牛体内,外受精胚胎玻璃化冷冻保存技术的研究初报

利用３种培养液即输卵管合成液（ＳＯＦ）、ＴＣＭ１９９和ＣＲｌａａ对牛体外受精后的卵母细胞进行培养,结果卵裂率分别达８５％、６７％和７２％,囊胚发育率分别为３７％、２１％和３０％。对所获得的囊胚利用ＥＦＳ玻璃化溶液进行冷冻保存。在１０％ＥＧ中预处理５ｍｉｎ后再移入ＥＦＳ４０平衡３０ｓ二步法冷冻保存的胚胎,其１解冻后继续发育率高达８６％,与对照组９１％相比无显性差异（Ｐ＞０．０５）。而ＥＦＳ３０二步     

影响哺乳动物卵母细胞玻璃化冷冻保存效果的因素

从屠宰场收集具有高遗传价值的卵母细胞进行冷冻保存,生产可移植胚胎,这为补充宝贵的种质资源以及物种遗传改良提供机会。虽然玻璃化冷冻技术已经成功保存了几种动物的卵母细胞,但由于卵母细胞对低温极其敏感,导致其进展十分缓慢。本文主要综述了卵母细胞脂质含量、卵丘细胞层、冷冻卵母细胞阶段、冷冻保护剂等因素对哺乳动物卵母细胞玻璃化冷冻保存效果的影响,为改善卵母细胞冷冻效果指引方向。     

体外培养条件下促性腺激素对昆明白小鼠卵母细胞成熟及卵丘扩展的影响

研究促卵泡激素（FSH）,人绒毛膜促性腺激素（hCG)对昆明白小鼠卵母细胞成熟和卵丘扩展的影响,以及体外培养时卵丘扩展与卵母细胞成熟之间的关系,FSH可以明显促进次黄嘌吟（HX）抑制条件下的卵丘－卵母细胞复合体CEO卵母细胞成熟及卵丘扩展,其最佳作用剂量为100IU／L,且FSH作用30分钟即可以使CEO获得恢复减数分裂的信息,在HX存在的条件下,FSH处理后10hr,CEO卵丘明显扩展,而生发泡破裂（GVBD）则在16－20hr明显增加,所有卵丘未扩展的CEO中卵母细胞均未发生GVBD,低剂量hCG单独或与FSH共同存在,对CEO卵母细胞成熟及卵丘扩展均无明显影响;高剂量hCG可以部分抑制FSH对卵母细胞成熟的促进作用,结果表明：FSH明显促进CEO卵母细胞成熟及卵丘扩展,而hCG却不具有此作用,体外培养条件下（含次黄嘌呤）,卵丘扩展是卵母细胞成熟的前提条件,但卵母细胞成熟并不需要卵丘完全扩展。     

FSH诱导卵丘细胞分泌一种促减数分裂物质

本实验利用卵母细胞的体外培养模型,将小鼠卵丘－卵母细胞复合体（CEO）和去卵丘卵母细胞（DO）在体外培养,系统研究了促性腺激素（FSH、hCG）诱导小鼠卵母细胞减数分裂的机制。结果显示,FSH能剂量依赖性地诱导CEO恢复减数分裂（Fig.1),但对DO无影响;hCG对CEO、DO皆无效果（Fig.2);用FSH预处理CEO时间达到1小时后,就能显著诱导卵母细胞成熟,2小时后作用达到最大,不再增强（Fig.3);用FSH处理CEO2小时及24小时的培养液,能诱导DO恢复减数分裂,但预处理卵丘细胞24小时的培养液,并不能诱导DO恢复减数分裂（Fig.4A);这种培养液在70℃下30分钟后,仍能刺激DO成熟（Fig.4B);甾醇类物质合成抑制剂酮康唑,可剂量依赖性地抑制FSH的促减数分裂恢复作用（Fig.5)。这些结果说明,FSH可能诱导卵丘－卵母细胞复合体中的卵丘细胞分泌一种促减数分裂恢复物质;该物质用于卵母细胞,诱导其恢复减数分裂而成熟;这种物质可能是一种甾醇类物质。     

家养双峰驼卵巢卵母细胞的体外受精与早期发生的初步研究

本研究将采自屠宰母驼的卵卵母细胞在含有促性腺激素和胎牛血清的Ｍ１９９培养液中培养成熟后,将公驼附睾精子于含有咖啡因和牛血清蛋白的ＢＯ培养液中进行获能培养２小时,然后将成熟卵母细胞移入经过培养的精子悬液中,６－７小时以后将卵子移入含有胎牛血清及及丙酮酸钠的Ｍ１９９中继续培养。结果表明,经过成熟培养后有４６．７％（１４／３０）的卵母细胞发育为成熟卵子,并获得了４３．２％（１６／３７）的体外受精率,实验     

FSH诱导卵丘细胞分泌一种促减数分裂物质(英文)

本实验利用卵母细胞的体外培养模型,将小鼠卵丘－卵母细胞复合体（ＣＥＯ）和去卵丘卵母细胞（ＤＯ）在体外培养,系统研究了促性腺激素（ＦＳＨ、ｈＣＧ）诱导小鼠卵母细胞减数分裂的机制。结果显示,ＦＳＨ能剂量依赖性地诱导ＣＥＯ恢复减数分裂（Ｆｉｇ．１）,但对ＤＯ无影响;ｈＣＧ对 ＣＥＯ、 ＤＯ皆无效果（Ｆｉｇ．２）;用 ＦＳＨ预处理ＣＥＯ时间达到１小时后,就能显著诱导卵母细胞成熟,２小时后作用达到最大;不再增强（Ｆｉｇ．３）;用 ＦＳＨ处理ＣＥＯ ２小时及２４小时的培养液,能诱导ＤＯ恢复减数分裂,但预处理卵丘细胞２４小时的培养液,并不能诱导ＤＯ恢复减数分裂（Ｆｉｇ．４Ａ）;这种培养液在７０℃下３０分钟后,仍能刺激ＤＯ成熟（Ｆｉｇ．４Ｂ）;甾醇类物质合成抑制剂酮康唑,可剂量依赖性地抑制ＦＳＨ的促减数分裂恢复作用（Ｆｉｇ．５）。这些结果说明, ＦＳＨ可能诱导卵丘－卵母细胞复合体中的卵丘细胞分泌一种促减数分裂恢复物质;该物质作用于卵母细胞,诱导其恢复减数分裂而成熟;这种物质可能是一种甾醇类物质。     

ROS和丁内酯-Ⅰ抑制山羊卵母细胞的减数分裂

本文研究了ROS（Roscovitine）和丁内酯-Ⅰ（ButyrolactoneⅠ,BL-Ⅰ）两种细胞周期依赖性激酶抑制剂对山羊卵母细胞减数分裂恢复的抑制作用,并研究了抑制对卵母细胞成熟、激活和发育的影响。结果表明：ROS和BL-Ⅰ对山羊卵母细胞减数分裂恢复的抑制作用具有浓度依赖性;200μmol／LROS、100μmol／LBL-Ⅰ、100μmol／LROS＋6．25μmol／LBL-Ⅰ和50μmol／LROS＋25μmol／LBL-Ⅰ都能有效抑制山羊卵母细胞减数分裂的恢复,24h的抑制率分别为78．4％、80．9％、80．3％和77．8％。用ROS和BL-Ⅰ抑制24h后转为正常培养24h,各处理组卵母细胞的成熟率（分别为81．3％、81．9％、83．2％和85．2％）与对照组（83．0％）无显著差异;成熟卵母细胞的化学激活率分别为93．3％、96．2％、92．5％和90．5％,与对照组（97．8％）无显著差异。然而,抑制处理后卵母细胞的卵裂率和桑椹胚率降低,未能发育到囊胚。ROS和BL-Ⅰ抑制山羊卵丘扩展,并且转为正常培养后卵丘不能再扩展。ROS和BL-Ⅰ能够浓度依赖性地抑制山羊卵母细胞减数分裂,二者既可单独,又可降低浓度联合使用,但抑制山羊卵母细胞的浓度远高于牛和猪卵母细胞的;ROS和BL-Ⅰ抑制24h不影响山羊卵母细胞的成熟和激活能力,但影响卵母细胞的卵丘扩展和胚胎发育能力。因此,山羊卵母细胞减数分裂调控可能比它动物更精细。     

卵丘在卵母细胞成熟中的作用

卵丘是指在卵母细胞外周并与之进行代谢联系的颗粒细胞群;卵丘对于卵母细胞成熟有极其重要的作用。主要表现在卵丘参与维持卵母细胞减数分裂阻滞,诱导卵母细胞减数分裂恢复、支持卵母细胞细胞质的成熟。卵丘形态和卵丘扩展影响卵母细胞成熟。了解卵丘在卵母细胞成熟中的作用有助于帮助人们进一步揭示哺乳动物卵母细胞成熟的机制。     

促性腺激素对猪卵丘细胞-卵母细胞复合体体外减数分裂恢复作用的研究

本实验利用猪卵母细胞体外无血清培养技术,选用猪卵泡液中自然存在的次黄嘌呤（ＨＸ）作为卵母细胞自发成熟的抑制剂,研究了促性腺激素对猪卵丘细胞－卵母细胞复合体（ＣＥＯ）减数分裂恢复的具体作用。ＣＥＯ在含有不同浓度的促性腺激素（ＦＳＨ,ｈＣＧ,ＦＳＨ＋ｈＣＧ）的培养液中培养２４ｈ,观察卵母细胞减数分裂恢复（ＧＶＢＤ）情况。实验结果如下：１．ＦＳＨ（１－５００ＩＵ／Ｌ）能够明显刺激ＣＥＯ克服ＨＸ的抑制作用而恢复减数分裂（Ｐ＜０．０５）,该作用具有剂量依赖性;２．ｈＣＧ（１－５００ＩＵ／Ｌ）对ＣＥＯ减数分裂的恢复无明显作用;３．ｈＣＧ（１０－５００ＩＵ／Ｌ）与ＦＳＨ（１０,１００ＩＵ／Ｌ）无协同作用。上述结果表明,猪ＣＥＯ减数分裂的恢复可能主要依赖于ＦＳＨ的作用,该作用能使猪卵丘细胞产生一种或几种阳性因子,作用于卵母细胞,从而克服ＨＸ的抑制作用而恢复减数分裂。ｈＣＧ无明显作用,可能是因为卵丘细胞上没有ＬＨ受体或ＬＨ受体的数量不足     

猪体细胞核移植重构胚的体外发育

以卵丘细胞为核供体细胞组成重构胚,卵裂率达到56．7％,发育至桑椹胚率达到11．7％,囊胚率为6．7％,显著高于成纤维细胞重构胚（P＜0．05）。本文还研究了卵母细胞的采集方法、激活程序和卵龄对卵丘细胞核移植重构胚体外发育的影响。以血清饥饿法将卵丘细胞诱导G0/G1期,抽吸法／解剖法采集卵母细胞,体外培养33－44h,将卵丘细胞放至去核卵母细胞的卵周隙中,重构胚以钙离子载体A23817或电脉冲结合6－DMAP激活处理,体外培养6d。研究表明,卵母细胞采集方法、激活液中细胞松驰素（CB）、激活程度并不影响重构胚的发育（以卵龄44h的卵母细胞为受体）;而以电脉冲结合6－DMAP激活处理能提高重构胚发育能力（以卵龄33h的卵母细胞为受体）（P＜0．05）。本研究显示,以电脉冲结合6－DMAP激活卵丘细胞重构胚,体外能发育至囊胚。     

Investigation of the mechanism of temperature sensitivity of the electroreceptors of ampullae of lorenzini

In experiments on Black Sea skates (Raja clavata), the potential of the receptor epithelium of the ampullae of Lorenzini and spike activity of single nerve fibers connected to them were investigated during electrical and temperature stimulation. Usually the potential within the canal was between 0 and –2 mV, and the input resistance of the ampulla 250–400 k. Heating of the region of the receptor epithelium was accompanied by a negative wave of potential, an increase in input resistance, and inhibition of spike activity. With worsening of the animal's condition the transepithelial potential became positive (up to +10 mV) but the input resistance of the ampulla during stimulation with a positive current was nonlinear in some cases: a regenerative spike of positive polarity appeared in the channel. During heating, the spike response was sometimes reversed in sign. It is suggested that fluctuations of the transepithelial potential and spike responses to temperature stimulation reflect changes in the potential difference on the basal membrane of the receptor cells, which is described by a relationship of the Nernst's or Goldman's equation type.I. P. Pavlov Institute of Physiology, Academy of Sciences of the USSR, Leningrad. I. M. Sechenov, Institute of Evolutionary Physiology and Biochemistry, Academy of Sciences of the USSR, Leningrad. Pacific Institute of Oceanology, Far Eastern Scientific Center, Academy of Sciences of the USSR, Vladivostok. Translated from Neirofiziologiya, Vol. 12, No. 1, pp. 67–74, January–February, 1980.     

Determination of stoichiometry of radioiodination of proteins

A sensitive method for the detection of small quantities of hydrophobic antioxidant free radical scavengers such as butylatedhydroxytoluene (BHT) and butylatedhydroxyanisole (BHA) in aqueous samples is described. The procedure involves extraction of the hydrophobic free radical scavenger into an organic solvent phase, followed by the subsequent reaction of an aliquot of this extract with the stable cation radical tris(p-bromophenyl)amminium hexachloroantimonate (TBACA). In experiments with BHT and BHA, the loss of TBACA absorbance at 730 nm was found to be linearly proportional to the amount of antioxidant added, with quantities of BHT as small as 200 pmol being easily detectable. In aqueous suspensions of dimyristoylphosphatidylcholine vesicles, assays of the aqueous BHT concentration showed that BHT partitioned strongly into the membrane phase, achieving very high BHT/phospholipid ratios. For a given concentration of BHT, partitioning into the membrane phase was greater in large, multilamellar liposomes than in either small, single-walled vesicles or in purified rat brain synaptic vesicle membranes. Direct assay of BHT and BHA in phospholipid membranes, however, was complicated by a nonspecific interaction between TBACA and the phospholipid.