致病性副溶血性弧菌菌落杂交检测体系的优化

对常见食源性致病菌副溶血性弧菌的杂交条件进行了优化。基于副溶血性弧菌的tdh,trh,toxR基因选用了3种探针序列,从菌落杂交样品的预处理方法、杂交时间和显色检测等方面对基于副溶血性弧菌毒力基因的原位杂交实验进行了条件优化。结果表明,采用80℃热固定2 h,37℃预杂交10 min后杂交8 h以及封闭1 h的改良方法可获得高特异性、低背景且着色清晰的实验结果。优化的菌落杂交技术检测副溶血性弧菌与传统检测方法相比,具有高效、准确、可区分致病性菌株的优点,为水产品中副溶血性弧菌致病菌株和非致病菌株的同步检测和筛选提供参考。     

对虾白斑综合征病毒基因组快速定性定量方法的建立

对于对虾白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)全基因组样品,使用限制性内切酶酶切以及荧光绝对定量的方法进行分析,建立了WSSV全基因组快速定性定量的方法。定性实验通过对GenBank中WSSV基因组序列深度分析,选择确定合适的限制性内切酶BamHI对基因组进行酶切,通过比对实际酶切结果和软件模拟酶切结果,以定性待测样品。定量实验使用荧光定量试剂盒,通过建立标准曲线的方法对未知浓度的WSSV基因组样品进行绝对定量。实验结果表明,结合使用酶切分析和荧光定量的方法可以准确、快速、方便、经济地对WSSV基因组样品进行定性定量分析,为进一步深入研究WSSV基因组奠定坚实基础。     

黄磷及其化合物急性吸入致大鼠急性肺损伤或急性呼吸窘迫综合征模型的制作

目的建立黄磷及其化合物急性吸入致大鼠急性肺损伤（ALI）/急性呼吸窘迫综合征（ARDS）的模型。方法健康SD大鼠48只随机分为对照组以及实验组（0、4、12、24、48 h时间点处死）。采用自制染毒装置,间歇染毒形成ALI/ARDS模型。观察ALI/ARDS大鼠动脉血气分析以及肺系数和肺组织病理变化。结果肺损伤后大鼠动脉血气分析以及肺组织病理改变明显恶化,肺系数较对照组明显增大。结论成功地建立了黄磷及其化合物急性吸入致大鼠ALI/ARDS的模型,为黄磷及其化合物吸入中毒的防治研究提供良好实验基础,同时也适用于其他气体吸入致ARDS的实验研究。     

地中海富盐菌中phaB基因的鉴定及PHBV前体供应途径的分析

【目的】进一步揭示地中海富盐菌(Haloferax mediterranei)中聚羟基丁酸羟基戊酸酯[poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate),PHBV]前体供应的途径并鉴定其中的关键基因。【方法】将细菌及其他古菌中已鉴定的与聚羟基脂肪酸酯前体(3-羟基脂酰-CoA)供应相关的酶与地中海富盐菌预测的全蛋白质组进行同源性比对,得到相似性比较高的5个基因,分别命名为:phaB1,phaB2,phaJ1,phaJ2和phaJ3。首先利用RT-PCR检测了5个基因在产PHBV的条件下的转录情况。然后利用同源重组双交换的方法,将5个基因分别或组合敲除,得到突变株:ΔphaB1,ΔphaB2,ΔphaJ1,ΔphaJ2,ΔphaJ3,ΔphaB1phaB2,ΔphaJ1phaJ2和ΔphaJ1phaJ2phaJ3。并在突变株ΔphaB1phaB2中分别互补phaB1和phaB2基因。【结果】无论是将3个phaJ基因单独敲除,还是组合敲除,对地中海富盐菌PHBV的积累都没有明显影响。单独敲除phaB1基因对PHBV的积累没有明显影响,单独敲除phaB2基因导致突变株PHBV产量明显下降,而且3-HV单体组分所占的摩尔比例也有所下降。将phaB1和phaB2基因同时敲除后,得到的突变株不再产生PHBV。【结论】在地中海富盐菌中可能主要存在由乙酰-CoA和丙酰-CoA提供PHBV前体的途径,其中编码乙酰乙酰-CoA还原酶的两个基因即为phaB1和phaB2。     

东北三省2021年水稻审定品种的核心亲本遗传多样性与籼粳分化北大核心CSCD

为了阐明东北三省近年育成水稻品种的遗传基础,该研究通过对2021年育成的256个水稻新品种的系谱进行分析,确定了20个材料为育种核心亲本,并利用44对多态性SSR分子标记和34对InDel籼粳特异性分子标记分析了它们的遗传多样性和籼粳分化程度。结果表明:(1)SSR标记能够高效评价参试材料的多样性水平,共检测到130个等位基因,每个位点检测等位基因(Na)变异为2~5个,平均为2.95个;基因多样性指数(H)变异为0.10~0.75,平均为0.41;多态性信息含量(PIC)变异为0.09~0.70,平均为0.36。(2)遗传多样性分析表明,东北三省20份水稻核心亲本的整体多样性水平较低,黑龙江省核心亲本多样性略高于辽宁省和吉林省。(3)NJ聚类分析表明,20份核心亲本可以划分为3个类群,分别为辽宁类群、吉林类群和黑龙江类群。(4)遗传结构分析表明,20份核心亲本可划分为2个稳定的类群,其中辽宁省核心亲本均处于A类群,黑龙江省核心亲本均处于B类群。(5)籼粳分化分析表明,20份核心亲本遗传背景均为粳稻类型,但都含有少数籼型位点,其籼型基因频率F在0.01~0.19范围内。研究认为,东北三省水稻育种核心亲本遗传基础狭窄、使用频率较高是导致育成品种遗传多样性水平较低的可能原因,在育种中亟待挖掘新种质、引入新资源,丰富遗传背景。     

转录激活蛋白的分子结构研究进展

在转录激活蛋白分子中,DNA结合区和转录激活区分别位于两个结构域中。DNA结合区有三种基本结构,即螺旋-转折-螺旋结构、锌指结构和亮氨酸拉链结构。DNA结合区的结构特征决定着DNA-蛋白质相互作用的特异性。转录激活区为带负电的亲水性α-螺旋结构,激活作用的强弱取决于激活区的负电性和空间结构。     

用透析膜从琼脂糖胶中回收DNA片段

分离与回收DNA片段是基因操作的重要环节之一。本文介绍了一个用透析膜从琼脂糖胶中回收 DNA 片段的改进方法。利用本法回收DNA片段洗脱容易、节约时间、回收率在80％ 左右。回收的 DNA片段可用于酶切反应、连接反应和用缺口位移反应制备32p标记DNA探针。     

益生菌联合低GI低碳饮食疗法对肥胖症患者的减脂效果

目的研究益生菌联合低GI低碳饮食疗法对肥胖症患者的减脂效果。方法纳入2020年3月至2021年12月我院招募的100例肥胖症患者作为研究对象,按随机数字表法分为对照组和观察组,各50例。对照组患者接受常规肥胖症健康宣教,3个月后复查相关指标。观察组则在对照组基础上给予益生菌联合低GI低碳饮食疗法干预,干预3个月。对比分析干预前后两组患者的肥胖情况（BMI、肌肉率和体脂率）、高血压发生率、高血脂发生率和身体自信心评分（PSPP）以评价干预效果。结果 干预后,对照组患者BMI、肌肉率、体脂率,PSPP评分,高血压发生率和高血脂发生率与干预前比较,差异均无统计学意义（均P>0.05）。干预后,观察组患者肌肉率和PSPP评分均高于对照组（t=5.890、3.012,P<0.001、=0.003）;观察组患者BMI、体脂率、高血脂发生率和高血压发生率均低于对照组（t或χ2=13.335、10.036、4.310、4.167,P<0.001、<0.001、=0.037、=0.041）。结论 益生菌联合低GI低碳饮食疗法不仅有助于降低肥胖症患者的脂肪量,还有助于降低肥胖症患者...     

酵母SUC2基因上游顺序对其表达的影响

从SUC2基因上游约—900bp向起始密码进行系列缺失。将带有这种缺失上游区的SUC2基因插入多拷贝质粒,并转化进不产蔗糖酶的酵母细胞。测定了这些缺失株表达蔗糖酶的数量。结果表明:在葡萄糖阻遏条件下,SUC2上游区缺失从-636bp到-179bp的不同细胞,糖基化蔗糖酶的表达量逐渐升高。和野生型相比,SUC2上游区缺失到-223bp和-179bp的细胞糖基化蔗糖酶量增加100倍以上。在葡萄糖去阻遏条件下,SUC2上游缺失从-395bp到-179bp的不同细胞,糖基化蔗糖酶的表达量只显示微弱的去阻遏效应。缺失末端达-89bp和-41bp的细胞只表达很少的糖基化蔗糖酶,但是非糖基化蔗糖酶的表达量明显增加。