KDP胞外502～764位氨基酸基因合成、表达及功能鉴定

应用基因搭桥法及 Taq酶聚合反应合成了编码人血管内皮生长因子受体 - ( h VEGFR- ,KDR)第 50 2～ 764位 2 62个氨基酸的基因片段 .DNA序列分析表明 ,合成的 786bp的基因片段与文献报道的 KDR相应 c DNA序列完全一致 .将该基因与原核融合蛋白表达载体 p GEX- 3X重组 ,在大肠杆菌 JM1 0 9中表达了 GST- KDR2 62融合蛋白 ,表达量约占菌体总蛋白的 35% .表达产物依次经包涵体分离、变性、复性、亲合层析纯化和 Xa因子酶解 ,获得了 KDR2 62目的蛋白纯品 .GST-KDR2 62融合蛋白和纯化产物经 Western blot分析 ,两者均可被 VEGF1 65特异性识别 ,前者分子量约 56k D,后者分子量约 30 k D;这两种蛋白用 VEGF1 65及其抗体进行的 ELISA分析结果均显示阳性 ,并有剂量依赖关系 ,而用 Xa因子酶解 GST- KDR2 62融合蛋白获得的 GST和空载体诱导产物对照均为阴性 .以上结果表明表达的 KDR2 62蛋白可特异性地与 VEGF结合 .     

内皮衍生舒张因子的特性与生物功能

Ｆｕｒｃｈｇａｔｌ于 1 980年发现 ,乙酰胆碱(Ａｃｈ)松弛血管平滑肌的作用有赖内皮细胞的完整性 ,提出血管内皮细胞可以产生一种促使血管舒张的因子 ,命名为血管内皮衍生舒张因子 (ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍｄｅｒｉｖｅｄｒｅｌａｘｉｎｇｆａｃ ｔｏｒ ,ＥＤＲＦ)。研究证明 ,其主要成分是一氧化氮 (ＮＯ)。七年后 ,Ｐａｌｍｅｒ等用生化分析法确认 ,ＥＤＲＦ就是ＮＯ。ＮＯ是一种新的生物信息传递体[1] 。它作为细胞内信使分子 ,通过调节心血管、神经、呼吸、泌尿、内分泌和免疫等多种系统的功能而发挥其生物学功能 ,且与多种现代病、多…     

鸡马立克氏病毒和网状内皮增生病毒感染肉鸡时的相互作用

为了研究鸡马立克氏病病毒(MDV)和网状内皮增生病病毒(REV)共感染时的相互作用,分别在REV母源抗体阳性(REV-Ab )和阴性(REV-Abˉ)及经MDV疫苗CVI988株免疫和不免疫的商品代肉鸡,比较了二种病毒在病毒血症水平和特异抗体效价上的相互影响。结果表明,在未经CVI988株免疫鸡,REV病毒血症对MDV强毒接种后的病毒血症水平及抗体效价无明显影响,但REV病毒血症显著抑制了CVI988疫苗免疫为鸡提供的抵抗力和抗体效价,因而提高了强毒MDV感染后的病毒血症的程度。另一方面,MDV感染会显著减弱REV-Ab 鸡对REV感染的抵抗力,提高REV-Ab 鸡在感染REV后的病毒血症水平并抑制对它的抗体效价。分析表明,MDV和REV共感染主要通过抑制鸡体的免疫功能来影响另一种病毒的复制及其致病作用。     

基质金属蛋白酶-3和血管内皮生长因子在不同月龄大鼠椎间盘组织中的表达及意义

目的检测不同月龄大鼠的椎间盘组织中基质金属蛋白酶-3(MMP3)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达,探讨MMP3和VEGF与椎间盘自发退变的关系。方法采用苏木精-伊红(HE)染色和链酶亲和素-过氧化物酶复合物(SABC)免疫组化方法及显微图像分析技术,测定50只Wistar大鼠(1、3、6、12、18月龄各10只)椎间盘组织中MMP3和VEGF的表达情况并观察椎间盘组织学变化。结果随着大鼠月龄的增长,其椎间盘中MMP3和VEGF的表达亦发生变化,由低月龄组(1-3月龄)至成龄组(12月龄)MMP3表达逐渐增多,而VEGF表达逐渐下降,且这种变化有显著统计学意义(P<0.01)。椎间盘的组织结构也发生变化,随月龄增加,椎间盘中软骨细胞数量减少,胶原纤维增生、粗大、走行紊乱。结论大鼠椎间盘结构随月龄增长发生性改变,椎间盘中MMP3和VEGF表达发生变化,这可能引起椎间盘的自发退变,而且这种改变与人的椎间盘的自然退变具有相似性和可比拟性。     

不同亚型一氧化氮合酶在脑缺血/再灌注早期的表达变化

目的:观察脑缺血/再灌注(CI/R)早期缺血区脑组织的内皮型一氧化氮合酶(eNOS)与神经型一氧化氮合酶(nNOS)表达的变化。方法:健康wistar大鼠60只,体重200～280g,由中国医科大学动物中心提供,雌雄各半。随机分为6组(n=10):假手术组、缺血1h组、缺血2h组、再灌注0.5h组、再灌注1h组、再灌注2h组。采用线栓法制作大鼠CI/R模型,免疫组化方法检测缺血区脑组织的eNOS与nNOS蛋白表达情况。结果:与假手术组比较,CI/R模型大鼠脑组织血管内皮细胞内eNOS表达在缺血1h内升高,之后到再灌注2h内持续降低。而nNOS的表达在缺血到再灌注2h内持续上升。结论:CI/R模型中缺血区脑组织的eNOS与nNOS的变化趋势不同,表明一氧化氮在缺血性脑损伤病理过程的作用与一氧化氮合酶亚型的变化有关。     

冻融小鼠卵巢移植后细胞凋亡及血管内皮生长因子表达的变化及意义研究

目的:探讨冻融小鼠卵巢同种异体移植后细胞凋亡及血管内皮生长因子表达的变化及意义。方法:收集C57BL/6j雌鼠和BALB/c雄鼠杂交后F1代4周龄小鼠卵巢,慢冻速融后移植至杂交后F1代8～12周雄鼠的肾被膜下,分别于移植后1d(24h)、2d(48h)和7d回收移植物,将冻融以及移植后不同时间段的卵巢组织进行HE染色、全卵巢卵泡计数、电镜观察、免疫组织化学分析细胞凋亡及RT-PCR检测VEGF基因表达。结果:冻融小鼠卵巢移植后随着时间的推移、各级卵泡数和卵泡存活率逐渐下降;移植后48h内细胞凋亡指数最高;电镜观察发现小鼠卵巢组织移植后损伤主要发生在移植后48h内;移植后VEGF的表达有上升的趋势,至第7d仍维持较高水平;移植后48hVEGF120mRNA和VEGF188mRNA水平明显升高(P0.05),至7d下降恢复至移植前水平,而VEGF164mRNA水平移植后无明显变化(P0.05)。结论:小鼠卵巢组织移植后48h内细胞凋亡最为严重,移植后引起大量卵泡的丢失;在移植后血管化的过程中VEGFmRNA表达量增加,VEGF120mRNA和VEGF188mRNA可能参与卵巢移植后早期血管化过程。     

肿瘤血管新生的数值模拟

利用Overture开发肿瘤血管新生模型的计算程序,使用有限差分法模拟肿瘤血管新生过程中,血管内皮细胞在细胞间基质中的增生和迁徙,阐明了血管内皮生长因子和血管新生因子的调节机制.针对三种调节因子的不同组合下的模型进行数值模拟,对比说明三种因子在肿瘤血管新生中的不同作用.模型计算结果与病理学现象实验一致.     

内皮祖细胞的分离培养与鉴定

内皮祖细胞的分离方法有免疫磁珠分离法、淋巴细胞分离液分离法(1.077)和差速贴壁法,这3种方法已被人们广泛使用,均可分离到一定的目的细胞。分离到的目的细胞在培养过程中逐渐分化、成熟、发育为内皮细胞。在内皮细胞和内皮祖细胞的鉴别区分,使用CD34+/CD133+/KDR+鉴定为内皮祖细胞,同时使用内皮祖细胞吞噬D il-ac-LDLFITC-UEA双阳性的方法也可鉴定为内皮祖细胞。     

pcDNA3.1(+)-VEGF165载体的构建及表达蛋白特性分析

构建含人VEGF165基因的重组真核表达质粒,并对其表达蛋白特性进行初步分析。将合成的VEGF165基因序列克隆至pCR2.1-TOPO载体,测序鉴定证实基因碱基序列无误后,再克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建成pcD-NA3.1(+)-VEGF165重组质粒。利用DNAstar软件分析基因序列并翻译成氨基酸序列,再用ExPASy protscale和Protean软件分析其疏水特性、蛋白二级结构。经基因测序、酶切鉴定和PCR鉴定证实pcDNA3.1(+)-VEGF165重组质粒构建成功。Ex-PASy protscale和Protean软件分析表明VEGF165蛋白具有较好的水溶性。本研究为VEGF165的基因治疗应用和VEGF165蛋白直接治疗勃起功能障碍奠定了基础。     

VEGF-D的表达与膀胱移行细胞癌LVD及淋巴结转移有关

目的观察血管内皮生长因子D(vascular endothelial growth factor D,VEGF-D)在人膀胱移行细胞癌组织内的表达,探讨VEGF-D在膀胱移行细胞癌组织淋巴管密度(lymphatic vessel density,LVD)及淋巴结转移之间的关系。方法取人膀胱移行细胞癌组织蜡块30例,免疫组化法观察VEGF-D在膀胱移行细胞癌组织内的表达情况。以淋巴管内皮特异性标记物D2-40标记淋巴管,计数癌组织内淋巴管密度。结果VEGF-D蛋白主要表达于癌细胞胞浆内,VEGF-D在淋巴结转移组膀胱移行细胞癌组织内的表达水平明显高于无淋巴结转移组(P0.05);淋巴结转移组膀胱移行细胞癌组织内的淋巴管密度明显高于无淋巴结转移组(P0.05)。VEGF-D表达与膀胱移行细胞癌淋巴管密度及淋巴结转移之间具有显著的相关性。结论VEGF-D表达在膀胱移行细胞癌组织内淋巴管生成及淋巴结转移中起重要作用。