草莓高频离体再生体系的研究

以6个草莓品种为试材,研究了影响草莓不定芽再生的各种因素,建立离体叶片高效再生系统。结果表明,外植体基因型、激素种类及配比、叶龄等是影响草莓再生的主要因子,其中‘鬼露甘’叶片最佳芽诱导培养基为MS 2.0 mg/L 6-BA 0.1 mg/L IBA,‘嫜姬’叶片愈伤组织的诱导以MS 3 mg/L 6-BA 0.2 mg/L 2,4-D较好,而且1周左右的暗培养可以防止外植体的褐化。芽伸长的最适培养基为MS 0.5 mg/L 6-BA 0.5 mg/L IBA,生根的最适培养基为MS 0.2 mg/L IBA,试管苗移栽后成活率为87%。     

偃伏梾木组织培养及再生体系的建立(简报)

本文以偃伏株木(Cornus stolonifera)叶片为外植体,建立了其叶片再生体系.同时系统地研究了离体再生芽及丛生芽分化增殖的适宜培养基、不定根诱导的关键因子以及再生芽生根后植株移栽成活的影响因素.叶片外植体在添加0.5 mg/L 6-BA和1.0 mg/L IBA的1/2 MS培养基上再生频率达100%,平均每个外植体上再生芽数为5.0±0.7.不定芽在添加0.5 mg/L 6-BA和0.25 mg/LIBA的1/2 MS培养基上能有效增殖.再生芽在添加0.5 mg/L IBA的1/2 MS培养基上生根效果最佳.在叶片再生过程中选取典型组织进行扫描电镜观测,进一步证实了偃伏株木叶片直接体细胞胚发生过程.用携带有gus基因表达载体的农杆碱型EHA105农杆菌菌株浸染叶片外植体,能观察到其中gus基因的瞬时表达.     

李砧木Marianna离体叶片再生体系优化研究

以李砧木‘Marianna’试管苗新梢顶端第1片叶为外植体,研究激素组合、基本培养基种类及外植体类型等对不定芽再生的影响。结果表明:1/2 MS基本培养基和WPM培养基再生率显著高于MS和SH培养基;叶片附带叶柄的外植体再生率和再生不定芽数显著高于叶柄和切除叶柄的叶片外植体;最佳再生培养基为1/2MS+2.0mg/L TDZ+0.1 mg/L IBA+0.25%琼脂+3.0%蔗糖,最高再生率和再生不定芽数分别为81.7%和7.46±1.38个;最佳生根培养基为1/2MS+0.5~1.0 mg/L IBA,能获得96.7%生根率、较高的生根数和根长。     

蚊净香草快速繁殖研究

以蚊净香草嫩叶和叶柄为外植体进行培养,筛选合适的外植体与诱导、增殖和生根的最佳培养基。结果表明,叶片外植体在MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L培养基最适于诱导愈伤组织和不定芽;MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.3mg/L培养基有利于不定芽增殖;无根苗在含有低浓度无机盐和生长素水平的生根培养基上易生根,生根率高达100%。     

茎尖组织培养对'中涡1号'杨生理复壮作用的研究

以水培'中涡1号'杨的茎段为外植体,采用多代茎尖培养方式繁殖'中涡1号'杨再生植株.结果表明:'中涡1号'杨腋芽分化的最佳培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA;芽苗在MS+0.1 mg/L 6-BA+0.02 mg/L NAA培养基中继代增殖系数达到7.5;在生根培养基1/2MS+0.2 mg/L IBA+0.05 mg/L NAA上,生根率达到90%.采用透射电镜对叶片超微结构观察发现,多代茎尖培养繁殖的植株叶片较扦插繁殖苗植株的叶片细胞结构完整,叶绿体数量明显增多,且内部片层结构排列整齐,淀粉粒清晰可见,表明通过多代茎尖培养繁殖出的再生植株能实现'中涡1号'杨的生理复壮.     

香石竹叶片离体再生体系的建立

以香石竹(Dianthus caryophyllus Linn.)无菌苗叶片为外植体,从不同细胞分裂素及其他激素配合使用等方面进行筛选,建立香石竹叶片离体再生体系.结果表明,不同的细胞分裂素影响叶片不定芽分化频率,其中较低浓度的6-BA(0.5 mg·L-1)和TDZ(0.001 mg·L-1)配合使用能有效诱导香石竹叶片不定芽分化;添加一定浓度的PP333(4 mg·L-1)可提高叶片不定芽分化频率和平均芽数.香石竹叶片不定芽分化的适宜培养基为:MS 0.002mg·L-1TDZ 0.5 mg·L-16-BA 0.2 mg·L-1IAA 4 mg·L-1PP333;壮苗培养基为:MS 0.2 mg·L-1 6-BA 0.2 mg·L-1IAA;生根培养基为:1/2 MS.不定芽诱导频率达到42.61%,平均芽数为4.53个.     

红金钻蔓绿绒高频再生体系的建立

以红金钻根茎、叶片、叶柄为外植体,通过直接诱导不定芽和间接(愈伤组织)诱导不定芽途径,建立组培快繁体系。本研究发现:根茎直接诱导不定芽最佳培养基:MS+3 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+2 mg/L GA_3;通过愈伤组织间接诱导不定芽及其分化的最佳培养基:MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA;不定芽增殖最佳培养基:MS+3.0 mg/L 6-BA+0.8 mg/L IBA;生根最佳培养基为:1/2MS+0.75 mg/L NAA。将植株种植于草炭和珍珠岩以3:1混合的基质中,成活率达98%。     

华北蓝盆花的组织培养与植株再生

以华北蓝盆花（Scabiosa tschiliensis）无菌苗的叶片及叶柄为外植体,建立了华北蓝盆花的无性繁殖体系。结果表明,叶片外植体为诱导不定芽的适宜外植体,其不定芽诱导的适宜培养基为MS＋4.0 mg.L–16-BA,不定芽生根的最适培养基为MS＋2.0 mg.L–1IBA,幼苗移栽成活率可达70%以上。     

药用植物金荞麦愈伤组织诱导与植株再生

目前转基因技术已成为植物定向遗传改良的重要手段,而建立稳定高频的离体再生系统是实现遗传转化的基础和前提.本试验以25 ～30 d苗龄的金养麦(Fagopyrum dibotrys)无菌苗叶片、茎节间、叶柄为外植体进行愈伤组织诱导与植株再生研究.结果表明:叶片在MS +2,4-D 4.0 mg/L +6-BA 1.0 mg/L培养基上愈伤组织诱导率达到89％.茎节间在MS +2,4-D 2.0 mg/L +6-BA 2.0 mg/L培养基上愈伤组织诱导率为87％.叶柄在MS +2,4-D 4.0 mg/L +6-BA 2.0 mg/L+ IBA 0.2 mg/L培养基上的最高诱导率仅为54％.愈伤组织分化不定芽的适宜培养基为MS +6- BA2.0 mg/L +TDZ0.2 mg/L +NAA0.2 mg/L;金荞麦不定芽在1/2 MS +NAA 0.5 mg/L的培养基上生根效果最好.组培再生植株经炼苗后移栽到田间成活率达80％以上,且生长表现正常.高频完整再生体系的建立,为金荞麦进一步遗传操作和扩大药材资源奠定了基础.     

草莓高效离体叶片再生体系的建立

以草莓'明宝(Meiho)'和'红颊(Benihope)'的叶片为外植体,研究了不同基本培养基、暗培养时间、植物生长调节剂、叶龄、不同放置方式对其不定芽再生的影响.结果表明:各品种叶片不定芽离体再生的最佳条件不同.'明宝'叶片的最佳不定芽再生培养基为MS+2.5 mg/L TDZ+0.1 mg/L IBA+0.1 mg/L 2,4-D,叶片再生的最佳叶龄为30～40 d,再生率可达82.8%;'红颊'叶片的最佳不定芽再生培养基为MS+2.0 mg/L TDZ+0.1 mg/L IBA+0.1 mg/L 2,4-D,叶片再生的最佳叶龄在10～20 d,再生率可达79.8%.2个品种叶片暗培养14 d可以提高不定芽再生率;叶片正放比反放再生效果好;添加8 mg/L AgNO3和1 000 mg/L活性炭可有效提高再生率.     

药蒲公英再生体系的建立和优化

通过愈伤组织诱导和直接不定芽再生途径 ,建立了药蒲公英的快速高效再生系统。叶片外植体在含0.2mg LIAA和1mg LTDZ的MS培养基中培养 2周后便产生大量的丛生芽 ,在含有 0.5mg/L 2 ,4D和2mg/L 6BA的MS培养基中培养 30d后 ,形成明显的愈伤组织 ,愈伤组织块在含10mg/L 6BA的MS培养基中成功再生。对 9株再生植株进行RAPD检测表明 ,部分植株在DNA水平上发生了变异。与对照相比 ,再生植株的主要抗氧化成分无明显变化 ,保证了有效成分的稳定。     

资源植物罗布麻的愈伤组织诱导和植株再生研究

以罗布麻（Apocynum venetum L.）无菌苗的叶、茎和根作为外植体,在不同激素与浓度组合的MS培养基上进行愈伤组织诱导和植株再生研究。结果表明,在多个激素浓度配比的培养基中,罗布麻叶和茎的愈伤组织诱导率均可达到100%;但进一步将愈伤组织转接到含有不同激素组合的培养基进行不定芽分化时,叶和茎来源的愈伤组织的不定芽分化率有很大不同,茎来源的愈伤组织虽可在多个培养基中有不定芽分化,但最高诱导率仅达20%;而叶片来源的愈伤组织虽仅有4个激素组合培养基中有不定芽的分化,但最高分化率可达到35%。因此,构建罗布麻再生体系的最佳外植体应选择叶片。愈伤组织诱导与不定芽分化的最佳培养基均为：MS＋NAA0.1 mg/L＋6-BA 1.0 mg/L;不定芽在1/2MS＋NAA 0.2 mg/L生根培养基的生根效果最佳,不仅根群质量好,且生根率也高达100%;此再生苗的移栽成活率也最高,在适宜条件下可达75%。     

采用俄罗斯橄榄叶片和茎段诱导产生不定芽的高效再生方法

俄罗斯橄榄(Elaeagnus angustifolia L.)是一种具有很重要药用价值和生态意义的植物。以俄罗斯橄榄一年生幼苗的叶片和茎段为实验材料,探讨了细胞分裂素类(6-BA和Zt)和生长素类(NAA和IBA)两类激素不同组合以及不同配比对植株再生的影响,最后建立了一个高效的俄罗斯橄榄再生方法。结果表明,MS 培养基+ 0.5 mg/L 6-BA +0.2 mg/L NAA更适合叶片的再生,平均每个外植体能产生多达4.3个不定芽;而在MS培养基 + 1.0 mg/L Zt +0.5 mg/L NAA的条件下,茎段外植体再生出来的不定芽最多可以达到平均3.6个;再生芽在含有0.5 mg/L NAA的1/2 MS培养基上生根率达到100%。体外再生苗移栽到装有灭菌混合土(土∶泥炭∶沙子=1∶1∶1)的花盆中锻炼驯化,最后有77%的再生植株存活下来。此结果不仅对俄罗斯橄榄种质资源保护有重要的促进作用,另外也为其将来的遗传转化奠定了基础。     

大车前体外再生体系的建立和优化

大车前不仅有很高的药用价值,在生态学研究方面也是重要模式植物。关于大车前的组培,目前报道很少。我们通过不定芽直接再生和愈伤组织诱导两种途径,建立了大车前（Plantago major L. ‘Giant Turkish.’）的快速高效组培再生系统。完整的成熟种子培养在添加IAA和TDZ的MS培养基中,不经过愈伤的分化阶段,从子叶节的部位产生不定芽,直接不定芽的诱导频率达到100%。在0.2mg/L IAA和1.0mg/L TDZ作用下,培养4～5周后平均每个外植体产生再生芽的数目达到14.6个。对同一个外植体诱导得到的9株再生植株进行的RAPD检测表明,部分植株在DNA水平上发生了变异。以叶片作为外植体,在添加1.0mg/L NAA的MS固体培养基中培养3周后,伤口处形成愈伤组织,产生愈伤的频率平均为98%。愈伤组织在添加4.0mg/L 6BA的MS固体培养基中分化得到再生芽,分化频率为25%,平均每块愈伤产生再生芽2.8个。两种途径得到的再生芽转到1/2 MS培养基上均可生根、长成完整植株,小苗移栽到温室90%能够存活。     

茎瘤芥(榨菜)高效离体再生体系的建立

利用离体培养技术,以榨菜的3个主栽品种的子叶、带柄子叶和下胚轴为外植体,对影响榨菜植株再生的关键因素进行了优化.结果表明,培养25d不定芽的分化率最高;最佳不定芽诱导的激素组合为6-BA 2 mg/L+NAA 0.2 mg/L,其中带柄子叶不定芽的分化率达94.4％;“蔺市草腰子”和“郫县榨菜”容易诱导不定芽,而“永安小叶”不容易被诱导,说明基因型的影响比较大;不定根的最佳诱导激素为NAA 0.2 mg/L,其生根率为83.4％.榨菜高效离体再生体系的成功建立,为榨菜遗传转化、突变体筛选和种质资源保存打下了基础.     

An Efficient Protocol for Plantlet Regeneration via Direct Organogenesis by Using Nodal Segments from Embryo-Cultured Seedlings of Cinnamomum camphora L.

A simple and efficient plantlet regeneration protocol via direct organogenesis was established for camphor tree (Cinnamomum camphora L.). Stem segments with one node (SN explants) from embryo-cultured seedlings (EC seedlings) were used as explants. Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with 0.5 mg/L 2, 4-dichlorophenoxyacetic acid and 2.0 mg/L 6-benzyladenine was used to induce cotyledonary embryo germination. This medium was also used for EC seedlings propagation and adventitious bud induction from SN explants. Regenerated plantlets were cultured on hormone-free MS medium for elongation and root induction. The regeneration capability of SN explants was compared by using EC seedling lines established in this research. EC seedling line EL6 exhibited the highest adventitious bud induction frequency (91.7%) and the highest number of buds per responding explant (5.2), which was considered as the most efficient EC seedling line for further gene transformation research.     

Influence of growth regulators on plant regeneration from epicotyl and hypocotyl cultures of two groundnut (Arachis hypogaea L.) cultivars

This study was designed to evaluate the effect of phytohormones on plant regeneration from epicotyl and hypocotyl explants of two groundnut (Arachis hypogaea) cultivars. Explants cultured on media with auxins and in combination with cytokinin produced high frequency of callus. After four weeks, callus from these cultures was transferred to medium with cytokinin and reduced auxin, shoot buds regenerated from the cultures. A high rate of shoot bud regeneration was observed on medium supplemented with 2.0 mg/L BAP and 0.5 mg/L NAA. Among the different auxins tested, NAA was found to be most effective, producing the highest frequency of shoot buds per responding cultures. Of the two explants tested, epicotyl was found to be best for high frequency shoot bud regeneration. Multiple shoots arose on MS medium supplemented with BAP or kinetin (1.0–5.0 mg/L) plus IBA (1.0 mg/L), with maximum production occurring at 5.0 mg/L. The elongated shoots developed rootsin vitro upon transfer to MS medium supplemented with NAA or IBA (0.5–2.0 mg/L) and kinetin (0.5 mg/L) for 15 days.In vitro produced plantlets, were transferred to soil and placed in a glasshouse developed successfully, matured, and set seeds.     

南瓜高效再生体系的建立

南瓜(Cucurbita moschata)再生率较低, 为建立高效的南瓜再生体系, 以南瓜子叶为外植体, 进行35组不同激素浓度的不定芽诱导研究。结果表明, 南瓜再生受培养基中激素浓度和配比的影响, 适宜浓度6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)能有效促进不定芽形成; 单独使用脱落酸(ABA)诱导使南瓜子叶发黄, 但与6-BA组合使用可显著提高外植体的再生能力, 1.0 mg∙L ^-16-BA与0.5 mg∙L ^-1ABA组合南瓜芽再生率高达90.26%。将不定芽置于MS培养基中进行生根培养, 再生苗移栽易成活。从子叶接种到苗再生约需70天。