原发性胆汁性肝硬化家系成员的发病及机制初探

目的:研究原发性胆汁性肝硬化(PBC)家系患者发病时的临床表现、生化指标及人类白细胞抗原(HLA)基因分型的特征,分析该疾病的发病机制,以提高对该病的认识。方法:分别用临床生化分析试剂盒、间接免疫荧光法、免疫印迹法和微阵列聚合酶链式反应(PCR)等技术对收集的31个家系129例一级亲属进行生化指标、自身抗体和HLAⅡ基因分型的相关检测。结果:5个家系出现免疫异常,表现在抗核抗体(ANA)阳性,但仅有一个家系的一个成员出现抗线粒体抗体(AMA)M2型阳性,可诊断为PBC。其中,发现免疫异常的5个家系中2例一级亲属出现肝功能异常,两个家系发现HLAⅡ-DRB1(*08)基因型,另外两个家系共同存在HLAⅡ-DRB1(*07)基因型。结论:PBC具有一定的家族聚集性,其发病可能与HLAⅡ-DRB1(*08)密切相关。     

HLA—DRB1等位基因的多态性及其应用

HLA系统参与和调节机体免疫功能,是人类重要叫遗传标志,具有种族、地域差异。HLA—Ⅱ类系统中DRB1等位基因的多态性最丰富,它的准确分型直接影响器官移植的供体选择、法医学个体认定、HLA与疾病相关性及人类学等研究。本文综述了HLA—DRB1分型检测方法,不同种族人群HLA-DRB1等位基因的多态性,HLA—DRB1多态性研究在探讨人类起源、民族融合方面的价值,HLA—DRB1与肝炎、系统性红斑狼疮等疾病的相关性等。     

三代测序与靶向捕获技术联用进行高分辨HLA基因分型及MHC区域单倍体型精细鉴定

人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)的高分辨率、精准分型对于组织配型以及HLA相关疾病研究具有重要意义。本研究以12位原发性肝细胞癌病人的外周血为供试样本,分析二、三代测序数据用于高分辨率HLA分型的优劣势,同时结合探针捕获与三代测序技术对YH、HeLa标准细胞系以及一个原发性肝细胞癌病人的主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)区域进行靶向分析,探究长读长测序技术对于整个MHC区域精细分析的潜力。研究表明:(1)二、三代测序技术均能实现6～8位高分辨HLA分型,且两者分型结果一致。但是三代数据的覆盖均一度显著优于二代,不会出现明显的"断层"现象;(2)超长的三代数据可直接跨越整个扩增子,对于基因单倍体型的判定(phasing)具有明显优势。样本中92.79%的HLA基因能够得到准确的单倍体分型结果,远高于二代的75.65%;(3)长读长的三代测序数据不但能实现对MHC区域的更好组装,还具有对整个MHC共计3.6 Mb区域进行phasing的能力,而这将有助于明确各个突变位点、等位基因、非编码区等基因原件在每个MHC单倍体型上的定位与相互连锁信息,为免疫等相关疾病的研究提供理论依据。     

Bcap—37人乳癌细胞系HLA抗原表达特性

应用直接细胞毒试验,分别对Bcap-37人乳癌细胞系(第10,111代)、原供者及其丈夫和女儿进行了HLA-A,B,C分型。初步确定Bcap-37与原供者的HLA分型相同,均为HLA-A_2,A_(w30+31),B_(13),B_(w60);Bcap-37第10代和第111代HLA分型相同,无抗原表现型改变;原供者及其丈夫、女儿的HLA分型反映了其亲子关系。     

寡核苷酸DNA Microarray用于HLA DRB1基因分型的研究

对寡核苷酸DNA Microarray用于HLA DRB1基因分型的技术进行研究。常规的酚/氯仿法提取标准血样基因组DNA,在DRB1的exon2区域设计一对引物,经PCR扩增基因组相应区段并用Cy5-dCTP进行标记。设计寡核苷酸分型探针,将探针固定在APS-PDC法制作的DNA Microarray上,用标记的PCR产物与之杂交,扫描仪对杂交效果进行扫描,Imagene软件对杂交图像进行分析。共检测了33例标准血样的HLA DRB1基因型。检测结果证明研制的DNA Microarray准确、灵敏。DNA Microarray技术可以有效地检测DRB1等位基因,对比常规的PCR-SSP和PCR-SSO方法、分型基因芯片方法更为直观,并有集成化优势。     

人类白细胞抗原与鼻咽癌的相关性

鼻咽癌是一种多因素影响的复杂性疾病, 其发病具有显著的地理分布差异。Epstein-Barr(EB)病毒感染与鼻咽癌发病密切相关已得到公认, 但环境因素及遗传因素在鼻咽癌的发病中也具有重要作用。在鼻咽癌的遗传相关因素中, 位于6号染色体上具有高度多态性的人类白细胞抗原(Human leukocyte antigen, HLA)与鼻咽癌发病风险相关在多个研究组中被报道。随着DNA测序技术的发展, 高分辨基因分型技术的应用, HLA新等位基因数目呈指数级的上升, 更多的HLA全基因序列被研究者所报道。近年来, 等位基因关联性分析、微卫星连锁不平衡分析及全基因组关联性分析的研究结果均证实了6号染色体HLA区域与鼻咽癌具有显著关联。为了进一步探讨遗传相关性因子HLA在鼻咽癌发生发展中的作用, 文章着重综述了HLA与鼻咽癌相关性研究的最新进展, 为鼻咽癌HLA相关性研究提供新的思路。     

R和S系列白细胞抗原的HLA相应命名

HLA系统是人群一种具有高度多态性的遗传结构,在不同人种间有明显差异。某一人种中常见的HLA抗原,在其它人种中可能少见或甚至完全缺失。在试验与血清供者同一人种时被认为是使用单价的(operationally monospecific)HLA分型血清,在其它人种中可能出现额外反应。因此鉴定HLA抗原最好是采自同一人种的抗血清。上海市白细胞分型协作组曾用上海地区经产妇细胞毒血清检出11个白细胞抗原。这些抗原分属于两个分离子系列(segregant series),由于当时缺乏参考血清,被临时命名为R系列和S系列。R系列包括7个抗原:R1、R2.2、R3、R4、R7、R8和R11.2。S系列包括4个抗原:S5、S6、S10和S12。本文报道将R和S系列抗原的分型血清与法、英、日等国实验室提供的HLA分型血清作平行试验,通过血清聚类分析(clustering analysis)和群体抗原相关分析(correlation analysis)确定R和S系列5个抗原的HLA相应命名。     

HLA系统D区基因分型和中国汉族人特有的RFLP

HLA II类抗原在外来抗原提呈中起重要作用,在DNA水平进行II类抗原基因分型有更强的多态性鉴别能力,有利于检出新的特异性,根据白种人纯合分型细胞（HTC）和中国人部分纯合细胞DRB和DQA基因的RFLP格局,我们对上海地区90名随机健康人进行了HLA－D区基因分型,并将结果与血清学分型相比较,证明了它的可靠性和优越性。此外,通过与白种人格局相比,我们还发现了中国人特有的HLA－D区RFLP格局。     

HLA-DRB1 等位基因的多态性及其应用

HLA系统参与和调节机体免疫功能,是人类重要的遗传标志,具有种族、地域差异.HLA-Ⅱ类系统中DRB1等位基因的多态性最丰富,它的准确分型直接影响器官移植的供体选择、法医学个体认定、HLA与疾病相关性及人类学等研究.本文综述了HLA-DRB1分型检测方法,不同种族人群HLA-DRB1等位基因的多态性,HLA-DRB1多态性研究在探讨人类起源、民族融合方面的价值,HLA-DRB1与肝炎、系统性红斑狼疮等疾病的相关性等.     

HLA 抗原的DNA 分型

HLA系统定位于6p2l.3, 是人体内最复杂的遗 传多态性系统,在免疫调控过程中发挥重要作用。 HLA I类基因区域包括HLA-A, B, C, E, F, G基因 和11个假基因“‘’。HLA一A, B和C基因座编码A, B 和C抗原a链(44kd),它通过第三个功能区与受痊于 第15号染色体的月,微球蛋白链(12kd）作非共价结 合构成杭原分子,其多态性取决于。链的第一、二功能 区。HLA-E, F和G基因编码I类样产物,其功能未 明。I类抗原分布于任何有核全』饱表面,主要参与提 供外来伉原给T细胞毒细胞「’“’。HLA II类基因座在 HLA-D区,主要包括HLA-DR, DQ和DP三个}2 区。DR亚区有6个基因座：DRA, DRB1, DPB2, DRB3, DRB4和DRB5, 其中DRB2为假基因;DQ 亚区有4个居因座：DQA1, DQB1, DQA2和DQB2, 其中DQA2和DQB2未知有产物表达;DP亚区也 有4个基因座：DPA1, DPB1, DPA2和DPB2,其 中DPA2和DPB2为假基因。此外,还有DO和DN 两个新亚区,各具有DOB和DNA（注意勿与脱氧核塘 核酸的缩写DNA相混淆）,分别产生DO(链和DNa 链「‘’。11类抗原HLA-DR, DQ和DP存在于B淋巴 细胞、巨噬细胞和激活的T淋巴细胞表面, 由。链 (32-35kd）和R链(28-30kd）非共价组成。。链无 多态性或多态性程度不高,R链的第一功能区呈现高 度多态性。11类抗原参与提皇外来伉原给T辅助细 胞,后者在识别外来伉原的同时识别HLA 11类坑 原「,,’。据1987年第十届国际组织相容性试验专题会 议报道,HLA系统检出148种抗原特异性,其中A基 因座24种,B基因座52种,C基因座11种,D区26 种,DR亚区20种,DQ亚区9种和DP亚区6种。 HLA-A, B, C, DR和DQ抗原系由特异性同种异 体抗血清检出,HLA-D和DP抗原则由纯合分型细胞 (HTC)和预致敏淋巴细胞分型(PLT）方法检出,两者 是以混合淋巴细胞培养(MLC）方法为基础的。近年 发展用蛋白质化学方法研究HLA系统抗原多态性L77o 自1975年Southern印迹法〔247间世后,运用HLA系 统基因探针通过分析限制性片段长度多态性(Restriction Fragment Length Polymorphism, RFLP）在DNA. 水平上进行分型。八十年代中期开始,聚合酶链反应 (Polymerase Chain Reaction, PCR）技术的创立为分 子生物学发展开辞了一个新起点。许多研完Hl.h系 统的实验室竞相运用PCR技术,结合等位基因特异的 寡核昔酸（Allele-specific Oligonucleotide, ASO)或 顺序特异的寡核普胶(Sequence-specific Oligonucleotide, SSO)探针对HLA系统进行寡核昔酸分型,2_3 也有直接利用PCR扩增产物作RFLP分沂进行DNA 分型「'6,,"' + O DNA分型方法适用于任何有核细袍, 显示的结果与血清学或细胞学分型结果高度对应,而 且能够发现血清学或细抱学方法不能检测的额外特异 性,在理论上有助于进一步研究HLA系统基因的结构 和功能。对一些无法作常规分型的病例如裸露淋巴细 胞综合征、严重联合免疫缺乏症等,DNA分型叮解决 骨髓移植供受体配型问题‘哪’。     

应用PCR-SSOP技术研究中国汉族、维吾尔族HLA-A基因座基因多态性

人类白细胞抗原（Human Leukocyte Antigen,HLA)基因复合物位于6p21.3,有220多个不同的功能基因,是人类基因组最复杂的遗传多态系统。HLA等位基因的变异在医学、法医学、人类学等领域具有重要的意义。自从1964年以来,HLA分型一直采用经典的微量淋巴细胞毒实验,但该方法是血清学水平的分,不能识别很多特异性的等位基因,而且高质量的抗体也不易获得。从20世纪90年代起,在国家自然科学基金的资助下,首先开展HLAⅡ类位点基因分研究及大规模群体多态性调查,所获得的中国主要民族基因数据已应用于多个领域。相比之下,HLAⅠ类基因数量更丰富,包含了A、B、C、E、F、G和假基因H、J、K、L等10个位点;基因分子结构更复杂,更具多态性。因此,HLAⅠ类DNA分型比HLAⅡ类分型及行多困难。直至目前中国人群HLA－A基因座基因多态性和分布频率的研究尚未充分进行。而任何DNA标记用于遗传分析、法医鉴定等领域之前,必须先进行群体调查,建立不同民族基因数据库,这是不可逾越的基础工作。鉴于此,采用灵敏而非同位素污染的PCR－SSOP基因分型技术,对165个汉族和162个维吾尔族个体的HLA－A基因座多态性进行调查。结果在汉族群体中发现22种等位基因,频率最高的是HLA－A＊1101（19．7％）,其次是＊201（12．72％）;在维族群体中发现22种等位基因,频率最高的是＊2407（17．90％）,等位基因＊0101、＊0201和＊3301的频率均大于10％;HLA－A＊0203、＊0205、＊0302、＊2403和＊3302仅在汉族群体中检出;HLA－A＊0205、＊0211、＊2301、＊2502、＊68012和＊6802仅在维族群体中检出。按照Hardy-Weinberg平衡定律检验,两个民族各等位基因型频率的预期值与实际观察值相吻合（P＞0．05）,证明了所获得汉族、维吾尔族HLA－A位点基因频率具有可靠性;同时也表明各等位基因的遗传特征符合符合孟德尔规律。经计算机统计分析,汉族群体HLA－A基因座杂合度（Heterozygosity,H)、个体识别率（Discrimination Power,DP)和非父排排率（Proba-bility of Paternity Exclusion,EPP)分别为0．9029、0．9776和0．8592;维族群体H、DP和EEP分别为0．9063、0．9379和0．7885。和其他遗传标记（如VNTR、STR、SNP）的单一位点相比,HLA－A具有高度的杂合率、个体识别率和非父排除率。因此,HLA－A等位基因在法医个体识别、亲权鉴定、基因诊断、人类学等领域具有重要的应用价值。     

中国人白细胞抗原系统的研究——Ⅲ.11个白细胞抗原的遗传分析

人体白细胞抗原系统(HLA)是人体的遗传性状,受第6对常染色体短臂上决定人体组织相容性抗原的HLA区域控制。截止1977年第7届国际组织相容性试验专题讨论会,由血清学方法检出的SD抗原达53个,分属于A、B、C三个位点。本文报道应用本协作组从上海地区经产妇中筛选得到的11种特异性白细胞抗原分型试剂,对上海地区汉族人白细胞抗原系统进行遗传分析的结果。     

首届全国免疫遗传学术讨论会在沪召开

第一届全国免疫遗传学术讨论会于1992年4月27—30日在上海科学会堂举行。会议由中国遗传学会副秘书长、上海第二医科大学、上海市免疫学研究所陈仁彪教授主持。这次会议既是一次检阅我国免疫遗传学研究成果的经验交流会,也是对今后工作进行协调合作的研讨会。来自全国各地的80多名代表到会,共交流学术论文50余篇,内容涉及红细胞抗原和HLA—Ⅰ、Ⅱ类抗原血清学研究、补体分型以及HLA—Ⅱ类基因DNA分型等方面。日本国佐治博夫博士和德永胜士博士应邀参加会议,并作了“日本血小板免疫血清学研究进展”和“从     

超抗原葡萄球菌肠毒素A、B和C1的T细胞抗原HLA表位预测

为预测超抗原葡萄球菌肠毒素（SE）家族中的SEA、SEB和SEC1的HLAⅠ和HLAⅡ抗原结合表位,并对其活化T细胞作用的机理进行探讨,根据已发表的SEA、SEB和SEC1基因全序列,用T细胞抗原表位预测软件Guotif2.0对其进行T细胞抗原表位预测,统计与HLAⅠ和HLAⅡ各抗原位点结合的SEA、SEB和SEC1肽段的出现次数。结果显示,SEA、SEBT SEC1具有共同的特点,即都是主要与HLAⅠ类分子的A3位点和HLAⅡ类分子的DR1位点具有较强的结合。说明SEA、SEB和SEC1与HLAⅠ类分子和HLAⅡ类分子都有很强的结合性。三者在HLAⅠ和HLAⅡ结合位点上具有较强的同源性。本研究为SE活化T细胞作用机制的功能实验提供了依据。     

人肠道病毒分型方法和鉴定技术的研究进展

近年来,随着分子生物学和生物信息学的进步,人肠道病毒基因序列分析应用广泛,基因测序自动化发展迅速,促进了人肠道病毒分型方法和鉴定技术的发展。鉴于新型肠道病毒不断被报道,人肠道病毒的范围目前明显扩大,本文就人肠道病毒分型方法和鉴定技术研究进展作一综述。     

结核分枝杆菌基因分型技术的应用

结核分枝杆茵在分子生物学检测技术方面的发展使人们对结核流行和传播的理解有了革命性的变化。目前该茵基因分型主要的技术方法有IS6110分型法、分枝杆茵重复单位分型法、Spologotyping分型法。基因分型法的应用在临床、结核病传播预测、结核病控制,以及对相应基因型的结核发病机制的认识等方面都有很重要的意义,尤其在结核病的预防和控制中显示出更美好的应用前景。     

携带HLA-B2704基因转基因小鼠技术的建立

应用显微注射法制备携带HLA B2 70 4基因的转基因小鼠 .对 2 86只昆明小鼠激素注射进行超排卵 ,采集受精卵 ,将含HLA B2 70 4基因的基因组DNA片段 (简称HLA B2 70 4DNA)显微注射到受精卵原核内 ,把注射存活的两细胞期受精卵移入假孕鼠的输卵管内使其发育产生后代 .用PCR方法进行F0代仔鼠及F1代仔鼠的转基因整合的检测 .利用RT PCR检测阳性鼠中的HLA B2 70 4转基因的表达 .采集了 84 11个卵 ,可注射卵 6 6 0 9个 ,其中注射存活的两细胞期受精卵 4 2 77个 ,卵的注射存活率为 6 4 7%.将卵移入 15 3只假孕鼠 ,其中 2 6只怀孕产仔 ,存活 10 1只 .在 10只F0代仔鼠基因组中有HLA B2 70 4基因整合 ,整合率为 9 9%.转基因阳性鼠F0代之间以及与正常鼠之间进行交配 ,产生的F1代仔鼠 78只 ,其中 15只为阳性 .阳性鼠的皮肤、结肠、睾丸和脾脏组织中均有HLA B2 70 4转基因mRNA的表达 .在HLA B2 70 4转基因阳性小鼠中 ,6只小鼠皮肤出现脱毛 ,1只小鼠的足部及足趾明显红肿 ,2只在脱毛同时明显畏光 ,1只出现腹泻 .结果表明 ,成功地建立了HLA B2 70 4的转基因小鼠技术 ,该小鼠类似强直性脊柱炎的小鼠模型 .     

高通量基因型分型技术及其在水稻中的应用

作物种质资源遗传基础的深入认识与高效利用,对于品种改良和粮食安全具有重要意义。传统系谱考察的方法对指导育种实践发挥了重要作用,随着分子生物学的发展,基因组学和高通量SNP分子标记等基因型分型方法可以更便捷地对种质资源进行鉴定。就基因型分型的主要方法进行了总结,重点论述了以SNP为核心的下一代高通量测序(NGS)分型方法、竞争性等位基因特异性PCR(KASP)和SNP芯片系统,以及当前主流的SNP分析工具和数据库。同时,介绍了高通量SNP分型技术在水稻研究中的进展,并就分型技术在作物育种等领域的应用和发展趋势进行了展望。     

父子关系概率及父子关系指数的计算原理

白细胞分型的一个重要应用方面是用于亲 子鉴定。在有父一子关系争议的案件中,可利用 HLA分型数据估计有关男性是孩子生父的概 率,从而有助于案情的判断。本文将讨论这一 问题的数据处理原理。所需原始数据是父、母、 孩子及涉嫌男子的HLA-A, B表现型以及当 她人群的单倍型频率。     

甘肃裕固族HLA—DRB1基因多态性及其族源分析

目的：研究甘肃裕固族HLA—DRB1基因的多态性,探讨裕固族的起源、迁徙及其与其他民族的关系。方法：应用PCR-SSP基因分型技术,对54例裕固族个体进行了HLA-DRB1位点的基因分型并进行相应等位基因频率的比较。结果：甘肃裕固族HLA-DRB1位点共检出了14种等位基因,其中高频基因为DR5（0、2115）,DR4（0、1346）和DR7（0．1250）,低频的等住基因为DR14（0．0096）和DR13（0．0192）;裕固族人HLA-DRB1座位等位基因总的分布格局与蒙古族最接近,与云南黎族则相差较远。结论：对裕固族和我国各地人群的HLA-DRB1频率进行了聚类分析,极为相似的HLA-DRB1背景提示裕固族和蒙古族之间密切的遗传关系。