卡他莫拉菌实时荧光PCR检测方法的建立 |
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引用本文: | 侯昊,程雨洁,朱辉煌,孔萌萌,王毅,杨波,胡征.卡他莫拉菌实时荧光PCR检测方法的建立[J].生物技术,2022(6):693-698. |
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作者姓名: | 侯昊 程雨洁 朱辉煌 孔萌萌 王毅 杨波 胡征 |
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作者单位: | 1.湖北工业大学生物工程与食品学院430068;2.发酵工程教育部重点实验室430068;3.工业发酵湖北省协同创新中心430068; |
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基金项目: | 湖北省自然科学青年基金项目(2017CFB226)。 |
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摘 要: | 目的]建立基于SYBR GreenⅠ染料法的卡他莫拉菌实时荧光PCR检测方法。方法]选取卡他莫拉菌两个的基因(uspA1和copB)设计特异性引物;提取卡他莫拉菌、嗜肺军团菌等11种呼吸道病原体的DNA,通过常规PCR和实时荧光PCR对引物的特异性进行验证;以卡他莫拉菌DNA为模板进行实时荧光PCR,获取扩增曲线、标准曲线、熔解曲线和熔解峰图,并判断检测方法的灵敏度;进行重复性试验,评估检测方法的组内和组间重复性;通过模拟临床样本,对检测方法的灵敏度进行验证。结果]共设计出3对引物,对嗜肺军团菌等10种呼吸道病原体具有特异性;对卡他莫拉菌的最低检出浓度为1.0×10^(3)cfu/mL;组内和组间最大变异系数分别为1.78%、1.89%;模拟的临床试验结果与预期相符。结论]成功建立了卡他莫拉菌的实时荧光PCR检测方法,与10种常见的呼吸道病原体无交叉反应,且重复性变异系数小于2%,模拟临床试验灵敏度结果达到1.0×10^(3)cfu/mL。
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关 键 词: | 卡他莫拉菌 实时荧光PCR uspA1 copB 呼吸道病原体 |
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