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目的: 建立皮质酮诱导的PC12细胞梯度应激损伤模型,为细胞应激水平的评估和细胞应激损伤调控研究提供实验基础和对象。方法: 通过检测不同浓度皮质酮(0~1 000 μmol/L)在经过不同干预时间(8~48 h)后PC12细胞活力,观察皮质酮对细胞活力的影响,筛选最佳干预条件的细胞模型。分光光度法和微量法检测细胞模型的关键应激指标(MDA、SOD、NADH、LDH),对模型进行评价。结果: 当皮质酮浓度在200 μmol/L以下且干预时间为12 h时,细胞活力在半数失活率以下,可减少各组由于细胞活力下降而产生的混杂因素。 与空白对照组比较,皮质酮浓度依赖性地升高模型组的MDA、NADH和LDH水平,降低SOD水平(P<0.01),符合梯度应激模型的构建要求。结论: 成功建立了PC12细胞梯度应激损伤模型,在干预时间为12 h的情况下,干预浓度为0 μmol/L、25 μmol/L、50 μmol/L、100 μmol/L、150 μmol/L、200 μmol/L,使得细胞模型应激损伤程度梯度增加,可作为开展细胞应激损伤评估及调控实验的基础和对象。 相似文献
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本文回顾了军事医学科学院成立以来在应用生理学研究领域所取得主要研究成果.军事医学科学院在应用生理学基础研究方面,先后发现了藏族人适应高原的部分分子机制、脑红蛋白抗低氧生物学作用、冷习服形成过程中微循环和免疫功能变化规律、热衰竭病理学变化机制和致热习服因子,确定了中国成年人蛋白质、维生素A,B1,B2,C的需要量,发现了维生素A营养状况与视网膜盲点大小的关系;在应用生理学应用研究方面,研制了治疗高原病的埃他卡林、复方党参和高原轻便加压舱以及促进冻伤康复的乳膏和相关治疗技术,提出了热环境军事作业人员的水盐需要量及其补给方法、热环境劳动的安全上限、耐受上限和耐受极限值,合成了长效维生素B1,B2和稳定性维生素C,开发出中国第一代结晶氨基酸注射液.上述研究成果为中国人民解放军的卫勤保障工作提供了理论指导和技术支撑,同时也为今后的研究工作奠定了坚实的基础. 相似文献
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酵母双杂交相关方法的改良及应用 总被引:1,自引:0,他引:1
对酵母双杂交实验过程中较为耗时的阳性克隆鉴定过程进行改进,以期建立一种快速有效的鉴定方法。分别采用液氮冻融法、超声破碎法、渗透压破壁法以及煮沸裂解法裂解酵母细胞,获得质粒作为PCR模板,直接测序鉴定筛选到的相互作用蛋白。以液氮冻融法和超声破碎法裂解细胞获得的质粒为模板进行PCR,得到特异的产物,测序鉴定结果明确,与经典的鉴定方法相比效果相当,但更加经济快捷;而渗透压破壁法和煮沸裂解法则效果不好。说明前两种方法可代替常规方法用于阳性克隆的鉴定,从而加快酵母双杂交实验中大量阳性克隆的筛查工作。 相似文献
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通过对呼吸氮氧混合气模拟缺氧(4800m,3h)的家兔肺表面活性物质变化的研究,我们发现:肺支气管灌洗液中磷脂含量下降59.82%(P<0.05)。肺匀浆中磷脂含量变化,特别是细胞内磷脂呈代偿增加的趋势,稳定性比率随时间的延长而逐渐下降,在15min时,缺氧组与对照组稳定性比率分别为0.88±0.02和0.98±0.01(P<0.05)。缺氧3h,呼吸参数如潮气量,每分钟通气量和食道内压均无显著变化,缺氧组和对照组用以反映P-V关系的A值分别为25.90±3.19和25.16±2.30;B值分别为7.94±1.82和6.56±1.09(P<0.05)。本实验结果说明缺氧(4800m,3h)致肺泡内衬活性物质下降,而在缺氧初期,细胞内磷脂有代偿增加的倾向,这种变化对呼吸功能及肺应变能力无影响。 相似文献
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本实验观察了活性钙调素(CaM)含量和CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMkinaseⅡ)活性在急性低氧(模拟海拔7000m,5h)和常氧对照大鼠脑子组织中的变化。用流式产胞仪(FACS)所测两组动物脑皮层细胞的CaM,平均荧光强度分别为40.0±4.9和46.1±5.8,急性低氧组明显低于常氧对照组(P<0.05);用同位素液闪计数法所测两组动物皮层脑匀浆提取液中CaMkinaseⅡ活性,分别为184.3±8.1和198.8±9.4pmolPi·min-1·mg-1pro,急性低氧组明显低于常氧对照组(P<0.01)。结果提示CaM和CaMkinaseⅡ对低氧较为敏感,急性低氧时中枢神经细胞结构或功能的紊乱可能与活性CaM的含量减少和CaMkinaseⅡ活性能下降有关。 相似文献
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低氧大鼠肺动脉内皮细胞VEGF变化与PKC活性关系的探讨 总被引:6,自引:1,他引:5
目的:探讨低氧培养大鼠肺动脉血管内皮细胞VEGF的表达变化与PKC活性的关系。方法:培养大鼠肺动脉血管内皮细胞,观察低氧(1%O2)培养不同时间大鼠肺动脉血管内皮细胞浆、膜PKC活性和培养液中VEGF水平变化;加入PKC抑制剂(staurosporine)后,测定低氧、常氧培养不同时间二者的变化。结果:低氧时膜PKC活性和培养液中VEGF水平明显升高(P<0.01)。而加入PKC抑制剂后,常氧和低 相似文献
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目的 筛选中缅树鼩微卫星分子标记,逐步填补中缅树鼩特异性遗传标记的空白.方法 建立中缅树鼩基因小片段插入文库,利用5’端地高辛标记的(CA)15探针从约1500个菌落中选出36个阳性克隆.对这些克隆进行测序,发现其中15个含有重复序列,其中1个为重复克隆,1个因两端序列太短而不能设计引物.结果 用Primer3软件设计... 相似文献