MELAS和MERRF综合征相关mtDNA突变位点检测集成芯片的建立

摘要: 文中建立了一种新型的寡核苷酸芯片, 用于线粒体脑肌病伴高乳酸血症和卒中样发作(Mitochondrial encephalomyopathy with lactic acidosis and stroke-like episodes, MELAS)和肌阵挛性癫痫伴发不规整红纤维(Myoclonic epilepsy with ragged red fibers, MERRF)线粒体DNA所有已知突变位点的集成检测。将31对allele位点特异性的寡核苷酸探针包被在醛基修饰的载玻片表面, 以多重不对称PCR方法制备Cy5荧光标记靶基因。利用此芯片对5例MELAS患者、5例MERRF患者及20例健康对照进行筛查, 结果发现, MELAS患者均为MT-T1基因A3243G突变; 在MERRF患者组, MT-TK基因A8344G突变4例, T8356C突变1例; 健康对照组均未发现31种相关mtDNA突变。芯片检测与DNA测序结果完全一致。结果表明, 这种寡核苷酸芯片可以对MELAS和MERRF综合征已知突变位点进行同步快速检测, 具有较高的灵敏度和特异性。这一模式的基因芯片经过适当改装后也可用于其他人类线粒体疾病的基因诊断。     

黄烷酮、NODD和nod-启动子分子间专一性作用的证明

采用亲和层折的方法纯化了NODD蛋白——根瘤菌中结瘤基因D(nodD)的产物。用这纯化的NODD研究黄烷酮(Naringenin,以下简称NAR)、NODD和nod－启动子间的相互作用。当NAR浓度低于0．4mmol／L时,实验没显示NARR对NODD和nod启动子之间专一性结合的影响,然而当浓度达到4．0mmol／L时,NAR能明显解离NODD和nod－启动子间的结合,这表明NAR、NODD和nod－启动子之间的相互作用是存在的。     

一种葡聚糖芯片的再生方法、表征及其应用*

表面等离子体共振（surface plasmon resonance, SPR）生物传感器,作为一种适时快捷,无需标记的生物分子相互作用研究工具,已广泛应用于生物化学分析与研究。羧甲基化葡聚糖修饰的CM5传感芯片是Biacore 系列仪器应用最为普遍的核心部件,目前CM5芯片主要从法玛西亚公司购买,价格昂贵,且一旦共价交联的受体分子失活,就不能重复利用。阐述了一种简便、低成本、用于SPR生物传感器的葡聚糖修饰金膜芯片的再生方法及其表征和应用。用此方法再生的芯片能被循环伏安法和原子力显微镜很好地表征,并成功地用于抗前列腺特异性抗原(prostate-specific antigen,PSA)固定和PSA检测, 同时测定了PSA与其抗体之间的动力学和亲和常数。     

武夷山不同海拔高度土壤氮矿化对温度变化的响应

采集了武夷山4个不同海拔的植物群落（常绿阔叶林、针叶林、亚高山矮林和高山草甸）的土壤样品,在实验室条件下, 将含水量调节为田间持水量60%,置于5 ℃、15 ℃、25 ℃和35 ℃人工气候箱中培养30 d,以测定土壤净氮矿化对温度的敏感性。结果表明：相同海拔植物群落的土壤净氮矿化量和氮矿化速率均随温度的升高显著增加;不同海拔间土壤氮矿化量和氮矿化速率大小均表现为：亚高山矮林>常绿阔叶林>高山草甸>针叶林。土壤氮矿化的Q₁₀在1.03～1.54,并且15 ℃升高到25 ℃时的Q₁₀比5 ℃升高到15 ℃和25 ℃升高到35 ℃时的Q₁₀高,表明土壤氮矿化对温度的敏感性在15 ℃～25 ℃较高。     

寡核苷酸DNA Microarray用于HLA DRB1基因分型的研究

对寡核苷酸DNA Microarray用于HLA DRB1基因分型的技术进行研究。常规的酚/氯仿法提取标准血样基因组DNA,在DRB1的exon2区域设计一对引物,经PCR扩增基因组相应区段并用Cy5-dCTP进行标记。设计寡核苷酸分型探针,将探针固定在APS-PDC法制作的DNA Microarray上,用标记的PCR产物与之杂交,扫描仪对杂交效果进行扫描,Imagene软件对杂交图像进行分析。共检测了33例标准血样的HLA DRB1基因型。检测结果证明研制的DNA Microarray准确、灵敏。DNA Microarray技术可以有效地检测DRB1等位基因,对比常规的PCR-SSP和PCR-SSO方法、分型基因芯片方法更为直观,并有集成化优势。     

线粒体DNA突变与相关人类疾病

在过去的20年里, 人们发现线粒体DNA(mitochondrial DNA, mtDNA)突变与多种人类疾病相关, 其致病范围从单器官组织损害到多系统受累。文章目的在于探讨mtDNA突变与人类疾病的关系。文章重点论述: (1)线粒体遗传学特征; (2) mtDNA突变与人类遗传性疾病; (3)体细胞mtDNA突变在衰老和肿瘤中的作用; (4)mtDNA疾病的诊断和治疗。