转TK基因的人结肠癌细胞对多种原药敏感性的研究

构建了含有单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（HSV-TK）的重组逆转录病毒载体LTKSN．经PA317细胞包装后,感染人结肠癌细胞株LoVo．用G418筛选到稳定表达HSV-TK基因的细胞克隆LoVo／LTKSN．LoVo／LTKSN与野生型LoVo细胞相比,生长曲线无明显差异,细胞形态亦无改变．细胞毒试验证明LoVo／LTKSN对GCV的敏感性很高,半杀伤浓度IC50为0.5μmol/L,比野生型细胞提高了4000倍以上．三种不同的原药GCV,ACV和BVDU对LoLo／LTKSN具有效果不等的杀伤作用．BVDU和GCV联合作用效果更好．旁杀伤效果十分明显,低浓度GCV就可以将合10%LoVo／LTKSN的混合细胞中的大部分肿瘤细胞杀死．     

Sequencing and bacterial expression of a novel murine alpha interferon gene

A murine new alpha interferon gene (mIFN-αB) was found by primer-based sequencing method in a murine genomic DNA library. The gene was cloned and its sequence was determined. It was expressed in Escherichia coli under the control of the PL promoter which resulted in antiviral activity on mouse L-cells. The sequence of mlFN-αB has been accepted by GENEBANK.     

用单抗研究白细胞介素2的结构功能和抗原性

利用多价抗体及一组单克降抗体（ＭｃＡｂ）研究了人重组白细胞介素２（ｒＩＬ－２）的功能域和抗原性。中和试验表明：ｒＩＬ－２Ｎ端（１～２８）的ＭｃＡｂ具有明显中和ＩＬ－２活性,而中区（５９～７２）和Ｃ端（１０５～１３３）的ＭｃＡｂ则无此功能。排阻ＥＬＩＳＡ证实：ｒＩＬ－２的Ｎ端与中区接近,并共同构成一个表位（２Ａ９）;Ｃ端回折紧靠中区,但在Ｎ端对侧,且与中区的距离较Ｎ端更近。抗原性分析确定了４个显型表位（１～１９、４５～５４、５９～７２、１０５～Ｂ３）及２个隐型表位（２０～４４、７４～８８）。     

IL－2部分拮抗剂可用于IL－2突变体对受体亚基结合能力的初步鉴定

用定点突变法分别得到了两个人白细胞介素-2(IL-2)的部分拮抗剂15Val-IL-2和126Asp-IL-2以及一个为IL-2受体α亚基结合缺陷型的突变体62Leu-IL-2,当将15Val-IL-2或126Asp-IL-2与62Leu-IL-2共同保温时,62Leu-IL-2的活性受到明显抑制,对此现象机理的分析表明15Val-IL-2或126Asp-IL-2可用于IL-2受体亚基结合缺陷型突变体的初步鉴定.同时,这一思路在其它受体-配基系统中具有一定的适用性.     

多核苷酸磷酸化酶及其应用(上) 关于酶蛋白的研究

多核苷酸磷酸化酶(Polynucleotide phospho-rylase——Polyribonucleotide:Orthophosphate nuc-leotidyltransferase——E.C.2.7.7.8,以下简称PNPase)是一个很重要的酶,自1955年被Ochoa等发现以来,它在核酸研究的许多方面起了重要的作用。早期利用它合成的多或寡聚核苷酸的物理化学和生物学性质,证实了Watson-Crick关于DNA的双螺旋结构理论,阐明了遗传密码及其阅读方向。最近以来,它对特定顺序寡核苷酸的人工合成和RNA的结构分析等起着多方面的重要作用。PNPase所合     

永生化胶质细胞介导TH基因的长效基因治疗

胶质细胞是脑部疾病基因治疗中的理想载体细胞 ,但细胞来源有限 ,体外培养时间短等因素限制了原代胶质细胞在基因治疗中的应用。以SV4 0大T抗原转化原代大鼠原代胶质细胞得到的永生化胶质细胞 (RGLT)可解决这些问题。在成瘤性检测中 ,RGLT细胞在裸鼠皮下 (观察 4周 )和大鼠纹状体内 (观察 18个月 )均不能成瘤。将大鼠酪氨酸羟化酶 (TH)基因转入RGLT细胞得到RGLT TH细胞后 ,TH免疫组化和HPLC检测表明RGLT TH细胞可表达TH并在体外合成多巴胺。将RGLT TH细胞移值入 6 羟基多巴胺损毁的帕金森病 (PD)大鼠模型的纹状体后 ,可大幅提高纹状体内多巴胺含量并显著缓解PD症状 ,疗效稳定维持超过 18个月。这些结果表明永生化胶质细胞可以安全有效地用于神经退行性疾病的长效基因治疗。     

人白细胞介素家族的新成员—IL—19，IL—20，IL—21，IL—22，IL—23

白细胞介素是激活的T细胞分泌的一类细胞因子,它们在免疫调节中发挥重要作用,具有很高的临床应用价值。迄今为止,已有23种人白细胞介素被发现,构成了一个庞大的家族,其中2000－2001年间,就有5种人白细胞介素家族最新成员的序列被阐明,本文简单介绍了它们的结构,诱导表达方式,功能,及其信号相关受体等各个方面的最新研究进展。     

超级干扰素抑制A549增殖诱导其衰老

该研究利用MTT和结晶紫的方法证明sIFNα对肺癌细胞A549增殖有很强的抑制作用,而同样剂量的普通干扰素IFNα2b抑制作用要小很多。与对照组相比,sIFNα处理后,细胞形态发生改变,细胞体积变大,形态呈扁平状;Hoechst33258染色发现,细胞核形态无变化并且未检测到凋亡;SA-β-gal染色发现大多数细胞呈现阳性,同时,衰老相关蛋白p53和p21表达量明显上调。而IFNα2b处理组细胞形态基本没有变化,SA-β-gal染色也只有少部分的细胞呈现弱阳性。由此说明,sIFNα比IFNα2b能更好地抑制癌细胞增殖,其机制可能为诱导癌细胞发生衰老。     

乙型肝炎病毒核心抗原基因在大肠杆菌中的表达

乙肝病毒核心抗原(HBcAg)用于乙型肝炎的诊断是十分必需的,但从尸肝中提取可用于诊断的HBcAg十分困难。为了获得大量廉价的HBcAg用于临床诊断和流行病学检测,我们将HBcAg基因进行了重组,并在原核细胞中得到满意表达。 首先将带有完正ayw亚型乙型肝炎病毒DNA的pHBV-1质粒DNA(梁伟才惠赠,7.5kb)切下1504bp的BamHI片段,后者含有完整的HBcAg基因。将它插入pUR222的Bam     

多核苷酸磷酸化酶及其应用(下)——关于应用的研究

人们对于多核苷酸磷酸化酶(PNPase)的巨大兴趣,并非由于它在体内的生理意义(这方面还不清楚),而在于它的广泛应用及其所作出贡献。例如Nirenberg和Ochoa等应用PNPase研究遗传密码及其阅读方向,因此获得诺贝尔奖金。仅此即足以说明PNPase在应用方面的卓越贡献。这些细节过去已有报道,不拟赘述。近十年来PNPase又对核酸人工合成、RNA结构分析、以及合成具有生物功能的polyN等方面作出了重大的贡献,现就这几方面作些介绍。一、PNPase用于核酸的人工合成