Ⅰ型马立克病毒UL24蛋白的原核表达及其亚细胞定位的研究

为研究Ⅰ型马立克病毒(MDV)UL24蛋白的亚细胞定位,以MDV GX0101为模板,PCR扩增UL24基因全长,分别克隆到原核表达载体pGEX-6P-1、pET-32a(+)和真核表达载体pEGFP-C1中。将原核表达重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中表达,并进行纯化和鉴定。用纯化蛋白免疫Balb/c小鼠,制备并鉴定抗UL24蛋白的多克隆抗体。通过间接免疫荧光试验(IFA)检测感染GX0101的鸡胚成纤维细胞(CEF)中的UL24蛋白。同时,将真核表达重组质粒pEGFP-C1-UL24转染CEF细胞,通过激光共聚焦显微镜观察UL24蛋白在CEF中的亚细胞定位。结果显示Ⅰ型MDV的UL24基因在原核表达载体中能够正确表达,免疫小鼠后获得抗UL24蛋白的多克隆抗体。该抗体可特异性识别MDV UL24蛋白,且MDV UL24蛋白在CEF的细胞质和细胞核中定位,以上研究结果为进一步研究MDV UL24基因的功能奠定基础。     

迟缓爱德华菌菌蜕疫苗对罗非鱼注射和口服免疫的效果分析

通过腹腔注射、口服两种免疫途径探讨迟缓爱德华菌菌蜕疫苗对罗非鱼Oreochromis niloticus的免疫保护效果。将制备的迟缓爱德华菌菌蜕疫苗（ETG）和福尔马林灭活疫苗（FKC）采用腹腔注射、口服两种免疫途径免疫罗非鱼,分别于免疫后14d、21d和28d采集罗非鱼血清、头肾、脾脏,测定血清中抗体IgM水平,血清中酸性磷酸酶（ACP酶）、超氧化物歧化酶（SOD酶）活性及罗非鱼头肾和脾脏中白介素（IL-1）、肿瘤坏死因子（TNF）、干扰素（IFN）、Caspase3等细胞因子的相对表达量,并通过攻毒试验得到菌蜕疫苗、福尔马林灭活疫苗两种疫苗的相对免疫保护率。免疫组罗非鱼的血清抗体水平均极显著高于（P<0.01）对照组,ETG注射组抗体效价极显著高于（P<0.01）FKC口服组。免疫28d,免疫组SOD、ACP酶活力显著高于（P<0.05）对照组（Group E、F）;在头肾中,免疫组（Group A、B）TNF、IL-1和IFN的相对表达量显著高于（P<0.05）对照组（Group E、F）。在免疫保护试验中,所有免疫组的免疫保护率均显著高于（P<0.05）对照组,注射、口服菌蜕疫苗的相对保护率分别为79%、77%,注射、口服灭活疫苗组的的相对保护率分别为62%、60%,但两种疫苗免疫保护率无显著差异。试验研制的菌蜕疫苗得到更高的免疫保护率,菌蜕疫苗在预防罗非鱼爱德华菌病中有良好的研究价值和应用前景。     

不同家系凡纳滨对虾对低盐度的适应能力及其适应机理

为研究不同遗传背景的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)在对盐度的适应能力上具有明显的差异的机理, 比较了30个凡纳滨对虾家系在3个不同盐度水体(5‰、20‰和30‰)中饲养30d后的生长性状。研究结果证实了不同家系对虾在不同盐度条件下的生长性能和适应能力存在显著差异。研究进一步对比分析了各盐度条件下不同家系间生理代谢、ATP含量及ATP合成关键酶酶活力的差异, 并检测了不同家系凡纳滨对虾鳃Na+/K+-ATPase、Ca2+-ATPase酶活水平。结果发现盐度适应力差的对虾家系的Na+/K+-ATPase、Ca2+-ATPase酶活力较弱, 这可能是由于其机体能量供给不足所导致。此外, 研究以血浆中皮质醇浓度为指标, 对比了不同盐度下不同对虾家系的机体应激水平, 结果显示盐度适应力差的对虾家系在经30d饲养后仍处于应激状态。综合研究结果得出, 不同遗传背景的对虾对盐度的适应能力不同, 可能是由其机体代谢、离子转运及能量合成能力所决定。