的分布和药物代谢动力学进行研究。注射~(125)Ⅰ—AaHI 5小时后将家兔杀死,测定各组织的放射性强度。结果表明有血脑屏障存在。~(125)Ⅰ—AaHI代谢的大量产物由肾通过尿排出。对于药物代谢动力学,计算机模似结果为一室模型,其中生物半衰期T_(1/2)为55.9分钟,K值为0.0124分钟。我们认为在动物体内可能有AaHI相关的结合位点或受体存在。     

关于蛇毒抗栓制剂临床应用研究中几个值得注意的问题和建议

蛇毒抗栓制剂在我国研究应用已有２０年,但由于多种原因目前仍不规范,特别是概念混淆。有必要进一步说明,以便更科学合理地评价蛇毒抗栓剂在临床中的地位和指导应用。１历史评价中值得注意的问题近几年很多医学杂志都对蛇毒抗栓剂进行了报道,说明蛇毒抗栓剂临床应用十...     

桑叶挥发油的成分分析

鲜桑叶中的主要化学成分为水分、蛋白质、总糖、脂肪和灰分,其质量分数分别为76.32％、4.75％、16.94％、1.2％和1.05％。桑叶挥发油的回收率约为0.1％(干基)。利用GC/MS对鲜桑叶的挥发油进行了分离鉴定,共检出85个组分,确定了47个化学组分的结构。挥发油中含有大量不饱和的醇和酸,多种脂肪酸,烷烃和芳香族,甾醇类,二萜烯类,杂环类化合物。其中含量最高的是十六碳烯醇(MW296);其次是三甲基环己烯醇(Mw192)和庚烯醇(MW204)等。     

流感嗜血杆菌快速检测胶体金试纸的研制

以流感嗜血杆菌外膜蛋白P 6为检测标志物,利用胶体金免疫层析技术建立一种快速、灵敏、准确检测流感嗜血杆菌的方法。对P6蛋白(GenBank登录号:AGH02799)进行生物信息学分析,获取其胞外结构域中抗原表位最丰富的肽段,预测其中的线性抗原表位P6Line (62–75 aa),化学合成后经免疫、抗体纯化得到线性表位抗体,同时利用重组P6蛋白制备多克隆抗体,建立基于双抗体夹心免疫层析技术的流感嗜血杆菌快速检测方法,并对该方法的特异性、灵敏性、重复性和稳定性作出评价,同时对该方法进行临床模拟试验,平板培养法验证其准确性。建立的检测方法可在15 min内完成对样本的检测,检测敏感度高(1×10~5 CFU/mL)、特异性强,与其他诸如肺炎链球菌、卡他莫拉菌、肺炎支原体、嗜肺军团菌等常见9种的呼吸道病原菌无交叉反应;试纸条在25℃保存具有良好的重复性和稳定性;200份临床样品检测结果与平板培养法的阳性符合率为90.5%。P6蛋白具有高度的表面暴露性和较强的抗原性,可作为流感嗜血杆菌检测标的物,胶体金免疫层析法具有快速、简便、灵敏的特点,适用于呼吸道感染的临床快速检测。     

采集和制作植物标本实驗課的教学法

采集和制作植物标本,是学习和研究植物学的重要方法之一。学生在学习植物学时,应该及时地学会采集和制作植物标本的基本技能。人民教育出版社今年出版的初级中学课本植物学,将采集和制作植物标本列为实验课题之一。它明确地向中学生物学教师提出了培养学生采集和制作植物标本的基本技能的教学任务。现将我们对这一实验课题教学法的一些看法提出,以供同志们的参考。     

蛇毒中抗癌组分对Hca-16局部肿瘤生长抑制的实验研究报告

本文报告从中华眼镜蛇毒及长白山白眉蝮蛇毒中分离出的抗癌组分蛇毒抗癌宁(SVAT)对Hca-16局部肿瘤生长抑制进行实验研究,结果证明蛇毒抗癌宁对白鼠的 Hca-16接种生长有一定抑制作用,与对照组相比差异显著。实验还发现蛇毒抗癌宁用量过大对肝脏有损害,用量适当可减轻损伤,并且损伤在一定范围内是可逆的.     

黑胸大蠊浓核病毒NS2蛋白的表达、抗体制备及亚细胞定位

ns2是黑胸大蠊浓核病毒的一个非结构基因, 所编码的蛋白质大小为30 kD, 是一个功能未知的基因。为了对该基因进行深入的功能研究, 从感染了黑胸大蠊浓核病毒的蟑螂的后肠组织中通过RT-PCR得到ns2基因编码序列, 将其构建于原核表达载体pET-28a, 转化大肠杆菌BL21(DE3) 获得融合表达产物。此融合蛋白经分离纯化后, 免疫新西兰大白兔, 制备其多克隆抗体。采用Western印迹技术, 用该抗体检测ns2基因的真核表达产物, 证明该抗体有较好的针对NS2蛋白的专一性, 可用于对NS2结构和功能的研究。同时, 将此编码序列克隆至果蝇细胞表达载体pAC, 得到重组质粒后转染果蝇S2细胞表达重组蛋白, 通过共聚焦显微镜用该抗体检测该蛋白在S2细胞中的亚细胞定位, 发现NS2蛋白主要定位于细胞质, 核内仅有少量分布。