全文获取类型
收费全文 | 39046篇 |
免费 | 1842篇 |
国内免费 | 2222篇 |
出版年
2024年 | 32篇 |
2023年 | 405篇 |
2022年 | 378篇 |
2021年 | 764篇 |
2020年 | 783篇 |
2019年 | 966篇 |
2018年 | 866篇 |
2017年 | 817篇 |
2016年 | 965篇 |
2015年 | 1238篇 |
2014年 | 2107篇 |
2013年 | 3071篇 |
2012年 | 1676篇 |
2011年 | 1718篇 |
2010年 | 1473篇 |
2009年 | 1747篇 |
2008年 | 1830篇 |
2007年 | 1836篇 |
2006年 | 1752篇 |
2005年 | 1668篇 |
2004年 | 1516篇 |
2003年 | 1474篇 |
2002年 | 1352篇 |
2001年 | 1017篇 |
2000年 | 954篇 |
1999年 | 928篇 |
1998年 | 905篇 |
1997年 | 803篇 |
1996年 | 726篇 |
1995年 | 781篇 |
1994年 | 747篇 |
1993年 | 611篇 |
1992年 | 627篇 |
1991年 | 488篇 |
1990年 | 481篇 |
1989年 | 379篇 |
1988年 | 430篇 |
1987年 | 347篇 |
1986年 | 290篇 |
1985年 | 384篇 |
1984年 | 456篇 |
1983年 | 289篇 |
1982年 | 333篇 |
1981年 | 165篇 |
1980年 | 130篇 |
1979年 | 132篇 |
1978年 | 79篇 |
1977年 | 45篇 |
1976年 | 49篇 |
1973年 | 31篇 |
排序方式: 共有10000条查询结果,搜索用时 125 毫秒
971.
马铃薯卷叶病毒基因间隔区的克隆及序列分析 总被引:6,自引:0,他引:6
根据已报道的马铃薯卷叶病毒基因组序列.设计合成一对特异性引物,以马铃薯卷叶病毒中国分离株(PLRV-Ch)的RNA为模板,反转录合成cDNA第一条链,经PCR扩增后克隆于pUC19质粒中,进一步用PCR鉴定、限制酶切分析和序列分析,结果表明:PLRV-Ch基因间隔区由197个核苷酸组成,与国外报道的荷兰PLRV-N加拿大PLRV-C,澳大利亚PLRV-A,苏格兰PLRV-S各株系核苷酸序列具有很高的同源性,同源率依次为99%、98%、93%、98%。 相似文献
972.
应用真彩色医学图像分析技术,对51例角结膜缘上皮良、恶性病变(其中上皮增生19例,不典型增生6例,原位癌14例,鳞状细胞癌12例)进行了DNA原位定量分析研究.结果显示:原位癌和鳞状细胞癌DNA含量明显增加,多为高倍异倍体细胞,DNA直方圆明显右移,峰值主要位于>5C处,≥5C细胞分别占78.89%和78.31%;上度增生病变DNA含量较低,多为低倍整倍体细胞,DNA直方图峰值位于2C~4C处,2C~4C细胞占88.59%;上皮不典型增生病变DNA含量介于良性病变和癌之间,DNA直方图逐渐右移,2C~4C细胞占58.62%,≥5C细胞占41.38%。以上数据经统计学处理各组间有显著性差异。表明DNA倍性程度与肿瘤的增殖程度呈正相关,高倍异倍体细胞随肿瘤恶性程度的增高而增多。作者认为DNA原位图像定量分析可为角结膜缘上皮良、恶性病变的诊断、分级及早期发现癌变趋势提供一个可靠的参考指标。 相似文献
973.
原位缺口平移标记断裂DNA技术及其在检测流行性出血热尸检和实验动物组织中细胞凋亡和早期死亡的应用 总被引:1,自引:0,他引:1
原位缺口平移技术(ISNT)已被用于检测细胞核中DNA断裂鉴别尸检组织中细胞的凋亡和坏死断裂、流行性出血热(EHF)组织中存在散在单个细胞变性死亡和灶性梗死样坏死,前者带有细胞凋亡的特征。本文以EHF肝脏和实验性病毒感染鼠脑组织为例,应用缺口平移法,在DNA聚合酶或Klenow酶的作用下,将地高辛标记的dUTP掺入合成到DNA的断裂部位,通过碱性磷酸酶标抗地高辛抗体免疫组化法显示细胞DNA的断裂,检测和鉴别细胞的凋亡和坏死。为分析死后解剖时间间隔及组织固定时间对该方法的影响,本文选用死后2~140h尸检、经常规固定石蜡包埋后存放10~35年的标本和在10%福尔马林固定了10~35年之后再进行常规处理的标本。实验时用蛋白酶K(PK)消化前后对比并分别在标记反应液中略去DNA聚合酶作为阴性对照,用DNA酶消化组织人为制造DNA缺日作为阳性对照。结果发现,未经PK消化的组织,仅灶性肝细胞核ISNT标记阳性,经PK消化后,散在的带有凋亡特征的肝细胞胞核也出现阳性,灶性肝细胞胞核标记染色增强,但无论是蛋白酶消化与否,明确梗死样坏死的肝细胞均不被标记。结果还发现,死后2~24h内尸检组织和长时间(10~34年)存放的石 相似文献
974.
采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从广东省一例慢性丙型肝炎病人血清中获得丙型肝炎病毒(HCV)5'端非编码区(5'NCR)302bp的cDNA片段,经补齐和提纯后插入pUC19质粒,获得的重组体pUN进行序列测定。将pUN的目的基因亚克隆进体外转录载体pSPORTI多克隆位点的EooRI和PstI切点之间,所得重组体pSN线性化后由T_7RNA多聚酶及SP6RNA多聚酶引导体外转录反应,产物经凝胶电泳及特异引物RT-PCR,证实SP6引导的是正义RNA,T7合成的是反义RNA,其大小分别力429bp和362bp。并证实所得RNA力HCV5'NCRcDNA转录而来。获得的HCV5'NCRcDNA和RNA在常规逆转录和PCR步骤中用于设立有效的模板对照,对消除假用性及评估试剂有重要意义。同时,HCV5'NCR体外转录载体的构建可用于制各RNA探针和反义RNA,改进后还可作为定量PCR的竞争性模板。 相似文献
975.
花生种子高纯度DNA的提取(简报) 总被引:2,自引:0,他引:2
花生种子高纯度DNA的提取(简报)王艳,何军贤,傅家瑞(中山大学生命科学学院,广州50275)关键词花生;种子;DNA;十六烷基三甲基溴化铵RAPIDANDEFFICIENTPURIFICATIONOFDNAFROMPEANUT(ARACHISHYP... 相似文献
976.
Rui Yan Mark Ottenbreit Bharati Hukku Michael Mally Sharong Chou Joseph Kaplan 《In vitro cellular & developmental biology. Animal》1996,32(10):656-662
Summary Methods for monitoring cell line identification and authentication include species-specific immunofluorescence, isoenzyme
phenotyping, chromosome analysis, and DNA fingerprinting. Most previous studies of DNA fingerprinting of cell lines have used
restriction fragment length polymorphism analysis. In this study, we examined the utility of an alternative and simpler method
of cell line DNA fingerprinting—polymerase chain reaction (PCR) amplification of fragment length polymorphisms. Fourteen human
cell lines previously found by other methods to be either related or disparate were subjected to DNA fingerprinting by PCR
amplification of selected fragment length polymorphism loci. Cell identification patterns by this method were concordant with
those obtained by isoenzyme phenotyping and restriction fragment length polymorphism-DNA fingerprinting, and were reproducible
within and between assays on different DNA extracts of the same cell line. High precision was achieved with electrophoretic
separation of amplified DNA products on high resolution agarose or polyacrylamide gels, and with fragment length polymorphism
(FLP) loci-specific “allelic ladders” to identify individual FLP alleles. Determination of the composite fingerprint of a
cell line at six appropriately chosen fragment length polymorphism loci should achieve a minimum discrimination power of 0.999.
The ability of PCR-based fragment length polymorphism DNA fingerprinting to precisely and accurately identify the alleles
of different human cell lines at multiple polymorphic fragment length polymorphism loci demonstrates the feasibility of developing
a cell line DNA fingerprint reference database as a powerful additional tool for future cell line identification and authentication. 相似文献
977.
CYNTHIA A. HALE MARY ELLEN JACOBS HEATHER G. ESTES SUSMITA GHOSH LAWRENCE A. KLOBUTCHER 《The Journal of eukaryotic microbiology》1996,43(5):389-392
The sequences of a 1.8-kbp macronuclear DNA molecule (V3), and the majority of its micronuclear counterpart, are reported. The macronuclear V3 DNA molecule contains an open reading frame that is interrupted by a single intron, while the micronuclear copy is interrupted by four internal eliminated sequences, one of which is located within the intron. The predicted protein product of the macronuclear V3 gene is a 471-amino acid polypeptide that is very similar to a group of protein-serine/threonine kinases from both plant and animal species, some of whose members appear to be involved in cell cycle or growth control. 相似文献
978.
IVELINA S. METCHEVA TIMOTHY T. STEDMAN GREGORY A. BUCK 《The Journal of eukaryotic microbiology》1996,43(3):171-176
We have constructed an arrayed, large insert, multiple coverage genomic library of Pneumocystis carinii DNA using the bacteriophage P1 cloning system. The library consists of ∽4800 independent clones with an average insert size of ∽55 kbp individually arrayed in 50 microtiter plates, and is readily screened on ten or fewer microtiter plate-sized filters using a high density colony replicating device. Screening of the library for unique P. carinii sequences detected an average of 4–5 positive clones for each, consistent with a several-fold coverage of the ∽10-mbp P. carinii genome. Restriction and hybridization analyses demonstrated that the P1 clones in this library are quite stable and contain few, if any, chimeric inserts. Thus, this arrayed, large insert library off. carinii genomic DNA will be a valuable tool in the future genetic dissection of this important pathogen. 相似文献
979.
复制型HBV转基因小鼠的遗传与繁育研究 总被引:3,自引:2,他引:1
本文采用类似系祖建系的方法,对复制型HBV转基因小鼠模型的17、21、25三个系列进行了繁育,通过PCR和Southern分子杂交的方法,检测三个系列小鼠尾组织和血清的DNA样品,以确定HBV基因的整合和复制情况。结果表明,HBV基因已稳定地遗传至第五代(F5),且各世代小鼠血清中都存在HBVDNA,此外,整合阳性小鼠的血清中能测出HBVDNA的比率很高,F1代为94.44%(102/108),F2、F3代为95.31%(61/64),故在繁育中可以通过测血清中的HBVDNA来确定小鼠是否整合。 相似文献
980.
基因工程人β干扰素工程菌经发酵培养、纯化后获得纯的制品,采用斑点杂交技术,用非放射性地高辛标记超声裂解的全工程菌DNA作为探针,检测基因工程人β干扰素纯品,结果显示:基因工程人β干扰素纯品中的外源DNA含量小于100pg/剂。 相似文献