黑曲霉组成型表面展示南极假丝酵母脂肪酶B及其发酵调控

黑曲霉表面展示南极假丝酵母脂肪酶B(CALB)可有效应用于食品、化妆品、医药等行业。以黑曲霉Aspergillus niger SH-1为宿主细胞构建诱导型糖化酶基因启动子表面展示CALB,在较高浓度葡萄糖碳源的发酵中CALB表达会受到抑制,发酵后期菌体容易出现菌丝断裂和展示酶活力下降等问题。采用组成型3-磷酸甘油醛脱氢酶基因启动子替代诱导型糖化酶基因启动子的细胞表面展示CALB黑曲霉菌株可有效解决上述问题,该菌株不但可以利用葡萄糖,而且还能利用木糖为发酵碳源,以木糖为碳源发酵在144 h展示酶水平达到1 100.28 U/g。文中探讨了甘蔗渣水解液发酵生产黑曲霉表面展示CALB,初步达到预期的结果,为甘蔗渣的综合利用提供了新途径。     

Ⅰ型马立克病毒UL24蛋白的原核表达及其亚细胞定位的研究

为研究Ⅰ型马立克病毒(MDV)UL24蛋白的亚细胞定位,以MDV GX0101为模板,PCR扩增UL24基因全长,分别克隆到原核表达载体pGEX-6P-1、pET-32a(+)和真核表达载体pEGFP-C1中。将原核表达重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中表达,并进行纯化和鉴定。用纯化蛋白免疫Balb/c小鼠,制备并鉴定抗UL24蛋白的多克隆抗体。通过间接免疫荧光试验(IFA)检测感染GX0101的鸡胚成纤维细胞(CEF)中的UL24蛋白。同时,将真核表达重组质粒pEGFP-C1-UL24转染CEF细胞,通过激光共聚焦显微镜观察UL24蛋白在CEF中的亚细胞定位。结果显示Ⅰ型MDV的UL24基因在原核表达载体中能够正确表达,免疫小鼠后获得抗UL24蛋白的多克隆抗体。该抗体可特异性识别MDV UL24蛋白,且MDV UL24蛋白在CEF的细胞质和细胞核中定位,以上研究结果为进一步研究MDV UL24基因的功能奠定基础。     

幼鳖胃肠胰组织中主要消化酶活性分布

本文分析了中华鳖幼鳖胃肠胰组织中淀粉酶,蛋白酶,脂肪酶的最适ｐＨ,最适度物浓度及Ｎａｃｌ对淀粉酶的知效应,在测定的最适条件下比较了三种酶在胃肠胰不同部位组织中酶活性的分布。     

假单胞菌产脂肪酶条件的初步探索

对假单胞菌（Pseudomonassp）2106菌株产脂肪酶条件的初步探索表明,该菌株脂肪酶为组成型,不受油脂类底物的诱导。碳源的种类（单糖、双糖、多糖）和浓度对产酶影响不大,氮源以豆饼粉和玉米浆混合添加最好。最适发酵温度为32℃,摇瓶转速140r／min。实验中还通过正交试验优化了产酶培养基组成。     

HIV—1核蛋白p24在昆虫细胞中的表达

将完整的ＨＩＶ－１ ｐ２４基因克隆到杆状病毒转移质粒中,使用重组转移质粒与野生型杆状病毒ＤＮＡ共转染Ｓｆ９昆虫细胞,经筛选获得带有编码ｐ２４基因的重组杆状病毒。重组杆状病毒感染Ｓｆ９细胞后在细胞中表达了ＨＩＶ核蛋白ｐ２４。其重组蛋白的分子量为２４ｋＤ。此重组糖蛋白在免疫荧光,免疫印染和酶联免疫实验中都能被人ＨＩＶ－１阳性血清和单克隆抗体所识别。     

用快中子法选育细菌脂肪酶高产菌株*

研究了从土壤中筛选产脂肪酶的菌株，利用紫外线、快中子、快中子和磁场复合、γ射线、γ射线和磁场复合诱变，以酶活为筛子进行诱变育种。结果，出发菌酶活较低的一株得到了一株酶活为３９６．２２Ｕ／ｍＬ的诱变株，此酶活比出发菌株高９２倍，并发现此菌对紫外线和快中子比较敏感；而出发菌酶活较高的一株得到了酶活为４２４．６０Ｕ／ｍＬ发酵液的诱变株，此酶活为出发菌株３．０倍。在此基础上，初步探讨了快中子、γ射线及磁场复合处理在产脂肪酸菌种诱变中的作用，并认为，在产脂肪酸菌株的诱变中快中子诱变更为有效。     

微环境对脂肪酶催化乙酸甲基苯甲酯立体选择性氨解的影响*

系统研究了反应介质、水活度、温度、pH等因素对脂肪酶Novozym435催化乙酸甲基苯甲酯立体选择性氨解反应的影响。以正己烷为反应介质,酶表现出较高的催化活性和对映体选择性;适宜的反应温度为25℃～35℃;最适反应体系初始水活度为0.33;较适宜的pH范围为6～7。     

脂肪酶合成聚乙二醇400油酸单酯和双酯的影响因素

研究了固定化假丝酵母(Candida sp.)-1619脂肪酶合成聚乙二醇400油酸单酯与双酯的影响因素。不同摩尔比的底物反应6h都有单酯和双酯生成。酸与醇的摩尔比为O.25：1到2：1时,生成单酯与双酯的比例在3.5：1到4:1的范围内;当酸与醇的摩尔比达到3：1至8:1时,单、双酯的生成量相仿。反应达平衡时(24h),不同摩尔比底物的反应产物都是双酯。在含己烷的反应体系中,反应平衡时有单酯存在,摩尔比为2：1时,反应物中单、双酯比达到l：3.2。     

底物中的硅原子对酶反应的影响

在酶工程学的研究史上,人们一方面不断地研制开发新的酶种;一方面利用固定化、酶分子改造和修饰等技术来提高酶的活性和稳定性;另一方面,则不断地开拓酶的新用途。酶催化非天然化合物的生物合成和转化（正是这一方面研究的新进展）。由于有机硅化合物在有机合成,尤其...