脑缺血再灌注大鼠模型eNOS和nNOS的变化

目的通过对缺血再灌注早期eNOS与nNOS表达情况的观察,探讨NO在脑缺血再灌注损伤中发挥神经毒性作用时是否出现一氧化氮合酶(NOS)不同亚型的变化。方法采用线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模型,激光多普勒灌流监测仪测血流来判断模型是否成功,Western blot方法检测eNOS与nNOS变化。结果血管内皮细胞内eNOS表达在缺血1h内升高,之后到再灌注2h内持续降低;而nNOS的表达在缺血到再灌注2h内持续上升。结论大鼠脑缺血再灌注模型中eNOS与nNOS的变化趋势不同。表明NO在缺血性脑损伤的病理过程的发挥作用与NOS亚型的变化有关。     

缺血再灌注对小鼠肠神经丛nNOS 和iNOS表达的影响

目的观察缺血再灌注后小鼠回肠神经型一氧化氮合酶(neuron alnitric oxide synthase,nNOS)和诱导型一氧化氮合酶(induciblenitric oxide synthase,iNOS)的表达,探讨肠缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,IRI)的发生机制。方法采用小鼠肠系膜上动脉缺血再灌注模型,根据不同再灌注时间对小鼠随机分1d组、3d组、5d组、7d组、对照组和假手术组,用SP法检测小鼠回肠nNOS和iNOS的表达情况。结果与对照组和假手术组相比较,nNOS在再灌注1d后开始在肌间神经丛持续高表达(P<0.01);而iNOS在再灌注3d后开始在肌间神经丛持续高表达(P<0.05)。结论nNOS和iNOS在肠缺血再灌注后的表达增强,提示一氧化氮及一氧化氮合酶与肠神经节细胞在缺血再灌注中的损伤有着密切关系。     

大鼠局灶性脑缺血后一氧化氮合酶基因表达的变化

目的:观察大鼠局灶性脑缺血后3种类型一氧化氮合酶(NOS)mRNA表达的变化.方法:大鼠随机分为正常对照组、缺血后2、6、12、24 h组,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法分别检测缺血脑组织NOS基因表达的变化.结果:脑缺血后eNOS、nNOSmRNA表达增强,分别于2、6 h达高峰;iNOS mRNA表达亦增高,但在缺血后12 h达高峰.结论:大鼠脑缺血早期eNOS和nNOS占主要地位,缺血后期iNOS占主要地位.     

大鼠脑缺血再灌注后海马神经细胞NOS表达与细胞凋亡及复方丹参的保护作用

目的探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后海马神经细胞一氧化氮合酶(NOS)的表达与神经细胞凋亡的关系及中药复方丹参的保护作用。方法采用大脑中动脉内栓线阻断法(MCAO)造成局灶性脑缺血再灌注模型。用原位细胞凋亡检测方法观察海马神经细胞凋亡;用免疫组织化学方法检测大鼠海马神经细胞(nNOS、iNOS)的表达并做图像分析。结果与假手术对照组比较,脑缺血再灌注2h后缺血侧海马CA1、CA3区神经细胞nNOS、iNOS表达升高,并出现神经细胞凋亡,随着再灌注时间的延长,神经细胞iNOS的表达明显增强,凋亡神经细胞数逐渐增多,至24h达高峰,但神经细胞nNOS的表达并未见明显增强。复方丹参保护组神经细胞nNOS、iNOS的表达和凋亡神经细胞数明显低于缺血再灌组(P<0.01)。结论脑缺血再灌注后缺血侧海马CA1、CA3区神经细胞nNOS的表达增强,iNOS的表达显著升高,使NO的形成增加,这可能是介导脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的机制之一。复方丹参具有下调神经细胞nNOS、iNOS的表达,减少NO的生成,抑制细胞凋亡,减轻缺血再灌注对大鼠海马损伤的作用。     

红花黄色素对新生鼠缺氧后一氧化氮合酶表达的影响

目的:观察红花黄色素对缺氧后脑内诱生型一氧化氮合酶(iNOS)、神经原型一氧化氮合酶(nNOS)及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因表达的影响,探讨红花黄色素抗缺氧脑损伤的作用.方法:采用SD新生鼠缺氧模型,于缺氧前30 min腹腔注射红花黄色素生药7g/kg,缺氧40 min后复氧48 h,提取脑组织总RNA,应用RT-PCR技术检测三种NOS mRNA的表达量.结果:新生鼠缺氧再复氧48 h,脑内iNOS、nNOS基因表达上升(P＜0.05),预先给予红花黄色素能抑制iNOS、nNOS基因的表达(P＜0.05),但eNOS基因表达不受影响.结论:红花黄色素对缺氧脑损伤的保护作用与NOS基因表达有关.     

高压氧对急性脑创伤后皮层一氧化氮合酶mRNA表达的影响

目的:拟观察高压氧(HBO)治疗对急性创伤性颅脑损伤后皮层NOSmRNA表达的影响,探讨HBO治疗急性脑损伤的机理。方法:采用自由落体法打击模型制备SD大鼠急性脑创伤,伤后1 h、12 h采用0.25 MPaHBO治疗,伤后6 h、24 h取样皮层,应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)观察神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达量变化。结果:0.25MPaHBO治疗各时间组nNOS、eNOS和iNOSmRNA较急性颅脑损伤各时间组显著下降(P<0.01),且HBO治疗24 h组较6 h组下降更明显(P<0.05,P<0.01),0.25 MPa常氧高氮各时间组与急性颅脑损伤各时间组NOSmRNA表达量无统计学意义。结论:HBO治疗可以下调nNOSmRNA、iNOSmRNA和eNOSmRNA的表达量,可能为HBO治疗脑创伤的机理之一。     

大鼠肢体缺血/再灌注后肺损伤及一氧化氮合酶的变化与意义

目的：研究大鼠肢体缺血／再灌注后急性肺损伤时,内皮型一氧化氮合酶（eNOS）和诱导型一氧化氮合酶（i-NOS）的表达及其在急性肺损伤发生中的作用。方法：雄性Wistar大鼠于后肢根部阻断血流后松解（4h／4h）,分别给予L-Arg和氨基胍（AG）预先干预,分为control、IR、L-Arg和AG组,免疫组织化学方法检测肺组织中iNOS和eNOS的表达,同时检测肺组织中MDA、MPO、W／D和NO2^-／NO3^-值,肺组织形态学观察以评价肺损伤的程度。结果：与control组比较,I／R组eNOS表达降低,iNOS表达增强,MDA、MPO、W／D和NO2^-／NO3^-值增加。肺组织充血、炎细胞浸润,肺泡腔渗液;与I／R组比较,L-Arg组eNOS、iNOS表达无明显变化,NO2^-／NO3^-增加。MDA、MPO、W／D降低,肺组织损伤有减轻趋势,AG组eNOS表达无明显变化,iNOS活性降低,NO2^-／NO3^-减少,MDA、MPO、W／D增加,肺组织损伤有加重趋势。结论：肢体缺血／再灌注急性肺损伤过程中,iNOS表达增加,NO生成增多,在肺损伤发生中有一定的保护作用。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中iNOS在大脑皮层和海马的表达

目的研究局灶性脑缺血再灌注损伤中iNOS在不同脑区的表达.方法用改良的血管内栓线技术制造大鼠局灶性脑缺血与再灌注模型,应用免疫组织化学技术检测脑组织中的iNOS的表达.结果 (1)脑缺血再灌注损伤24h后,缺血组缺血侧大脑皮层、海马CA1区、CA3区神经元iNOS的表达显著增强,与正常对照组比较有显著性差异(P<0.05);(2)脑缺血再灌注损伤24h后,缺血组对照侧大脑皮层、海马CA1区、CA3区神经元iNOS的表达也明显增强,与正常对照组比较有显著性差异(P<0.05);(3) 与对照侧比较,脑缺血再灌注大鼠缺血侧皮质的iNOS表达显著增强(P<0.05),而海马CA1区、CA3区缺血侧的iNOS表达与对照侧相比无显著性差异(P>0.05).结论局灶性脑缺血再灌注损伤后,缺血侧皮层和海马iNOS表达显著升高,未缺血脑区(对照侧)iNOS反应性也较对照组者升高.     

eNOS基因治疗促进大鼠缺血后肢的血管新生

目的:评估内皮型一氧化氮合酶(Endothelial nitric oxide synthase,eNOS)基因治疗对大鼠缺血后肢血管新生的影响。方法:局麻下将30只雄性SD大鼠后肢缺血模型制作后,随机分成实验组和对照组,每组15只。模型制作后1周,采用肌肉注射的方法,实验组缺血后肢接受载有eNOS基因的5型重组腺病毒治疗,对照组接受生理盐水治疗。eNOS基因治疗后4周,评估SD大鼠踝部动脉压、微循环灌注、数字减影血管造影、组织微血管计数以及eNOS蛋白的表达。结果:eNOS基因治疗后4周,和对照组相比,接受eNOS基因治疗的大鼠缺血肢体,表现了更好的血流恢复(踝部动脉压(mmHg):58.2±4.7 vs 86.8±4.3,P0.01;微循环灌注:142.0%±21.5%vs 219.6%±26.2%,P0.01)、侧枝开放和血管新生(血管造影:6.7±1.1 vs 14.4±1.7,P0.01;微血管/肌纤维比值:0.34±0.03 vs 0.56±0.02,P0.01)以及eNOS蛋白的高表达(0.46±0.02 vs 0.73±0.02,P0.01)。结论:eNOS基因治疗促进SD大鼠缺血后肢的血管新生。     

白藜芦醇通过介导eNOS表达促进局灶脑缺血/再灌注大鼠脑内血管再生

目的探讨eNOS在白藜芦醇促进局灶脑缺血/再灌注大鼠大脑缺血皮质区血管再生中的作用。方法 80只SD雄性大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(I/R组)、模型+白藜芦醇组(I/RB组)、模型+白藜芦醇+eNOS特异性拮抗剂L-NAME组(I/RBL组)。采用线栓法制备大鼠局灶脑缺血/再灌注模型,再灌注后2h后腹腔注射白藜芦醇,连续7d,以再灌注后24h、48h、7d为观察时相点。对I/R、I/RB和I/RBL组大鼠行改良神经功能缺损程度评分,HE染色观察大脑缺血皮质区病理结构变化,Western Blot检测eNOS蛋白表达,免疫组织化学检测VEGF、CD34表达情况,荧光定量PCR检测eNOS mRNA表达。结果 I/RB组再灌注后各时间点大鼠大脑缺血皮质区eNOS蛋白及mRNA、VEGF蛋白表达较I/R组明显升高,侧脑室注射L-NAME阻断eNOS作用后,I/RBL组eNOS、VEGF表达较I/RB组降低。同时,白藜芦醇可有效促进缺血后神经功能恢复、改善缺血损伤后脑组织病理变化,增加CD34~+微血管密度。结论白藜芦醇可能通过上调局灶脑缺血/再灌注大鼠大脑缺血皮质区eNOS和VEGF表达,促进脑微血管再生,发挥缺血损伤后脑保护作用。     

一氧化氮合成酶在不同压力氧气导致的肺型氧中毒中的表达变化

目的：临床上过量使用氧气可导致肺型氧中毒的发生,目前有文献认为常压氧和高压氧导致的肺型氧中毒具有不同的发病机制。本实验拟探讨一氧化氮合成酶在不同压力氧气导致的肺型氧中毒中的表达变化。方法：60只雄性SD大鼠,随机分为6组（n=10）,分别暴露于1绝对压（atmosphere absolute,ATA）、1．5ATA、2ATA、2．5ATA、3ATA,100％氧气中56、20、10、8、6h,暴露于空气组作为对照。出舱后测定各组大鼠肺组织湿干比、支气管肺泡灌洗液蛋白含量。收集肺组织,裂解提取蛋白。行Western blot检测内皮一氧化氮合酶（eNOS）、神经型一氧化氮合酶（eNOS）的表达变化。结果：相对于正常对照组,1．0ATA组肺湿干比、支气管肺泡灌洗液蛋白量表达明显增高。随着氧分压的增高,这种改变减弱。和1．0ATA组相比,高压氧组的肺湿干比、肺泡灌洗液蛋白含量显著降低。各个氧气压力暴露组大鼠肺组织中nNOS的含量没有明显改变。而eNOS含量则在氧气压力为2ATA时明显降低（P〈0．05）,氧气压力为2．5ATA及3ATA时明显增高（P〈0．05）。结论：eNOS在肺中的表达量随着氧气压力的变化而改变。     

神经元型一氧化氮合酶在Ⅱ组代谢型谷氨酸受体介导的脑缺血耐受中的作用

目的：探讨神经元型一氧化氮合酶（nNOS）催化产生的一氧化氮（NO）在Ⅱ组代谢型谷氨酸受体（mGluR2／3）介导的脑缺血预处理（CIP）保护机制中的作用。方法：36只永久凝闭椎动脉的SD大鼠随机分为6组（n=6）：sham、CIP、损伤性缺血、CIP4-损伤性缺血、MqPG＋CIP和MTPG＋CIP＋损伤性缺血组。采用硫堇染色和免疫组化观察海马CA1区迟发性神经元死亡（DND）和nNOS表达的变化。结果：与Sham组相比,CIP组海马nNOS表达出现一定程度的上调,而损伤性脑缺血组则出现nNOS表达的明显上调,预先给与CIP可一定程度上防止损伤性脑缺血所致的nNOS表达的过度升高。在MTPG4-CIP组,预先侧脑室注射mGluR2／3阻断剂MTPG,可阻断CIP引起的nNOS表达增加,但对神经元的存活无影响。而在MTPG＋CIP＋损伤性缺血组中,出现大量锥体神经元DND,同时nNOS的表达较MTPG＋CIP组明显增加,该增加为损伤性脑缺血所致,而非MTPG的作用。结论：nNOS催化产生的NO作为mGluR2／3的下游分子参与脑缺血预处理过程中mGluR2／3介导的脑缺血耐受的形成。     

电针对帕金森病模型大鼠腹侧被盖区TH和nNOS表达的影响

目的观察不同频率电针对帕金森病（PD）模型大鼠腹侧被盖区（VTA）酪氨酸羟化酶（TH）和神经元型一氧化氮合酶（nNOS）表达的影响。方法将30只SD大鼠,随机分为5组：正常对照组,假手术组、模型组,PD模型低频电针组和高频电针组。采用右侧纹状体内注射6-羟基多巴胺（6～OHDA）制备PD模型,取合谷和太冲穴,分别给予低频（2Hz）和高频（100Hz）电针治疗。免疫组织化学方法观察VTA的TH和nNOS表达。结果与正常对照组相比,PD模型大鼠vTA的TH表达减少、nNOS表达增加,高频电针可增加其TH表达和降低nNOS表达,低频电针对其没有影响。结论高频电针治疗PD的机制之一可能是通过降低PD模型大鼠VTAnNOS表达,从而减少因NO的产生引起的TH标记的DA能神经元的死亡。     

肢体缺血预适应的肝保护作用与一氧化氮／内皮素-1系统关系的研究

目的：观察肢体缺血／再灌注（I／R）后一氧化氮／内皮素-1（NO／ET-1）失衡与肝损伤的关系以及缺血预适应（1pc）对NO／ET-1系统的调节作用。方法：实验用雄性Wistar大鼠18只,随机分为3组（n=6）：对照组（control）、缺血／再灌注组（I／R）和缺血预适应组（IPC＋I／R）,分别测定血浆谷草转氨酶（ALT）、谷丙转氨酶（AST）;血浆和肝组织一氧化氮（NO）、内皮素-1（ET-I）的含量变化,一氧化氮／内皮素-1（NO／ET-1）比值及肝组织的总一氧化氮合酶（tNOS）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、结构型一氧化氮合酶（cNOS）的水平;免疫组化法检测肝组织的诱导型一氧化氮舍酶（iNOS）、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的表达;HE染色,在光学显微镜下观察肝组织的形态学改变。结果：发现肢体再灌注期血浆和肝组织NO、ET-1均明显增加,而NO／ET-1的比值却明显降低,同时血浆ALT、AST升高,光学显微镜下肝细胞、内皮细胞肿胀,肝细胞变性及肝窦淤血,炎性细胞浸润,肝损伤加重,肢体I／R后肝组织iNOS的表达增强,而eNOS（主要为eNOS）的表达减少,伴有总NOS活性增强。说明肢体缺血再灌注后肝组织内皮源的NO产生减少,而非内皮源的NO产生增多;IPC减轻了肢体I／R后引起的NO／ET-1失衡。结论：肢体I／R后肝组织损伤与NO／ET-1失衡有关,IPC对肢体I／R继发的肝组织损伤的保护作用可能是通过对NO／ET-1系统的调节作用而介导的,此时内皮源的NO产生增加,非内皮源的NO产生减少。     

Naringin protects viscera from ischemia/reperfusion injury by regulating the nitric oxide level in a rat model

We investigated the effects of naringin on small intestine, liver, kidney and lung recovery after ischemia/reperfusion (I/R) injury of the gut. Rats were divided randomly into four groups of eight. Group A was the sham control; group B was ischemic for 2 h; group C was ischemic for 2 h and re-perfused for 2 h (I/R); group D was treated with 50 mg/kg naringin after ischemia, then re-perfused for 2 h. Endothelial nitric oxide synthase (eNOS) and inducible nitric oxide synthase (iNOS) expressions were detected by immunolabeling. We also measured arginase activity, amounts of nitric oxide (NO) and total protein. iNOS was increased significantly in the small intestine, liver and kidney in group C. iNOS was decreased significantly only in small intestine and lung in group D. eNOS was increased significantly in the small intestine, liver and lung in group C. eNOS was decreased in small intestine, liver and lung in group D; however, eNOS was decreased in the kidney in group C and increased in the kidney in group D. The amount of NO was decreased significantly in all tissues in group D, but arginase activity was decreased in the small intestine and lung, increased in the kidney and remained unchanged in the liver in group D. The total protein increased in the small intestine and liver in group D, but decreased significantly in the kidney and lung in group D. Naringin had significant, salutary effects on the biochemical parameters of I/R by decreasing the NO level, equilibrating iNOS and eNOS expressions, and decreasing arginase activity.     

神经元型一氧化氮合酶(nNOS)与疼痛

一氧化氮(NO)是神经元细胞内一种新型的神经递质,它由一氧化氮合酶(NOS)催化而成。在神经系统中神经元型一氧化氮合酶(nNOS)是NO合成的关键酶。大量研究表明,nNOS可调节多种生理和病理过程诸如炎性痛和神经病理性疼痛。该文通过介绍nNOS的结构、分布和影响nNOS活性的因素,阐述了nNOS在病理性疼痛中的重要作用,为此可通过调节nNOS表达来达到调节生理和病理过程。     

Reduced neuronal nitric oxide synthase is involved in ischemia-induced hippocampal neurogenesis by up-regulating inducible nitric oxide synthase expression

Nitric oxide (NO), a free radical with signaling functions in the CNS, is implicated in some developmental processes, including neuronal survival, precursor proliferation, and differentiation. However, neuronal nitric oxide synthase (nNOS) -derived NO and inducible nitric oxide synthase (iNOS) -derived NO play opposite role in regulating neurogenesis in the dentate gyrus after cerebral ischemia. In this study, we show that focal cerebral ischemia reduced nNOS expression and enzymatic activity in the hippocampus. Ischemia-induced cell proliferation in the dentate gyrus was augmented in the null mutant mice lacking nNOS gene (nNOS−/−) and in the rats receiving 7-nitroindazole, a selective nNOS inhibitor, after stroke. Inhibition of nNOS ameliorated ischemic injury, up-regulated iNOS expression, and enzymatic activity in the ischemic hippocampus. Inhibition of nNOS increased and iNOS inhibitor decreased cAMP response element-binding protein phosphorylation in the ipsilateral hippocampus in the late stage of stroke. Moreover, the effects of 7-nitroindazole on neurogenesis after ischemia disappeared in the null mutant mice lacking iNOS gene (iNOS−/−). These results suggest that reduced nNOS is involved in ischemia-induced hippocampal neurogenesis by up-regulating iNOS expression and cAMP response element-binding protein phosphorylation.