海栖热袍杆菌来源的极耐热碱性果胶裂解酶的表达、纯化及定性

将来源于极端嗜热菌属海栖热袍杆菌Thermotoga maritima MSB8的编码碱性果胶裂解酶的结构基因pelA与新型热激质粒pHsh连接, 得到重组质粒pHsh-pelA, 运用mRNA二级结构预测软件对pHsh-pelA的翻译起始区的二级结构进行优化, 得到了具有最佳mRNA二级结构及自由能的质粒pHsh-pelC。将重组质粒pHsh-pelC转入大肠杆菌JM109(DE3)进行表达, 得到了一种极耐热性碱性果胶裂解酶(PelC)。对重组酶的酶学性质研究发现, 该酶的最适反应温度为90oC, 最适反应pH为8.5, 在pH 8.2~9.8之间酶活力稳定, 95oC酶活半衰期为2 h, 并且该酶依赖Ca2+作为活性离子。在工业生产常用温度60oC下, 该酶能够长时间保持稳定, 并具有较高的酶活力。以多聚半乳糖醛酸(PGA)为底物时, 其动力学参数Km值为0.11 mmol/L, Vmax值为327 U/mg。SDS-PAGE结果显示该重组酶的分子量为43 kD, 与理论值相符。基于热激载体pHsh的重组表达系统具有诱导表达简便、诱导方式廉价的优点, 且重组酶热稳定性非常好, 这对该酶的大规模发酵应用具有重要意义。     

冷藏方式对桃采后果胶含量和β-半乳糖苷酶活性的影响

以采后包装和不包装的'大久保'桃果实为材料,分别测定了其在8℃冷藏(A)、8℃冷藏10 d后转入0℃贮藏(B)和0℃冷藏(C)方式下的硬度、出汁率、果胶含量和β-半乳糖苷酶活性的变化.结果表明:在A、B冷藏方式下,包装较不包装处理显著抑制了果实的硬度下降、原果胶含量减少和可溶性果胶含量增加,降低了果实出汁率和β-gal活性;与冷藏期比较,货架期后冷藏方式A和B果实表现为硬度下降、原果胶含量减少、可溶性果胶含量增加,以及出汁率和β-gal活性升高.与冷藏方式A和B比较,冷藏方式C果实的硬度和原果胶含量较高,出汁率和可溶性果胶含量较低;货架期后,不包装的果实硬度和原果胶含量增加,可溶性果胶含量和β-gal活性降低,但包装处理却能减缓上述现象的发生.研究表明,桃采后用30 μm聚乙烯袋包装、于8℃冷藏10 d后转入0℃贮藏处理,能使桃果实在贮藏期保持较低的可溶性果胶含量和较高的原果胶含量和出汁率,并能使桃在货架期正常后熟软化,是贮藏桃的一种较好方式.     

黑曲霉SL2-111固体发酵生产果胶酯酶的研究

目的:研究黑曲霉(Aspergillus niger)诱变菌株SL2-111产果胶酯酶的发酵及浸提条件。方法:通过固体发酵,考察碳氮源、无机盐及培养条件等因素对产酶的影响。采用不同浸提剂与硫酸铵浓度,比较浸提与分离效果。结果:以麸皮为主要原料,培养物最高酶活力可达到32 975U/g鲜曲。产酶最适培养基为:麸皮10g,柚皮粉1.5g,(NH4)2SO41.0g,CaCl20.075g。最佳产酶条件为:28℃,pH 6.5,培养52h。成曲的最佳浸提剂为蒸馏水,果胶酯酶硫酸铵分级沉淀的浓度为50~90%。结论:黑曲霉(Aspergil-lus niger)诱变菌株SL2-111产果胶酯酶的发酵及浸提条件值得进一步研究。     

“果汁中的果胶和果胶酶”的实验改进与创新

从新课程标准所倡导的“自主、合作与探究”的学习方式出发,以开放性的实验思想,对“果汁中的果胶和果胶酶”进行了多方面探究,分析了新课程实验教学的特点,从实验取材、实验设计,实验步骤等多个方面进行了优化,为新课程标准要求的有效实施,提供了新形势下实验设计、实践操作、科学探究的新思路和新方法。     

碱性果胶裂解酶摇瓶发酵条件的研究

利用碱性果胶裂解酶生产菌株Bacillus subtilis WSH02-02进行摇瓶发酵优化,确定了最适种子斜面培养基、种子摇瓶培养基和发酵摇瓶培养基等培养条件,经14h的摇瓶发酵,酶活最高达到8．29U／mL。     

多糖裂合酶及其应用前景

多糖裂合酶(polysaccharidelyase,PL)是一类由原核或真核生物产生的、作用于多糖的降解酶。大多数PL的底物为带负电荷的多糖,它们通过β-消去机制作用于1→4糖苷键,最终产物为不饱和的寡聚糖。PL降解多糖可产生具有新颖理化性质的寡聚物,这为多糖的研究和应用提供了新途径。     

烟草果胶甲基酯酶（PME）基因的克隆及功能分析(英)

为了研究果胶甲基酯酶（pectin methyl-esterase,PME）（EC 3.1.1.11）与植物病毒运动蛋白之间的相互作用,应用RT-PCR方法从烟草(Nicotiana benthamiana)中克隆了PME基因,并测定了全序列(GenBank登录号AY238968).序列分析显示该基因由两个保守的结构域组成(PMEI和pectinesterase). DNA印迹结果表明,该基因在基因组中存在多个拷贝,蛋白质印迹表明,植物总蛋白中存在两种形式的PME蛋白,但RNA印迹结果显示,在烟草细胞中只检测到全长的PME转录产物.酵母双杂交结果表明,PME与水稻矮缩病毒Pns11(具有非特异的核酸结合活性)之间存在相互作用,而没有检测到PME与已知的运动蛋白Pns6之间的相互作用,推测Pns11蛋白可能参与了水稻矮缩病毒粒子的运动.     

水分胁迫对柑橘果皮细胞壁结构与代谢的影响

研究水分胁迫下,盆栽'暗柳橙(Citrus Sinensis Osbeck cv. Anliu)'的果实成熟期果皮细胞壁超微结构、细胞壁物质成分、细胞壁代谢相关酶活性的变化规律及其之间关系.结果表明,在果实发育成熟期,果皮细胞壁代谢相关水解酶果胶酶、纤维素酶、果胶甲酯酶的活性随着水分胁迫的加强而增加,多酚氧化酶活性与果胶酶活性变化趋势相反,果皮细胞壁代谢相关成分离子结合型果胶、共价结合型果胶、半纤维素、纤维素的含量随着水分胁迫的加强而降低,水溶性果胶含量随着水分胁迫的加强而增加,果皮细胞壁超微结构随着水分胁迫的加强而加速解体.     

豆腐柴及其开发利用初步研究

豆腐柴（Premna microphylla Turcz.)是一种重要的野生果胶资源植物。本文简要地介绍了豆腐柴的生物学特性,经济利用价值,栽培技术和加工工艺,并就其在湘西自治州山区的开发利用提出建议。     

香蕉叶片发育过程中不同甲酯化程度果胶的变化

采用免疫荧光标记技术,利用5种识别不同甲酯化程度聚半乳糖醛酸(HGs)果胶及香蕉果胶甲酯酶(PME)的单克隆抗体,对不同株龄香蕉叶片中PME及不同甲酯化程度的HGs定位、相对含量以及PME活性的变化进行分析,为探讨HGs和PME在香蕉生长发育及抵抗逆境过程中的功能和生理机制奠定基础。结果显示:(1)PME主要在组培苗的叶肉和保卫细胞中表达,其表达量及其酶的活性均随着香蕉株龄的增长而呈现下降趋势。(2)叶肉细胞也是各类不同甲酯化程度HGs的主要分布区域,其含量随着香蕉株龄的增长有不同程度的下降,但不同HGs在叶肉细胞中的含量以及在表皮、保卫细胞及叶脉中的分布模式不尽相同,保卫细胞中HGs的甲酯化程度较高。研究表明,香蕉的叶肉细胞是PME及这5种不同甲酯化程度HGs的主要分布场所,且这些HGs在香蕉发育过程中的含量变化趋势与PME相似。