针对核因子-kB P65基因的短发夹干扰RNA逆转录病毒载体构建与鉴定

目的:构建针对人核因子kB亚基P65基因mRNA的短发夹干扰RNA(shRNA)逆转录病毒表达载体,并探讨小干扰RNA(siRNA)靶向抑制NF-kB P65基因表达的作用.方法:根据shRNA设计原则,在人NF-kB P65全长序列中选取合19个核苷酸靶序列,设计形成siRNA的DNA模板并克隆到shRNA表达载体pSUPER.retro.neo中,构建针对NF-kB P65基因的shRNA表达载体.经293A细胞包装,并感染NIH3T3细胞进行病毒滴度测定后,感染THP-1细胞.分别采用RT-PCR和Western blot从mRNA和蛋白水平检测干扰效果.结果:限制性酶切和基因测序证实针对人NF-kB P65亚基的shRNA表达逆转录病毒载体成功构建;其感染THP-1细胞后,NF-kB P65的mRNA和蛋白表达明显抑制.结论:成功构建了NF-kB P65 shRNA逆转录病毒表达载体,该载体能高效感染THP-1并明显抑制NF-kB P65的表达.     

植物乳杆菌黏附大鼠小肠黏液及机制的研究

分析了6种植物乳杆菌黏附大鼠小肠粘液的能力,并分析了介导黏附性的主要因素。结果表明,植物乳酸杆菌向大鼠小肠粘液的黏附具有菌种特异性,其黏附作用是甘露糖特异性的,细胞外表蛋白质、碳水化合物和(脂)磷壁酸可能参与了黏附过程。     

牛αS1-酪蛋白5＇调控序列驱动人α-LA基因与LacZ基因在牛乳腺上皮细胞中的表达

将牛αS1-酪蛋白5＇调控序列约1．2kb的片段,连接到含SV40启动子调控下β-半乳糖苷酶基因（LacZ）的PSV载体上,做为启动子,在其后连接0．76kb的人α-乳白蛋白基因（α-LA）,构建真核表达载体αS1-LA-psv．采用组织块接种法,培养奶牛乳腺上皮细胞,经传代纯化后,对细胞接种存活率、群体倍增时间、生长曲线、形态学等生物学性状进行检测,用免疫荧光细胞染色法对培养的奶牛乳腺上皮细胞进行角蛋白18鉴定,结果表明,成功建立奶牛乳腺上皮细胞系,细胞传至20代以上时仍保持旺盛的增殖活力．将构建的真核表达载体αS1-LA-psv转染奶牛乳腺上皮细胞,培养24～120h均检测到了β-半乳糖苷酶的表达;培养72h检测到细胞中人α-乳白蛋白的表达,表达量约为0．64g／L．实验结果表明,建立的奶牛乳腺上皮细胞系具有外源基因表达活性,得到的牛αS1-酪蛋白5＇调控序列能作为启动子指导外源基因的表达,构建的真核表达载体能在体外培养的牛乳腺上皮细胞中同时表达人α-乳白蛋白和β-半乳糖苷酶．     

干旱胁迫下氮素营养与根信号在气孔运动调控中的协同作用

干旱胁迫下根系与地上部分之间的信息传递可使植物叶片及时感知土壤水势变化,从而使植物在没有真正受到干旱伤害时即可做出主动、快速的抗旱应答反应,而在这一过程中,脱落酸（abscisic acid,ABA）和pH起着关键的作用。本研究表明。干旱胁迫下鸭趾草（Commelina communis L．）、番茄（Lycopersicon esculentum Mill．）和向日葵（Helianthus annuus L．）木质部汁液中pH的变化很不相同,且该pH变化和木质部汁液中硝态氮离子浓度的变化没有直接的关系;然而,饲喂实验表明,无论对于何种植物,蒸腾流中硝态氮离子浓度的增加都可有效地增加气孔对ABA的敏感度;分根实验进一步表明,土壤中硝态氮营养的增加可明显提高气孔对根信号的敏感度。以上结果说明,氮素营养可以和根信号相互作用共同操纵气孔运动。     

不同分子量大豆低聚肽抗氧化活性与抗疲劳关系研究

比较两种不同分子量大豆低聚肽的抗疲劳与抗氧化活性,并探求抗疲劳与抗氧化之间的关系。80只小鼠分四组,经口给予两种分子量不同的大豆低聚肽(A、B)以及大豆分离蛋白、生理盐水三周后,进行游泳实验,检测肝糖元、肌肉乳酸、乳酸脱氢酶、血尿氮、肝组织SOD等生理指标,比较其抗氧化和抗疲劳效果,并研究抗氧化指标与抗疲劳指标之间的关系。灌喂分子量较小的B组力竭游泳时间明显长于其它组,乳酸脱氢酶含量、肌肉乳酸生成量、血尿氮含量明显低于其他组,肝糖元、SOD活力明显高于其他组。SOD活力与力竭游泳时间之间具有线性关系,因此,小分子大豆肽具有更强的抗疲劳和抗氧化活力。并且抗疲劳与抗氧化之间存在一定的相关性。     

鹿茸血制备ACE抑制肽的酶解条件优化

以天山马鹿的鹿茸血为原料,通过体外检测方法检测不同酶及酶解条件下的产物的ACE抑制肽活性及抗氧化活性。结果表明,以A lcalase碱性蛋白酶水解,底物浓度6%、加酶量40μl/g蛋白、pH 8.0、温度55℃的条件下,酶解3 h,水解度为28.0%,酶解产物的血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzym e,ACE)抑制活性可达93.55%,与抗氧化活性呈正相关关系。     

影响毕赤酵母高效表达外源蛋白的因素

分析了毕赤酵母高效表达外源蛋白的机理以及影响毕赤酵母表达外源蛋白的作用因素。     

斜纹夜蛾多角体病毒包埋型病毒受体的鉴定

蔗糖密度梯度离心法提纯斜纹夜蛾核多角体病毒(Spodoptera litura multinucleocapsid nucleopolyhdrovirus,SpltMNPV)包埋型病毒粒子(polyhedra-denved virus,PDV),以此病毒粒子作抗原,免疫家兔获得抗血清;用SDS裂解缓冲液提取斜纹夜蛾幼虫中肠组织细胞总蛋白.采用病毒铺覆蛋白印迹技术(VOPBA),利用抗PVD抗血清对病毒受体进行检测,结果表明斜纹夜蛾中肠细胞总蛋白中40kD、73kD、85kD的三种蛋白能够结合PDV.     

小麦品种品质性状的基因型因子分析

用陕西省关中小麦品种区域试验所选用的20个小麦品种(品系)在12个试点1996／97、1997／98两年度的数据资料,通过基因型因子分析,探讨小麦品种籽粒品质性状间相互关系的内在规律。结果表明：可将12个品质指标用4个“公共因子”表示。因子1对蛋白质含量、沉淀值、形成时间、稳定时间、软化度与评价值等品质性状起支配作用,主要反映的是蛋白质的质与量;因子2对湿面筋含量、容重和出粉率起支配作用,反映了湿面筋含量与磨粉品质之间存在着较密切的、直接的联系;因子3对籽粒硬度与吸水率起支配作用,反映了小麦籽粒的质地结构特性;因子4中,只有千粒重有较大载荷。表明千粒重与其它品质性状的直接联系较小,受相对较为独立的遗传因素控制。     

外源DNA在动物体内的吸收代谢

综述了外源DNA在动物体内组织和细胞的代谢命运。外源DNA经核酸酶不完全降解后可以通过胃肠道被哺乳动物吸收,外源DNA片段能够被哺乳动物细胞吸收并整合到宿主细胞基因组中。