棉铃虫单核衣壳核多角体病毒3个bro基因的原核表达与抗体制备

根据棉铃虫单核衣壳核多角体病毒(HaSNPV)基因组全序列,设计引物,用PCR的方法扩增得到bro-a、bro-b和bro-c三个全长基因.将这三个基因的片段分别克隆至原核表达载体pProExHTb,经IPTG诱导,在E.coli DH50菌株中得到了目的基因的高效表达.表达的目的蛋白大小分别为32kDa、64kDa和58kDa,经SDS-PAGE分离纯化,免疫新西兰大白兔制备了多克隆抗体.抗体经12500倍稀释后用于WestemBlot分析,获得特异性显色信号,所制备的三种抗体适合用作bro基因的功能的进一步研究.     

棉铃虫单核衣壳核多角体病毒组织蛋白酶基因的序列分析和进化研究

对棉铃虫单核衣壳核多角体病毒(HaSNPV)的组织蛋白酶(ν-cath)基因进行了序列分析,此基因编码区长1098bp,预计编码一个366个氨基酸的蛋白产物.序列分析表明,HaSNPV的V-CATH蛋白与其它杆状病毒的同源蛋白具有相似的保守结构并保留有相同的酶活性位点,根据已知的杆状病毒组织蛋白酶序列构建了ν-cath基因的进化树,发现HaSNPV的ν-cath位于NPV组中一个单独的分枝,结合ν-cath基因在棉铃虫病毒基因组中的位置与其它NPV有较大不同,推测HaSNPV的ν-cath基因可能拥有特殊的进化历程.     

杆状病毒出芽病毒粒子膜融合蛋白的研究进展

杆状病毒是一类感染节肢动物的病原微生物,其基因组为双链环状DNA,大小为80～180kb。杆状病毒科包括核多角体病毒属(Nucleopolyhedrovirus,NPV)和颗粒体病毒属(Granulovirus,GV),其中NPV根据病毒粒子在包膜中的粒子数目不同而划分为多核衣壳核多角体病毒(multiple nucleocapsid     

杆状病毒作为基因治疗载体的研究进展

杆状病毒是昆虫专一性的病原病毒.近来的研究表明杆状病毒能进入哺乳动物细胞, 但病毒自身不能在哺乳动物细胞中复制, 感染也不引起细胞病变.另外,已经证明杆状病毒能在体外或体内高效地转导许多类型哺乳动物细胞,并且能得到固定表达细胞系,显示了杆状病毒作为基因治疗载体有着良好的应用前景.综述了该领域的最新研究进展并探讨了其发展趋势.     

一种新颖的棉铃虫单粒包埋核多角体病毒表达系统

将含有低拷贝数的mini-F replicon、一个卡那霉素抗性基因和一个lacZα基因8.6kb的DNA片段经同源重组置换到棉铃虫核型多角体病毒基因组中的多角体蛋白基因内,构建了既能在E.coli内复制又可在昆虫细胞内复制形成完整的病毒粒子棉铃虫核型多角体病毒Bacmid(HaBacmid-HZ8).另外将HaSNPV的多角体蛋白基因和P10启动子序列取代pFastBacDual质粒上的AcMNPV的多角体启动子序列和P10启动子序列,构建插入HaSNPV多角体蛋白基因和 P10启动子序列的HapFastBacPhP10供体质粒.利用HapFastBacPhP10供体质粒将eGFP基因转位至HZ8的Tn7附着位点上,随后将含有eGFP基因的重组HaBacmid DNA转染至HZAm1细胞内.转染5d后,细胞核内能形成典型的多角体,在萤光显微镜下观察到细胞内显示出强烈的绿色萤光.结果证明我们构建的HaBac to Bcac 表达系统能有效的表达外源基因.     

中国棉铃虫单粒包埋核多角体病毒（HaSNPV）HindⅢ-Ⅰ片段的序列分析与基因排列研究

对中国棉铃虫单粒包埋核多角体病毒（HaSNPV)基因组中的HindⅢ-Ⅰ片段的序列进行分析,该片段全长7501nt,包括10个开放阅读框：AcMNPV ORF111的同源基因（Ac 111),晚期表达因子2（lef-2）基因,病毒核壳结构蛋白p24基因、gp16基因、多角体包膜蛋白（polyhedron envelope protein,pep)基因、AcMNPV ORF63的同源基因（Ac63),38.7kD基因,晚期表达因子1（lef-1) 基因,及两个特有基因HaSNPV orf591和HasSNPV orf435。基因组的排列比较分析发现与AcMNPV有较大区别。     

第34届国际无脊椎动物病理学会(SIP)会议简介

第 34届国际无脊椎动物病理学会议于 2 0 0 1年 8月 2 5日 - 30日在荷兰Ｎｏｏｒｄｗｉｊｋｅｒｈｏｕｔ召开 ,来自美国、加拿大、英国、德国、法国、丹麦、荷兰、日本、中国等 30个国家的代表 4 0 0余人参加了本次会议。大会共交流论文 32 8篇。其中大会报告三个 :1.果蝇免疫系统的信号传导　 2 .由杆状病毒介导的新的调节细胞凋亡的机制　 3.昆虫及昆虫病原线虫间的宿主 寄生物相互作用关系 ;专题讲座 18个 (含 78个报告 ) ;分组报告 12 1个 (病毒学 4 2个、真菌 2 8个、线虫 14个、细菌 2 3个、原生动物 6个、交叉讨论 8个 ) ;墙报 12 6…     

油桐尺蠖单粒包埋核型多角体病毒(BusuNPV)BamHI-H片段的序列分析

对油桐尺蠖单粒包埋核型多角体病毒(Buzura suppressaria single-nucleocapsid nucleopolyhedrovirus, BusuNPV)基因组中BamHI-H片段的序列进行分析,该片段全长2 422 bp,包括三个开放阅读框:p47基因(AcMNPV ORF40的同源区)的5′端,完整的组织蛋白酶基因(cathepsin)(AcMNPV ORF127的同源区)和p74基因(AcMNPV ORF138的同源区)的3′端.序列比较分析表明,BusuNPV的这三个基因与其它杆状病毒的同源基因具有相同的结构保守区.BusuNPV基因组BamHI-H片段上这三个基因的排列顺序完全不同于AcMNPV相应基因的排列顺序.     

HaSNPV的9个基因的转录谱分析

使用反转录和实时荧光定量PCR技术,我们对HaSNPV的几个预期的早期基因、早晚期基因、晚期基因、极晚期基因的转录时相进行分析,结果表明:这些基因的起始转录时间与其自身的启动子类型基本是一致的。但是预期的早期基因pkip晚期才开始转录;预期的早晚期基因ha107早期不转录,仅在晚期转录。这些基因的转录水平一般都在病毒感染细胞72h后达到最高,并且极晚期基因polyhedrin的转录水平明显高于其它基因。Iap2的转录水平仅次于polyhedrin,表明它可能是一个功能基因。与AcMNPV的p10不同,在HaSNPV/HzAM1系统中p10的转录水平并不高。     

湖北地区普通人群卡波氏肉瘤相关疱疹病毒感染的血清学分析

卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)可导致人类产生卡波氏肉瘤(KS),即AIDS病人最为常见的肿瘤.广泛的流行病学研究显示,KSHV的流行与KS相似并呈现明显的地域分布型.为调查KSHV在汉族普通人群中的感染情况,我们以KSHV ORF65编码的小衣壳蛋白(small capsid protein)为抗原,采用酶联免疫(ELISA)分析方法,对湖北地区560例汉族普通人群血清样品进行了KSHV抗体检测.在检测的560份血样中,KSHV抗体总阳性率为5.2%,其中,男性阳性率为5.7%,女性为4.5%.统计学分析显示,KSHV感染率在男女性别上无差异(P=0.542),但与年龄有一定的相关性10岁以下儿童群体较之10岁以上人群KSHV感染率具有显著的统计学差异(P=0.006,OR=6.692,95%CI=1.710-26.198);60岁以上的老年人群KSHV感染率有上升趋势,但无统计学明显差异(P=0.052).上述结果表明,KSHV在这一地区的流行与西方成年人群的感染率相似,但在儿童群体中的相对较高的感染率与一些非洲地区的接近.由此提示在该群体可能存在特殊的传播模式.