叶下珠有效部位的溶栓作用及其对PAI-1和tPA活性的影响

采用改良的Charlton和Tomihisa等方法评价叶下珠植物(Phyllanthus urinaria)含corilagin的水溶性有效部位(代号PUW)对电刺激大鼠颈动脉血栓的溶栓作用;应用发色底物方法测定PUW在体内外对血浆tPA、血浆或血小板释放的PAl-1活性的影响。结果显示,5mg／kg的PUW,其再通率为50％,再栓率为60％;10mg／kg PUW的血管再通率为60％,其再栓率为33．3％,低于2万U／kg尿激酶42．9%的再栓率。再通后1h内,血管开放状态表现为,2万U／kg尿激酶组的血管开放状态与5mg／kg PUW组的相似;10mg／kg PUW组,其持续再通率高于2万U／kg的尿激酶组。PUW在体外或静脉注射均明显降低血浆PAI—1活性,同时提高血浆tPA的活性;PUW静注还明显抑制血小板释放的PA1-1活性。本实验结果提示,PUW静脉注射显著提高闭塞颈动脉的再通率,同时降低再通后颈动脉的再栓率;抑制PAI—1活性,同时提高tPA的活性可能是PUW具有较好溶栓作用的分子机制。     

t—PA cDNA基因转移与基因治疗

组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）能够特异、高效地溶解血栓,在纤溶系统中起着重要作用,ｔ－ＰＡ与其抑制物（ＰＡＩ）平衡失调,可导致多种疾病的发生。基因转移技术使外源ｔ－ＰＡ ｃＤＮＡ成功地在血管内皮细胞中得以表达,为防治以血栓形成为主要病理变化的血管性疾病开辟了广阔的前景。     

链激酶研究概况及其进展

链激酶(Streptok inase,SK)是世界上最早发现的纤维蛋白酶原激活剂,也是最早作为临床药品治疗血栓性疾病的溶栓酶。它是由A,C,G群链球菌中β-溶血性链球菌分泌的胞外非酶蛋白质,能和纤溶酶原结合,将纤溶酶原激活为纤溶酶,具有溶解血栓的作用。本文详细综述了该酶的性质、在溶栓酶中的地位、研究历史、作用机理等。此外,由于它有半衰期短、不具有纤维蛋白特异性、治疗后出血和血栓易复发的缺点,所以有必要用基因工程的手段进行改造,以达到更好的治疗效果。     

缺血性脑卒中溶栓药物研究进展

缺血性脑卒中是一种高发病率、高死亡率的重大健康危机。溶栓药物能快速溶解血栓、减少出血副作用、实现血管再通,对缺血性脑卒中治疗起到关键性的作用。重组组织纤溶酶原激活剂(rtPA)是FDA批准的唯一缺血性脑卒中药物,但在临床使用中有诸多限制。近年来,基于tPA的溶栓药物及治疗策略发展迅速,文中结合笔者课题组及目前国内外的相关研究成果,回顾了该领域的最新进展,为新型溶栓药物发展提供科学依据和思路。     

Genentech公司的血纤维蛋白溶酶原激活剂

组织血纤维蛋白溶酶原激活剂（Tissue Plasminogcn Aetivator,TPA）是一类纤维蛋白溶解酶,作为药物主要治疗血栓、血管梗塞一类的病。 各种血栓症是造成死亡的一大原因,据西方报导,要占到西半球死亡人数的半数以上。因之,寻找分解血栓块的药物制剂,一直是医药工业的一大课题。     

睾酮对人血管内皮细胞产生NO、tPA和PAI-1的影响

目的:观察不同浓度睾酮对人血管内皮细胞生长、产生舒张因子及纤溶活性的影响.方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),分为五个浓度睾酮组及单纯培养基对照组.做MTT实验观察睾酮对HUVEC生长的影响;还原酶法测定各组HUVEC释放NO量;ELISA法测定各组培养基中纤溶酶原激活物(tPA)及其抑制物(PAI-1)含量.结果:3×10-10mol/L-3×10-8mol/L睾酮组与对照组相比细胞生长良好,无明显差别;而大于生理剂量的两组(3×10-6～3×10-1mol/L)3 d后细胞生长明显受到抑制(P＜0.05).各浓度睾酮组产生NO量与对照组无明显区别.而3×10-10 mol/L～3×10-8 mol/L睾酮组tPA含量明显高于对照组(P＜0.01);大剂量组tPA产生明显减少(P＜0.01).所有实验组的PAI-1含量均明显降低.结论:生理及略低于生理剂量的睾酮对HUVEC生长及释放NO无不利影响,且增加纤溶活性.说明生理剂量睾酮对血管内皮功能、心血管系统有一定的保护作用,有利于防止动脉粥样硬化的发生、发展.     

t-PA蛋白质分子的改造

组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)与纤维蛋白有高亲和力,具有特异地溶解血栓的功能。t-PA含有多个结构域,其分子结构和功能关系的阐明,促进了改造t-PA分子以发展更特异的血栓溶解剂的研究。     

一种新的血管生成抑制因子--hPK-5

hPK-5是人纤溶酶原的结构域片段,它针对增生的内皮细胞而呈现很高的作用特异性,表现出抗内皮细胞增殖活性,调节血管增生的平衡以及炎症反应。鉴于它是内源性的抗血管生成因子,且具有分子量小、易于表达和高效的生物学活性等优势,充分展示了其重要的研究价值和临床应用前景。     

纤溶酶原Kringle 5的抑制血管增生作用

纤溶酶原Kringle 5是纤溶酶原中与血管抑素相连的另一个联环结构域,它能抑制内皮细胞的增殖、迁移,并能诱导内皮细胞凋亡和细胞周期停滞,具有很强的抑制血管生成活性,是抑制活性最强的纤溶酶原水解片段。同时它具有分子量小、性质稳定、毒副作用小、特异性高等优点,是一个有潜在临床应用价值和开发前景的治疗血管增生性疾病的药物。     

同型半胱氨酸对人脐静脉血管内皮细胞tPA 及PAI-1基因表达的影响

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对纤溶系统的影响,观察Hcy在转录水平对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)表达组织型纤溶酶原激活物(tPA)和纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI1)的影响。方法将体外培养的HUVEC分为生理浓度(10μmol/LHcy)组,病理浓度(50、200、500μmol/L)Hcy组及单纯培养基组(0μmol/LHcy),培养24h后,提取RNA,反转录聚合酶链反应分析(RTPCR)法分析各组tPA及PAI1基因表达水平。结果500μmol/LHcy组与10μmol/LHcy组相比,tPAmRNA基因表达明显下调(P<0.05),PAI1mRNA表达则明显上调(P<0.05)。而与单纯培养基组相比,10μmol/LHcy组tPAmRNA表达明显增高(P<0.05)。结论生理浓度Hcy可以增加纤溶系统活性,减少血栓性疾病的发生。高Hcy(病理浓度)则抑制纤溶系统活性,促进缺血性心脑血管疾病的发生。     

抗尿激酶单克隆抗体识别相应抗原决定簇的研究

 尿激酶是一种纤溶酶原激活剂,临床上用于治疗血栓。为了有效地用单克隆抗体亲和柱纯化尿激酶,我们对一组抗尿激酶单克隆抗体识别相应抗原决定簇的特性进行了研究。Western Blotting试验表明:S_(13)、S_(26)、N_(14)、N_(30)、N_(17-2)、N_(34)、N_(36)七个单克隆抗体主要抗54000道尔顿的高分子量尿激酶(HUK)。除N_(30)外,其余抗体还同时不同程度地抗33000道尔顿的低分子量尿激酶(LUK)。N_(30)除识别HUK外,还识别分子量为18000道尔顿的多肽链。竞争性结合试验证明:七个单克隆抗体分别抗五个不同的抗原决定簇,但它们都不抗尿激酶的活力中心。     

纤溶系统及其异常与血栓性疾病的关系及溶栓药物研究发展方向

纤维蛋白溶解系统与凝血系统活性的动态平衡是维持血液在血管中正常流动的基础。纤溶系统的异常,尤其是ＰＡＩ－１水平的升高所致的纤溶活性的下降,是血栓性疾病的重要诱因之一。本系统地介绍了纤溶系统的生理作用及其调节,以及它的异常在血栓性疾病发病中的作用。同时介绍了溶栓药物的现状及最新研究方向。     

一种由藤黄微球菌产生的纤溶酶

血栓栓塞性疾病如心肌梗塞、脑栓塞等是危害人类健康、导致死亡率最高的疾病之一.全球每年约1 700万人死于心脑血管病,我国每年约有300万人死于此类疾病.治疗此类疾病的主要手段之一是溶栓疗法,即注射溶栓剂疏通血管,但传统的溶栓药物如t-PA、尿激酶等有半衰期短、使用量大、价格昂贵、易引发出血症等不良副作用,因此开发新型溶栓类药物,提供廉价高效、副作用小、使用方便的溶栓药物,对栓塞性疾病的治疗具有重要意义.     

重组人尿激酶原的临床研究概况

尿激酶原或尿激酶型纤溶酶原激活剂具有特异性溶解血栓作用,引起人们的极大兴趣。西方国家1986年开始进行临床研究,A-74187或Sp2/0表达的糖基化尿激酶原以及大肠杆菌表达的非糖基化尿激酶原治疗急性心肌梗死阻塞相关血管开通率为70%~80%。德国Grünenthal公司用大肠杆菌表达的非糖基化尿激酶原(Saruplase)治疗急性心肌梗死研究采用20 mg推注,60 mg/60 min滴注,分别与重组组织型纤溶酶原激活剂、尿激酶、链激酶进行比较,并做了1698名心肌梗死患者的开放性临床试验,梗塞相关血管的开通率达到70%~80%。Saruplase与链激酶在104个临床研究中心,入组3089名急性心肌梗死患者进行大规模临床试验。结果表明,Saruplase对阻塞相关血管开通率、30天死亡率、出血合并症等副作用与链激酶没有明显差异,而出血性中风发生率高于链激酶,欧盟未批准Saru plase上市。国产重组人尿激酶原也进行了探索研究,用于治疗急性心肌梗死给药剂量为30~60 mg,给药时间为30或60 min,阻塞相关血管开通率为63.4%~80.0%,而尿激酶为52.2%~66.7%(平均58.0%)。此外,国外用重组人尿激酶原治疗深层静脉血栓和缺血性中风进行了探索研究,但病例数较少,尚须进一步研究。     

急性脑梗死静脉溶栓治疗的护理进展

急性脑梗死患者中80％～90％因为脑动脉内血栓形成,在一定时间内溶解血栓可特异性逆转此病理过程[1]。溶栓治疗急性脑梗死的目的就是在缺血脑组织出现坏死之前溶解血栓,再通闭塞的脑血管,及时恢复缺血脑组织的供血,从而挽救缺血脑组织,减少或避免脑功能的缺损。     

小剂量重组组织纤溶酶原激活剂治疗急性心肌梗死临床研究概况

1990年代中期以来,国内130多家医院入组9378例急性心肌梗死患者,其中用小剂量（50mg）重组组织纤溶酶厚激活剂（rt-PA）治疗6693例,阻塞相关血管开通5318俐,开通率为79.46％;死亡293倒,病死率为4.38％;出血550俐,出血率勾8.22％,其中重度出血7例,颅内出血21例（0.31％）,再次梗塞60例（0.90％）。超过40家医院对rt-PA（50mg）与尿激酶治疗急性心肌梗死疗效进行了比较,共计入组3449倒急性心肌梗死患者,rt-PA治疗1689例,先静脉推注8mg,其余42mg在30或60和90min滴注;尿激酶治疗1760例,150万U位滴注30min。结果显示,阻塞相关冠脉血管开通率分别为79.40％（1341例）和5733％（1009例）,相差非常显著（P〈0.001）。12家医院研究了rt-PA50-9100mg治疗急性心肌梗死的效果,共计入组1054例患者,其中50mg组487例,100mg组567例,阻塞相关血管开通率分别为78.85％和82.36％。另有22家医院入组1017倒病人,行rt-PA50mg30rain给药临味试验,冠脉开通率达80.53％;18家医院行rt-PA50mg 60min给药临床试验,入组942例病人,阻塞相关血管开通率为77.92％;50家医院用rt-PA50mg 90min给药方案治疗急性心肌梗死患者,入组2768例患者,冠脉开通率为77.89％。6家医院对用rt-PA（50mg）与链激酶治疗急性心肌梗死的疗效进行了对比,结果表明相关血管开通率分别为81.4％和65.2％22家医院比较了小剂量rt-PA对急性心肌梗死患者症状发作不同时间的治疗效果,表明症状发作时间越短,用药的溶栓效果越好。刘光对入院前和入院后用小剂量rt-PA溶栓进行了比较研究,证明入院前溶栓比入院后效果好。对冠脉内输注rt-PA（50mg）和2次静脉推注小剂量rt-PA治疗急性心肌梗死的效果也进行了探索。     

Kringle5蛋白生物学作用及机制

Kringle5是血浆纤维蛋白溶酶原的第五个饼环区结构域,在体外具有抑制内皮细胞增殖和迁移、在体内具有抑制血管新生和肿瘤生长的生物活性,在实体瘤、糖尿病视网膜病变、风湿性关节炎等疾病的治疗中有广泛的应用前景。     

内皮抑素可抑制血管形成和肿瘤生长

内皮抑素可抑制血管形成和肿瘤生长近年的一系列研究表明,血管形成是实体瘤生长与转移的基础。为了促进血管形成,肿瘤细胞可增加一系列血管形成因子的产生。但许多恶性肿瘤也可产生血管形成抑制因子,如血管抑素（ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ）、血栓海绵素等。血管形成因子...     

平原入进驻高原后凝血和纤溶功能的改变及其意义

目的：探讨高原低氧环境下凝血及纤溶功能的变化。方法：对从平原（海拔1400m）进驻3700m和5380m高原第7d及半年的40名健康青年血浆抗凝血酶Ⅲ（AT－M）、纤溶酶原含量（PLG）、D－二聚体含量（DD）、组织纤溶酶原激活物活性（t-PA）、纤溶酶原激活抑制物活性（PAI）、纤溶蛋白原（Fg）、α2－抗纤溶酶抑制物活性（α2－PI）进行检测,并与20名平原健康青年作对照。结果：高原低氧环境AT－Ⅲ、t-PA明显低于平原（P＜0.05或P＜0.01）,且随海拔高度的升高而降低（P＜0.01）,随居住时间的延长而升高（P＜0.05或P＜0.01）。PLG、DD、PAI、α2－PI及Fg在海拔3700m第7d和海拔5380m第7d及半年均较平原增高显著（（P＜0.05或P＜0.01）,且随海拔高度的升高而增高,居住时间的延长而降低（P＜0.05或P＜0.01）;3700m居住半年时较平原无显著性差异（P＞0.05）。结论：高原低氧存在凝血功能紊乱,表现为凝血与纤溶被激活的同时伴有纤溶受抑,凝血及纤溶的平衡被破坏而使血液呈高凝和低纤溶状态。     

SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳纤维蛋白自显影法检测不同分子…

ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）纤维蛋白显影方法是经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ将不同分子量的纤溶酶原激活剂（ＰＡ）分开,然后再转溶纤维蛋白板使之产生溶带而检测ＰＡ物质活性及分大小的方法,此法与Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹方法此具有检测更简便、灵敏、快速的特点,且是活性检测,但其分子量分析精度不如Ｗｗｅｓｔｅｒｎ印迹法。本研究用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ纤维蛋白自显影方法对本室表达的生组组织型－ＰＡ及突体Ｎ１１７Ｑ