棉铃虫核多角体病毒p10基因的序列及转录分析

为了利用棉铃虫核多角体病毒（HaSNPV）p10基因的启动子构建重组病毒杀虫剂及表达系统,应用末端测序法和引物步移法测定了p10基因的序列,并应用Northern杂交和引物延伸实验对该基因进行了深入的转录特性分析,HaSNPV p10基因被定位于基因组DNA的115.4kb-115.6kb处,转录方向与多角体基因相反,在其上下游分别发现了p26和p74基因。转录分析结果确定了p10基因是个极晚期基因,其转录从杆状病毒晚期转录保守序列GTAAG的第二个A开始,转录产物大小约为430nt。HaSNPV p10基因最早可检测到的转录是在病毒感染后的20h,随后其转录产物量迅速放大,到感染后72h达到非常高的水平。围康时相分析同时还检测到一个大小为1300nt的产物,推测该产物为p26和p10通读的转录产物。对HaSNPV P10蛋白序列的分析表明,该蛋白第6－44位及第51－65位氨基酸序列处含多个典型的卷曲螺旋七聚体重复结构,两片段间相隔6个氨基酸残基,在该蛋白序列的第20－34位与第51－65位存在L－X（2）－L－X（10）－L的亮氨酸重复。Helical net分析表明,HaSNPV P10的疏水氨式酸分布为两个集簇区,两者互为180度转角。     

昆虫杆状病毒晚期启动子在大肠杆菌中启动CAT基因表达

将油桐尺蠖（Ｂｕｚｕｒａｓｕｐｐｒｅｓｓａｒｉａ）核多角体病毒晚期基因──多角体蛋白基因启动子及５′端编码区,以两种不同方式置于缺乏启动子的氯霉素乙酰基转移酶（ＣＡＴ）基因上游,使其分别终止在不同翻译终止位点,其宿主菌具有明显不同的氯霉素抗性,最高达２００ｍｇ／Ｌ　ＬＢ培养基以上,表明昆虫病毒启动子能启动原核基因表达。对多角体蛋白基因启动子能在大肠杆菌中有效工作的原因进行了讨论。     

棉铃虫单核衣壳核多角体病毒3个bro基因的原核表达与抗体制备

根据棉铃虫单核衣壳核多角体病毒(HasNPV)基因组全序列,设计引物,用PCR的方法扩增得到bro-a、bro-b和bro-c三个全长基因。将这三个基因的片段分别克隆至原核表达载体pProExHTb,经IFTG诱导,在E．coliDH50菌株中得到了目的基因的高效表达。表达的目的蛋白大小分别为32kDa、64kDa和58kDa,经SDS-PAGE分离纯化,免疫新西兰大白兔制备了多克隆抗体。抗体经1：2500倍稀释后用于Westem Blot分析,获得特异性显色信号,所制备的三种抗体适合用作bro基因的功能的进一步研究。     

An efficient method of constructing homologous recom binant baculovirus with PCR-amplified fragments

Baculovirus is a rod-shaped virus containing a large circular dsDNA genome with the size of 80—180 kb[1]. Baculoviruses have been used as insecticides for biological control of forest and agricultural pests[2]. In addition, baculovirus is of great interest as it can be used as efficient eukaryotic expression vector[3], surface display vector[4], and gene therapy vector[5]. Till April 2002, the complete genome sequences of 13 baculoviruses have been reported. The functional genomics has now…     

棉铃虫单核衣壳核多角体病毒(HaSNPV)Hind III-L片段的序列分析

本文报道了棉铃虫单核衣壳核多角体病毒 (Helicoverpaarmigerasingle nucleocapsidnucleopolyhedrovirus,HaSNPV)基因组的HindIII L片段的全序列。该片段全长 2 6 35bp ,包括 5个有意义的开放阅读框 :HaSNPVORF2 2 7,晚期表达因子 10基因 (lef10 ) ,vp10 5 4基因 ,Ac5 5 (AcMNPVORF5 5的同源基因 ) ,Ac5 6 (AcMNPVORF5 6的同源基因 )。与其它 6种杆状病毒的氨基酸序列比较表明 ,HaSNPV的lef10基因与甜菜夜蛾核型多角体病毒 (SeMNPV)的同源性最高 ,为6 4 % ,与冷杉毒蛾核型多角体病毒 (OpMNPV)的同源性最低 ,为 4 3% ;HaSNPV的vp10 5 4基因与SeMNPV的同源性最高 ,为 6 5 % ,与OpMNPV的同源性最低 ,为 4 9%。序列比较表明 ,HaSNPV的LEF10与VP10 5 4蛋白与其它 6种杆状病毒具有相同的保守区和亮氨酸拉链 (leucinezipper)     

猴ESc—615基因重组蛋白质片段的表达纯化和多克隆抗体的制备

ESc 6 15是从猕猴中克隆到的一个在附睾中特异性表达的新基因。为了从蛋白质水平深入研究其在精子成熟中的作用 ,在大肠杆菌中表达了该蛋白质的一条含 310个氨基酸的肽段 ,并用其免疫新西兰大白兔 ,得到了滴度为 10 0 0 0 0的抗血清 ;用Western印迹方法鉴定发现该抗血清可检测到 3ng的抗原量 ;并在大鼠附睾组织抽提液中检测到一种能与该抗血清作用的大小约 6 3kD的蛋白质 ,此蛋白质大小与作者实验室在大鼠中克隆到的此基因的同源蛋白质相同 ;利用该抗体通过免疫组化分析确定了ESc 6 15为分泌蛋白质 ,并能与精子结合 ;该抗血清经抗原吸附后阳性结果消失。该高滴度多克隆抗体的获得为ESc 6 15功能的探索提供了一条途径。     

中国棉铃虫核多角体病毒基因组 Xba I-I片段的序列分析

报道了棉铃虫单核衣壳核多角体病毒(HaSNPV)XbaI-I片段的序列结构.该片段在基因组上定位于18.4～22.8 m.u., 包括8个完整的开放阅读框架和p47的5′端部分序列其中ubiquitin, 39K/pp31, lef-11, p47, Ac34, Ac38和Lsel25 homologue 7个基因是杆状病毒的同源基因, 另外两个orf507和orf1 080是HaSNPV的特有基因,且具有典型的早期表达基因启动子的特征,经软件分析发现这两个基因推导的产物具有典型的跨膜压结构.序列比较分析表明, ubiquitin基因与其它杆状病毒的同源基因有相同的保守区, 39K/pp31具有和其它杆状病毒同源基因不同的启动子结构.     

布尼亚病毒目新分类概述

布尼亚病毒目中许多病毒是新发现的, 而且对人类健康构成威胁或潜在威胁。本文结合国际病毒分类委员会(ICTV) 2017年第十次报告, 针对新列的布尼亚病毒目的最新分类系统, 总结了该类病毒 ICTV 分类的历史变化情况, 对其下属各病毒科的分类、中英文定名、代表种、病毒形态、病毒基因组结构、编码蛋白、病毒主要传播媒介、病毒感染宿主、地理分布、理化特性等进行了介绍, 并且基于病毒基因组的编码RdRp的基因序列对9个科13个属的布尼亚病毒做了系统发育分析。     

HzAm1细胞rpL13基因的序列分析及病毒感染对其转录水平的影响

从美洲棉铃虫细胞(HzAM1)中克隆了核糖体大亚基蛋白L13(Ribosomal protein L13,RpL13)的cDNA及其基因组DNA序列,并进行了序列分析.其编码框为666bp,无内含子,预测编码大小约为25 kDa的蛋白.通过与其它15种动物的RpL13编码框序列进行进化分析,发现聚类结果与传统物种分类一致.转录研究表明,棉铃虫核型多角体病毒(Helicoverpa armigera single nucleocapsid nucleopolyhedrovirus,HaSNPV)感染HzAm1后使rpL13在细胞内的转录水平降低,在病毒感染后96h,rpL13 mRNA的拷贝数降到对照健康细胞的8%.     

棉铃虫病毒HaSNPV fp25k基因的克隆表达及抗体制备

根据棉铃虫单核衣壳核多角体病毒(Helicoverpa armigera single nucleocapsid nucleopolyhedrovirus,HaSNPV)fp25k基因的序列,设计引物,引入适当的酶切位点,利用PCR扩增出基因片段.将该基因片段克隆至原核表达镲载体pProEXHTb,经IPTG诱导,在大肠杆菌DH5α中获得了高效表达,表达产物的大小为32kDa.纯化蛋白产物免疫家兔制备抗血清.该抗血清可与原核表达的GST-FP25K融合蛋白及在感染的昆虫细胞中表达的FP25K蛋白发生特异性免疫反应.该抗体的获得为深入研究FP25K蛋白的功能提供了基础.