松子壳多糖对小鼠主要免疫细胞功能的影响

目的探讨松子壳多糖（pine nut shell polysaccharide,PSP）对小鼠主要免疫细胞的影响。方法应用MTT法测定PSP对小鼠脾淋巴细胞的毒性和对ConA或LPS诱生小鼠脾T、B淋巴细胞的转化,用中性红吞噬试验测定腹腔巨噬细胞的吞噬功能,应用乳酸脱氢酶释放法测定NK细胞的杀伤活性。结果 PSP对脾细胞毒性很低,各种浓度对小鼠脾淋巴细胞的增殖均有较强的促进作用（P〈0.01）;PSP在浓度50～300μg/mL时,明显促进T淋巴细胞的转化（P〈0.01）,但是当浓度达到300μg/mL时表现出一定的抑制作用（P〉0.05）;PSP在25～200μg/mL时显著促进了小鼠脾B淋巴细胞的转化（P〈0.05）,但是当浓度达到300μg/mL时,抑制作用极显著（P〈0.01）;不同浓度均可以增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红的能力及其代谢功能,当浓度在100μg/mL时能显著的促进巨噬细胞吞噬中性红的能力（P〈0.01）;PSP在浓度100～300μg/mL时,能极显著的促进NK细胞对Yac-1的杀伤作用（P〈0.01）,当浓度达到400μg/mL,对NK细胞杀伤性的促进作用开始减弱。结论 PSP对小鼠脾淋巴细胞的毒性较低,能增强免疫细胞活性,有望成为新一代免疫调节剂。     

皮质抑素在内分泌系统中的作用

皮质抑素（cortistatin, CST）是一种新型神经内分泌肽,因其在皮质中大量表达并抑制皮质的功能而得名,属于生长抑素基因家族新成员,与生长抑素(somatostatin)具有结构同源性．CST能与生长抑素受体、生长素释放肽受体、Mas相关基因2受体结合,发挥多种生物学效应,如诱导慢波睡眠、参与炎症过程、调节神经内分泌．研究表明,就内分泌系统而言,CST是生长抑素的一种天然替代物．本文重点从细胞、整体水平对CST在内分泌系统中的作用做一简介．     

慢病毒载体介导GHRH基因在小鼠肌肉组织表达及对动物生长的影响

人与动物体内生长激素受生长激素释放激素(Growth Hormone Releasing Hormone,GHRH)与生长激素抑制激素(Somatostatin,SST)两种因子共同调节,在体内表达外源GHRH,可以提高体内GH基础水平,进而达到促进体内GH释放,加速动物生长的效果.对慢病毒载体系统加以改造,使之成为C...     

牛β-酪蛋白5''端上游调控序列的克隆和序列分析

该文用ＰＣＲ扩增了牛β－酪蛋白基因５‘－端上游调控序列,并对其进行了克隆和序列分析。采集成年母牛肝,提取ＤＮＡ。在牛β－酪蛋白基因外显子１和上游调控区内设计引物,扩增其上游调控序列。两条引物长均为１９个核苷酶,引物间跨度为６３５ｂｐ。以牛肝ＤＮＡ为模板,进行ＰＣＲ扩增,扩增产物在２％琼脂糖凝胶上电泳,可见特异的目的条带。     

未知基因P2.18

用根据GRF设计的引物,以猪的下丘脑总RNA和mRNA为模板、进行RT—PCR扩增.将扩增产物纯化并克隆到T载体(pGEM3—Zf),自动测序仪测定其序列.发现所克隆的基因并非GRF基因.应用BLAST软件对其在INTERNET作了分析,未能确定为何种基因.     

外源丙氨酸提高蜘蛛牵引丝蛋白天然基因在原核系统中的表达

蜘蛛丝蛋白天然基因的体外表达受诸多因素的限制。本研究在获得生长于中国的Nephila clavipes蜘蛛牵引丝蛋白Spidroin2 cDNA（Genbank Accession No. AF441245）的基础上,利用限制性内切酶双酶切反应构建含有Spidroin2 cDNA的重组表达质粒pET-28b(+)-Sp。将该质粒转化至大肠杆菌BL21（DE3）宿主细胞感受态菌中,以不同浓度的IPTG进行诱导,并通过诱导时间、培养温度、加入外源丙氨酸等途径提高Spidroin2 cDNA的表达量,同时利用多克隆抗体对表达产物进行Western blot检测。重组质粒pET-28b(+)-Sp的测序结果表明Spidroin2 cDNA基因以正确的阅读框插入到原核表达载体中;SDS-PAGE结果表明菌体表达蛋白中存在着大小约为31 kDa的目的蛋白带（加入外源丙氨酸条件下）,Western blot检测结果进一步证实,目的基因在大肠杆菌中得到正确表达。本研究证实,蜘蛛牵引丝蛋白Spidroin2 cDNA可在原核细胞内正确表达,外源丙氨酸的加入对于提高天然蜘蛛丝蛋白基因在原核系统的表达作用明显。     

CMV与SP双启动子增强外源基因在小鼠骨骼肌中的表达效率

构建分别含有CMV、肌肉特异启动子SP及双启动子CMV-SP的真核报告基因EGFP表达载体（pCMV-EGFP、pSP-EGFP及pCMV-SP-EGFP）和生长激素释放因子（GRF）表达载体（pCMV-GRF、pSP-GRF和pCMV-SP-GRF）.将3种EGFP表达质粒分别注射至小鼠骨骼肌.注射后1周、2周、3周以及4周时,分别提取肌肉组织RNA,应用半定量RT-PCR检测报告基因（EGFP）的表达量,发现pCMV-SP-EGFP组EGFP表达量显著高于pCMV-EGFP组和pSP-EGFP组（P<0.01）;经荧光检测得到了较强的荧光信号.将3种GRF表达质粒分别注射至小鼠骨骼肌,在注射后每10 d记录小鼠累积增重,采血并用RIA法测定血清胰岛素样生长因子Ⅰ（IGF-Ⅰ）浓度,结果pCMVSP-GRF组累积增重、IGF-I浓度分别高于生理盐水组、pCMV-GRF组和pSP-GRF组（P<0.05）.结果表明：CMV与SP两种启动子组合,在小鼠骨骼肌内使外源基因表达效率提高.本研究为提高外源基因在肌肉组织的表达提供了新的途径.     

肝脏去唾液酸糖蛋白受体及其应用

去唾液酸糖蛋白受体 (ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒ,简称ＡＳＧＲ)是数量丰富的一种异源低聚物的内吞受体 ,主要存在于肝脏实质细胞朝向窦状隙一侧的细胞膜表面[1] ,具有对糖的特异性 ,并有特定的生物学功能 ,所以又称为肝糖凝集蛋白或肝凝集素。由于各种糖蛋白在用酶水解或用酸解除去末端唾液酸后 ,暴露出的次末端是半乳糖残基 ,所以ＡＳ ＧＲ的糖结合特异性实际上在于半乳糖基 ,故又称半乳糖特异性受体。ＡＳＧＲ的主要功能是去除去唾液酸糖蛋白和调亡细胞、清除脂蛋白 ,同时又是肝病毒的侵入位点[2 ] 。ＡＳ Ｇ…     

脑红蛋白与Na^＋，K^＋-ATP酶β2亚基的相互作用及作用位点的鉴定

为研究神经系统特异性携氧蛋白———脑红蛋白 (NGB)保护神经元耐受缺氧损伤的分子机制 ,利用酵母双杂交系统从人胎脑cDNA文库中筛选与其有相互作用的蛋白质。序列分析表明 ,其中一个克隆的编码产物与Na ,K ATP酶 β2亚基 (NKA1b2 )序列一致。随后采用PCR方法从人胎脑cDNA文库中扩增获得NKA1b2全长cDNA。蛋白质结合实验表明 ,原核表达的NGB与体外转录翻译得到的NKA1b2在细胞外有结合作用。免疫共沉淀实验证明二者在生理条件下能够以复合物的形式存在。利用NGB系列短截体研究相互作用的位点发现 ,NGB蛋白N末端 1～ 75位氨基酸可与NKA1b2结合 ,但结合力很弱 ,而其C末端 75个氨基酸则与NKA1b2无结合作用 ,由此推测NGB蛋白整体的三维结构是结合所必需的。     

体外培养大鼠星形胶质细胞液压冲击损伤的研究

目的：研究大鼠星形胶质细胞液压冲击损伤后形态学及蛋白质组学表达变化。方法：建立体外培养星形胶质细胞液压冲击损伤模型。原代培养SD大鼠脑皮质星形胶质细胞,随机分为损伤组与对照组,对照组给予（0.2±0.01）MPa液压冲击损伤,损伤后不同时间点观察细胞形态学变化;双向凝胶电泳技术分析液压冲击损伤后蛋白质组学表达变化。结果：星形胶质细胞在液压冲击损伤后发生了显著的形态学改变,损伤后2h星形胶质细胞出现了细胞水肿、细胞皱缩、细胞连接断开和坏死,损伤后24h、48h细胞胞体肥大、突起增粗明显,部分区域细胞反应性增生明显。液压冲击损伤后,星形胶质细胞蛋白质表达谱发生了显著改变,损伤后有13个蛋白点表达发生显著改变,其中5种蛋白得到质谱鉴定,分别是肌动蛋白结合蛋白、破解蛋白、磷酸甘油酸变位酶1、NADH脱氢酶10亚基和膜联蛋白1。结论：液压冲击损伤能够引起星形胶质细胞发生显著的形态学改变和蛋白质谱表达改变,损伤后表达改变的蛋白质可能与星形胶质细胞的损伤后应激反应相关。