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51.
B→O血型转变工具酶α-半乳糖苷酶cDNA克隆及表达 总被引:10,自引:0,他引:10
α-半乳糖苷酶是实现 B→O血型转变、制备通用型血的关键工具酶 .利用反转录 PCR方法从中国海南 Catimor咖啡豆中克隆α-半乳糖苷酶 c DNA,插入嗜甲基酵母 P.pastoris分泌表达载体 p PIC9K中 ,转化 P.pastoris GS1 1 5,筛选高表达重组菌株 .经甲醇诱导表达 7d后 ,发酵液总蛋白分泌量约 1 .2 mg/ml,SDS- PAGE呈现约 41 k D特异表达带 ,与专一性底物对 -硝基 -苯基 -α- D-吡喃半乳糖苷反应证明 ,表达产物具有 α-半乳糖苷酶活性 ,最高达到 1 8U/ml.初步实验表明 ,表达的 α-半乳糖苷酶可酶解 B型红细胞 ,成功实现 B→O血型转变 . 相似文献
52.
发育是一个严格有序的选择性基因表达过程。在这一过程中,序列特异的反式因子(transactingfactors)通过与基因调控序列中顺式调控元件(cisactingelements)的互作启动基因转录,因此,它们又被称为转录因子[1]。基于这类因... 相似文献
53.
以Nested-PCR方法从人肝cDNA基因文库中扩增出编码人血小板生成素(hTPO)前153个氨基酸的氨基端功能区cDNA;在扩增中,采用非连续多核甘酸定点突变的方法.将翻译起始的七个氨基酸的原核中不常用的密码子同又突变成使用频率较高的密码子,以便于其在大肠杆菌中表达。序列测定证实了预期的结果。 相似文献
54.
小鼠胸腺髓质上皮细胞系体内诱导胸腺细胞功能成熟 总被引:1,自引:0,他引:1
来源于BALB/c小鼠 (H-2d)胸腺的髓质上皮细胞系MTEC1细胞表达H-2d和I -Ad 分子 .为研究上皮细胞诱导胸腺细胞阳性选择及功能分化的能力 ,首先用γ 线照射C5 7BL/6J小鼠(H-2d) ,再经静脉注射 (H-2b×d)F1代骨髓细胞 ,制备 H-2b×d→H-2b)嵌合体 ,然后将MTEC1细胞注射到嵌合体胸腺内 .注射后 2个月 ,经HE染色显示 ,MTEC1细胞在嵌合体小鼠胸腺被膜下皮质区成簇存在 ,体外免疫学试验发现 ,嵌合体小鼠脾细胞含有抗原特异性H-2d识别限制的杀伤T细胞 (CTL) ,IL -2产生T细胞及增殖应答T细胞 .在MLR试验中 ,嵌合体小鼠脾细胞显示对H-2d 同种异型抗原的明显耐受 .从而证明MTEC1髓质上皮细胞能在胸腺微环境内诱导H-2d识别限制的对特异抗原应答的T细胞发育及功能成熟 .由此提出在胸腺髓质区进行“2次胸腺选择”的假说 ,并讨论了其意义 . 相似文献
55.
分离提取树(treeshrew,TS)肝组织mRNA,以此为模板,反转录构建了TS肝组织cDNA文库。利用制备的兔抗TS载脂蛋白CI多抗血清为探针筛选该文库,获得两个阳性克隆。测序及序列分析表明:两个克隆均为TSapoCIcDNA基因。大的克隆由380个核苷酸构成,包括21bp、95bp组成的5′和3′非编码区,264bp组成的一个完整开放阅读框架,编码88个氨基酸的apoCI前体,含26个氨基酸构成的信号肽和62肽的成熟蛋白。其成熟肽长度与大鼠、小鼠和狗的相应结构一致,但较人和狒狒apoCI的成熟肽多5个氨基酸。并对其功能域进行了初步预测。RNA印迹显示TSapoCImRNA不仅主要在肝组织表达;而且不同于人和其他哺乳类动物,亦可少量在小肠表达。上述结果为进一步研究TSapoCI基因组结构、功能和体外表达奠定了基础。 相似文献
56.
p53可以同细胞内的许多种蛋白质形成复合物从而参与细胞周期调节、基因表达调控、细胞分化、细胞程序化死亡和抑制肿瘤的发生等各项生理过程。为了筛选与p53作用的蛋白质因子,利用酵母双杂交(two-hybrid)系统,筛选了HeLa细胞的cDNA文库。在1.5×106个转化子中筛选到6个阳性克隆。经DNA全序列分析,结果表明5个阳性克隆中的cDNA序列编码产物均由158个氨基酸构成,分子量为17kD的人泛肽交联酶。同源性比较表明,该泛肽交联酶与人的UBC9(97%)、线虫的UBC(76%)、裂殖酵母的HUS5(66%)、拟南芥菜的UBC(66%)和啤酒酵母的UBC9(56%)有较高的同源性。进行了16种正常人组织和7种肿瘤细胞株的Northern杂交分析,结果显示:它在心脏、胎盘、胸腺、睾丸、卵巢、结肠和外周血白细胞中的表达较在肝脏、骨骼肌、肾脏、胰腺、脾脏、前列腺和小肠中为高,而在脑和肺中则检测不到表达。它在宫颈癌细胞株、乳腺癌细胞株、淋巴瘤细胞株和畸胎瘤细胞株中的表达较高,而在肺癌细胞株、肝癌细胞株和神经胶质瘤细胞株中则无明显表达。 相似文献
57.
RNA病毒感染性转录体的制备 总被引:4,自引:0,他引:4
构建感染性转录体已成为研究RNA病毒复制,表达,致病机制等的有力工具。感染性转录体可通过cDNA克隆经体内或体外转录获得,也可通过聚合酶链反应(PCR)扩增产物直接转录获取。DNA聚合酶引起的点突变、cDNA克隆的稳定性,转录体长度多态性、病毒基因组的5‘和3’端序列等均可影响转录体的感染性。 相似文献
58.
毛尖紫萼藓干旱胁迫cDNA文库的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
干旱胁迫是影响植物生长发育的主要环境因素,严重影响农作物的产量。解决这个问题的有效途径是培育和利用优良的抗旱品种。应用比较功能基因组学方法筛选抗旱相关基因,并通过基因工程培育抗旱品种已成为植物遗传资源与品种改良研究的重要内容。毛尖紫萼藓(Grimmia pilifera)是典型旱生藓类,生长在向阳的裸岩上,具有很强的抗旱能力,是很好的抗旱基因资源。本研究采用SMART技术构建毛尖紫萼藓干旱cDNA文库,文库滴度为2.8×105 pfu·mL-1,重组率为91.7%,插入片段大小为500~2 000 bp,平均为800 bp。通过测序我们获得了1 045条ESTs,其中高质量的996条,通过拼接获得875个Unigenes,为进一步筛选抗旱相关基因奠定了基础。 相似文献
59.
水杨酸诱导湖北海棠全长cDNA文库的构建及应用 总被引:4,自引:0,他引:4
以'湖北海棠'为材料,经水杨酸处理后,用改良CTAB法提取总RNA,纯化后构建全长cDNA文库,并进行PGIP基因的克隆.结果表明:(1)提取的总RNA无降解,无污染;mRNA弥散带主要集中在500~2 000 bp左右,没有rRNA 残留.(2)ds cDNA弥散带主要分布于300~2 000 bp之间,PCR验证后片段大小分布于200~2 000 bp之间,说明合成ds cDNA质量较好,成功地构建了全长cDNA文库.(3)通过PCR从该cDNA文库中克隆了PGIP基因,命名为MhPGIP,GenBank登录号为FJ449708;其核苷酸序列及推导氨基酸序列与苹果的一致性分别为98%和97%,该序列含有两个串联的亮氨酸重复序列.综上所述,构建的全长cDNA文库质量很好,该文库的建成可以用于今后抗病新基因的挖掘、克隆和利用,为苹果抗病机理的研究奠定基础. 相似文献
60.
根据真核生物莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)、Chlamydomonas moewusii及Chlorella vulgaris等光系统Ⅰ反应中心蛋白psaB基因的氨基酸高度保守序列,设计一对简并引物,利用TRIzol试剂提取杜氏盐藻(Dunaliella salina)细胞的总RNA,通过RT-PCR,得到的一段长为1.8kb左右的cDNA片段。PCR产物经T-A克隆并测序以及测序结果推导成氨基酸序列进行同源性比较,表明所克隆的1815bp序列为杜氏盐藻光系统Ⅰ反应中心psaB基因的cDNA片段,GenBank收录号为AY820754。根据已经得到的psaB的核苷酸序列推导成氨基酸序列与一些已知物种的psaB氨基酸序列相比较,同源性分别为Chlamydomonas reinhardtii 92%,Chlamydomonas moewusii 91%,Chlorella vulgaris 86%,Mesostigma viride 85%,Phy -scomitrella patenssubsp.Patens 85%,Nephroselmis olivacea 84%。此外,psaB密码子偏爱性分析表明:杜氏盐藻psaB基因第三位密码子A和T的组成分别为35.7%和39.17%,而G和C分别为7.27%和17.85%,即杜氏盐藻psaB基因密码子的组成大多为NNA和NNT。根据psaB基因的特征,作者对绿藻门的50个物种的psaB基因作了进化分析,结果表明:杜氏盐藻与Haematococcaceae中的大多数种类进化地位最为接近,这为更进一步弄清杜氏盐藻的遗传背景提供了理论依据。 相似文献