致病性副溶血性弧菌菌落杂交检测体系的优化

对常见食源性致病菌副溶血性弧菌的杂交条件进行了优化。基于副溶血性弧菌的tdh,trh,toxR基因选用了3种探针序列,从菌落杂交样品的预处理方法、杂交时间和显色检测等方面对基于副溶血性弧菌毒力基因的原位杂交实验进行了条件优化。结果表明,采用80℃热固定2 h,37℃预杂交10 min后杂交8 h以及封闭1 h的改良方法可获得高特异性、低背景且着色清晰的实验结果。优化的菌落杂交技术检测副溶血性弧菌与传统检测方法相比,具有高效、准确、可区分致病性菌株的优点,为水产品中副溶血性弧菌致病菌株和非致病菌株的同步检测和筛选提供参考。     

三峡库区消落带外来植物入侵与景观基质组成结构的关联性

外来物种入侵过程不仅受入侵地生境的影响,也受到周边景观基质的影响.厘清景观基质对外来入侵物种的影响,对于外来物种的入侵管控具有重要意义.本研究针对长江三峡库区消落带植物群落开展调查,评估三峡库区消落带外来植物入侵现状;在岸线以上(含消落带)2000 m范围内划分出10个景观格局尺度,采用14个指标分析景观基质组成结构;...     

New Plants of Gesneriaceae from Guangxi of China (Cont. I)

Five new species of Gesneriaceae from Guangxi of China are described and illustrated. They are Oreocharis heterandra , Didymostigma leiophyllum , Chirita macrodonta ,C. macrorhiza and C. liujiangensis.     

香椿离体快繁技术研究

６～７月取香棒当年生半木质化、具腋芽的茎段为外植体,诱导腋芽萌发,进行繁殖培养。通过大量试验,筛选出各阶段适宜的培养基组成。萌芽诱导阶段培养在ＭＳ＋６－ＢＡ０．２ｍｇ／Ｌ中,腋芽萌发早,生长快;在继代和增殖培养中以ＭＳ＋６－ＢＡ０．２ｍｇ／Ｌ效果较好,ＭＳ＋ＺＴ０．２ｍｇ／Ｌ＋ＧＡ３２．０ｍｇ／Ｌ次之。培养３０天繁殖倍数３．１～４．０,在仅含ＭＳ有机元素。铁盐减半、蔗糖１５ｇ／Ｌ的固体培养基中,附     

抗黄曲霉毒素B1单链抗体在Sf9昆虫细胞中的表达与性质分析

目的:在原核表达抗黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)单链抗体(single chain Fv fragment,scFv)研究的基础上,为进一步了解和提高抗AFB1 scFv的活性,利用Sf9昆虫细胞表达抗AFB1 scFv,并对其活性进行探索研究。方法:构建pFastBac 1-scFv2E6VHVL重组质粒,将重组质粒转化Escherichia coli (E. coli) DH10Bac细胞,进行蓝白斑筛选,挑取阳性克隆。提取相应的重组杆状病毒穿梭载体Bacmid侵染Sf9昆虫细胞,表达scFv,利用镍亲和层析法纯化scFv,并以ELISA检测scFv活性。结果:蓝白斑筛选后,经菌落PCR和测序验证挑取的白斑阳性单克隆含有正确的单链抗体基因。提取相应的重组杆状病毒穿梭载体Bacmid侵染Sf9昆虫细胞,通过Western blot检测得知抗AFB1 scFv在Sf9昆虫细胞中成功表达。AFB1对scFv的抑制中浓度(IC₅₀)为30μg/ml。结论:与E. coli BL21(DE3)表达系统相比,scFv灵敏度转好,但仍有较大提升空间。     

基于CDR2和CDR3区随机突变筛选抗黄曲霉毒素B1单域重链抗体的研究

基于抗原-抗体特异性反应的免疫学方法是黄曲霉毒素B1的常用检测方法。为制备针对AFB1的抗体,综合参考已报道的噬菌体文库筛选的抗AFB1单域重链抗体（variable domain of heavy chain of heavy chain antibody,VHH）序列,合成一条经密码子优化[适于大肠杆菌（Escherichia coli,E. coli）表达]的高同源性序列。在抗AFB1 VHH的CDR2和CDR3区引入部分随机突变,构建噬菌体抗体库。采用phage-ELISA技术,以AFB1O-OVA为包被抗原,淘选单域重链抗体库,经过4轮筛选,获得15株能与AFB1特异性结合的阳性克隆。以结合力最高的1株克隆为材料,扩增相应的VHH基因,构建表达质粒pET-22b-VHH。在E. coli BL21（DE3）中表达VHH,经间接竞争ELISA分析,获得的抗AFB1 VHH的灵敏度约为10μg/mL。     

稻田与旱地土壤自养微生物同化碳在土壤中的矿化与转化特征

选择亚热带地区3种典型稻田和旱地土壤,应用碳同位素^14C-CO₂标记示踪技术结合室内模拟培养试验,研究自养微生物同化碳(“新碳”)在土壤碳库中的矿化和转化特征.结果表明: 在100 d的培养期内,“新碳”的矿化经历了先上升、10 d后缓慢下降、最后渐趋稳定的3个阶段.“新碳”的矿化比例为8.0%～26.9%,矿化速率为0.01～0.22 μg ¹⁴C·g^-1·d^-1,其中,稻田土壤为0.01～0.22 μg ¹⁴C·g^-1·d^-1,旱地土壤为0.01～0.08 μg ¹⁴C·g^-1·d^-1,而原有有机碳的矿化比例为1.6%～5.7%,矿化速率为1.3～25.66 μg C·g^-1·d^-1.土壤活性碳库\[可溶性有机碳(DOC)、微生物生物量碳(MBC)\]中,¹⁴C-DOC在培养初期(0～10 d)先上升,升高幅度达0.3 mg·kg^-1,10～30 d又迅速下降,下降幅度达0.42 mg·kg^-1,至30 d后缓慢下降.¹⁴C-MBC的波动与¹⁴C-DOC不同,在培养初期(0～10 d)先迅速下降,10～30 d又迅速上升,至40 d后缓慢下降并趋于稳定.水稻土¹⁴C-DOC/DOC的转化更新速率明显大于旱地,而旱地¹⁴C-MBC/MBC的转化更新速率大于水稻土.
     

文县疣螈资源现状、威胁因素及保护对策

文县疣螈Tylototriton wenxianensis分布在文县、平武、青川、阆中、奉节和雷山,但只有文县、青川、平武3县相连成片,为岷山栖息地,面积约1800km2,数量约30000条。文县疣螈对海拔1000～1400m的潮湿陆地森林或泥底的水域环境选择较强,以森林或林缘地带积水不深、植被良好、基底多泥的小水塘为繁殖发育场所。文县疣螈面临茶园扩张、薪柴、干旱和分布区狭窄的威胁。调整茶叶发展战略,加强林地保护,推动茶叶集约化加工,研制并推广小型节能炒茶炉,人工增建小泥塘,保护和扩大最适栖息地,资助社区保护组织是缓解这些威胁的有效对策。     

粗根荨麻水提取部分对佐剂性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF—α及PGE2的影响

观察滇产粗根荨麻水提取部分对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠腹腔巨噬细胞(peritoneal macrophages,PMcp)分泌肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)及前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)的影响.建立大鼠佐剂性关节炎模型,Ur水提取部分连续灌胃给药14或21 d后分次获取大鼠腹腔巨噬细胞,脂多糖(lipopolysacehafide,LPS)诱导大鼠腹腔巨噬细胞,用酶联免疫吸附法检测培养上清液中TNF-α及PGE2水平.从大鼠腹腔巨噬细胞TNF-α及PGE2分泌较正常组升高,Ur水提取部分(400,200 mg/kg)对LPS诱导的AA大鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α及PGE2水平有明显抑制作用.滇产粗根荨麻水提取部分对佐剂性关节炎的治疗作用可能与其抑制腹腔巨噬细胞分泌TNF-α及PGE2有关.