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以人粒巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)、人α8干扰素(hIFN-α8)和分裂细胞核抗原(PCNA)的cDNA定点突变为例,建立了一种新的大区域非连续多核苷酸同步定点突变的方法。经碱变性后的质粒DNA,先用突变引物延伸单链,然后通过PCR扩增得到突变双链DNA。用该方法成功地改造了hGM-CSF基因5′端36个核苷酸中的9个位点、IFN-α8基因5′端39个核苷酸中的9个位点和PCNA基因SD顺序两侧6个和7个核苷酸。与经典的含U单链寡核苷酸定点突变方法相比,本方法突变效率高,并省去了对突变克隆杂交筛选的操作 相似文献
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丁酸钠对CHO-EPO工程细胞株rhEPO表达量的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
以稳定整合有pEDEPO的CHOEPO工程细胞株为研究对象,在无血清条件下,系统观察了05、10、25和50mmol/L4个浓度的丁酸钠作用于该细胞株的情况,结果表明:丁酸钠对CHOEPO工程细胞的生长有明显的抑制作用;影响CHOEPO工程细胞EPO表达,浓度10mmol/L可提高EPO表达量25倍左右,并可持续较长的一段时间;延缓CHOEPO工程细胞在无血清培养时的细胞脱落;提高CHOEPO工程细胞EPOmRNA水平 相似文献
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作者动态性地介绍了美国近几年来基因工程的概况及其成就和进展,更值得注意的是:美国的科研管理、组织、以及研究人员的选拔培养和使用有许多独到之处,可供借鉴。但他们的情况适合于他们的社会制度,我们该怎么办?值得我们认真研究。 相似文献
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翻开近百年微生物学的历史长卷,可以清晰地看到一大批早期的微生物学家,为创建学科、发展祖国的科学事业,筚路兰缕,开启山林,披荆斩棘,发愤图强。我国著名的植物病理学家、植物病毒学家王鸣岐先生就是这样的人。他始终不渝地坚持科学知识的传授与科学人才的培养;始终坚持 相似文献
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本工作成功地将霍乱毒素B亚单位(ctx B)基因插入到带有天门冬氨酸β-半醛脱氢酶基困(asd+)的pYAZ48质粒中,并将它转化至天门冬氨酸β-半醛脱氢酶突变(asd-)鼠伤寒沙门氏菌中。实验结果表明,ctx B亚单位基因能在鼠伤寒沙门氏菌中高效表达,并且表达的蛋白能分泌到细胞外。动物实验结果也表明:该疫苗菌株能在肠粘膜细胞定居;口服及全身免疫均能产生较高的抗体,并能增强动物细胞的免疫功能;对伤寒、霍乱有毒株的攻击有良好的保护效果。该系统的应用为疫苗基因工程提供了一个新的途径。 相似文献
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人粒-巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)是一种重要的造血生长因子.利用基因重组技术构建两个hGM-CSF的E.coli表达菌株,一个为在不改变氨基酸顺序的前提下,对mRNA翻译起始区核苷酸顺序进行优化突变(hGM-CSF(M)),另一个为未突变的对照(hGM-CSF(N)).经酶切电泳、DNA测序、SDS-PAGE和Westernblot等分析鉴定,证明两者均能表达特异性的14.6kDhGM-CSF,但hGM-CSF(M)的表达水平较hGM-CSF(N)提高了1.26倍,占菌体总蛋白的16.9%.mRNA翻译起始区二级结构预测分析表明,优化突变后生成自由能ΔG从原来的-10.2提高至-9.4Kcal,AUG从部分配对状态变为非配对状态. 相似文献
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将荧火虫荧光素酶基因cDNA真核表达载体pGL2导入大肠杆菌HB101、鼠伤寒杆菌LB5000和X4064中,它在这些原核细胞中均有较好的表达效果。它在大肠杆菌HB101的表达量是该基因cDNA原核表达载体pUHF12-1的表达量的30倍。采用计算机PC/GENE程序包分析,pGL2的SV40早期启动子序列中含有SV40基因组HindⅢB片断中一段长为49bp的DNA序列,这一序列可能就是SV40基因组HindⅢB片断的原核增强子功能的决定序列,正是该序列使pGL2在细菌中获得了高效表达。 相似文献