人血红细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶（PTPP）的研究──Ⅲ．胞浆PTPP与红细胞膜的结合及其结合后的主要性质

用部分纯化的胞浆ＰＴＰＰ分别与去ＰＴＰＰ活性的红细胞血影（ｄＰＴＰＰ－Ｇｈｏｓｔ）和内向外翻红细胞膜（ｄＰＴＰＰ－ＩＯＶ）结合,结果发现：胞浆ＰＴＰＰ不仅能与红细胞膜结合,而且与ｄＰＴＰＰ－ＩＯＶ的结合能力强于与ｄＰＴＰＰ－Ｇｈｏｓｔ的结合。很多因素,诸如：温度,ｐＨ,离子强度,结合时间及某些试剂等不仅对ＰＴＰＰ与膜的结合有影响,且对ＰＴＰＰ与ｄＰＴＰＰ－１０Ｖ结合的影响比与ｄＰＴＰＰ－Ｇｈｏｓｔ结合的影响更为显著。当胞浆ＰＴＰＰ与红细胞膜结合后,其性质发生变化,这主要表现在稳定性增强;Ｋｍ减小;Ｚｎ￣（２＋）、ＶＯ等的抑制作用及ＥＤＴＡ、甘油等的激活作用都明显减弱,甚至向相反的作用转化。此外,红细胞膜的磷酸化／脱磷酸化对ＰＴＰＰ的结合有影响,这暗示磷醚化作用对此可能具有调节意义。     

人血红细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶（PTPP）的研究Ⅰ·PTPP在红细胞胞浆和膜中的分布及其影响因素

通过测定红细胞胞浆及膜中的ＰＴＰＰ活性,发现人正常血红细胞中胞浆ＰＴＰＰ活性约占红细胞ＰＴＰＰ总活性的７０－８０％,膜中只有约２０－３０％的ＰＴＰＰ活性。很多因素诸如：病变、ＰＨ值、温度、离子强度、细胞贮存时间以及药物等,对ＰＴＰＰ在胞浆与膜中的分布有影响。可以推测：膜上的ＰＴＰＰ能通过某种机制解离下来,进入胞浆;相反的过程,胞浆中的ＰＴＰＰ也能通过某种机制与膜结合。这种偶联与去偶联的具体机制及其生理功能还有待进一步探索。     

人血红细胞蛋白质酷氨酸磷酸酶（PTPP）的研究：I.PTPP在红细胞胞…

通过测定红细胞胞浆及膜中的ＰＴＰＰ活性,发现人正常血红细胞中胞浆ＰＴＰＰ活性约占红细胞ＰＴＰＰ总活性的７０－８０％,膜中只有约２０－３０％的ＰＴＰＰ活性。很多因素诸如：病变、ＰＨ值、温度、离子强度、细胞贮存时间以及药物等,对ＰＴＰＰ在胞浆与膜中的分布的影响。可以推测：膜上的ＰＴＰＰ能通过某种机制解离下来,进入胞浆;相反的过程,胞浆中的ＰＴＰＰ也能通过某种机制与膜结合。这种偶联与去偶联的具体机制及其     

人血红细胞酪氨酸蛋白磷酸酶（PTPP）的研究Ⅱ·胞浆PTPP的分离纯化及其主要性质

人血红细胞胞浆部分经（ＮＨ_４）_２ＳＯ_４沉淀,ＤＥＡＥ－纤维素（ＤＥ５２）柱层析,磷酸纤维素柱层析（Ｐ１１）得到部分纯化的ＰＴＰＰ,产率：５．７％,提纯１０７５倍。以（３２）￣Ｐ－Ｔｙｒ－Ｐｏｌｙ（Ｇ_４：Ｔ）作底物,测得其表征Ｋｍ约为０．５－０．８μｍｏｌ／Ｌ,该酶的最适ｐＨ和最适温度分别为７．０－７．８及３７－４０℃。Ｚｎ￣（２＋）等二价金属离子及Ｎａ_３ＶＯ_４等酸根基团对其活性有明显的抑制作用;ＥＤＴＡ、甘油及ＤＴＴ、巯基乙醇等则对其有强烈激活作用;而氟化物、酒石酸等对ＰＴＰＰ活性基本无影响。此外,某些蛋白质、氨基酸、核苷酸及抗肿瘤药物等对ＰＴＰＰ活性也都有不同程度的影响。特别是一些ＰＫｓ及ＰＰｓ在体外对ＰＴＰＰ活性也具有不同的作用。     

人组织型纤溶酶原激活剂（t—PA）突变体FrGGI的构建,表达及特性…

为了获得半衰期延长,特异活性提高及具有ＰＡＩ－１抗性的新型ｔ－ＰＡ溶性剂,利用基因重组及定位突变技术构建了ｔ－ＰＡ的Ｋ１、Ｋ２区糖基化位点消除,ＰＡＩ－１结合位点缺失,Ｆ与Ｅ区连接序列Ｈｉｓ４４￣Ｓｅｒ５０置换为纤粘蛋白Ｉ型Ｆ区间连接序列Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｇｌｕ的ｔ－ＰＡ组合突变体ＦｒＧＧＩ,并在中国仓鼠卵巢细胞中获得了高效表达,对表达产物的生物学特性分析表明     

人组织型纤溶酶原激活剂（t－PA）突变体FrGGI的构建、表达及特性分析

为了获得半衰期延长,特异活性提高及具有ＰＡＬ－１抗性的新型ｔ－ＰＡ溶栓剂,利用基因重组及定位突变技术构建了ｔ－ＰＡ的Ｋ１、Ｋ２区糖基化位点消除,ＰＡＩ－１结合位点缺失,Ｆ与Ｅ区连接序列Ｈｉｓ４４～Ｓｅｒ５０置换为纤粘蛋白Ⅰ型Ｆ区间连接序列ＧｌｕＳｅｒＬｙｓＰｒｏＧｌｕＡｌａＧｌｕＧｌｕ的ｔ－ＰＡ组合突变体ＦｒＧＧＩ,并在中国仓鼠卵巢细胞中获得了高效表达。对表达产物的生物学特性分析表明,ＦｒＧＧＩ在大鼠血浆中的半衰期延长了１５倍,并获得了ＰＡＩ－１抗性,是一株很有希望的新型溶栓剂候选株。     

大鼠中缝隐核增强dPAG诱导的vPAG的c－Fos表达及对vPAG神经元放电的影响

本实验通过Ｐｏｓ免疫细胞化学、电生理及微量注射法对中缝隐核（ＮＲＯ）的交感抑制作用的相关途径进行探讨。实验在成巴比妥钠或α－氯醛糖和氨基甲酸乙脂麻醉的Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）大鼠上进行。同时予以ＮＲＯ,中脑导水管周围灰质背侧部（ｄＰＡＧ）方波脉冲串刺激,诱导中脑和延髓的ｃ－Ｆｏｓ表达。刺激ＮＲＯ过程中,基础血压升高（Ｐ＜０．０５）,刺激ｄＰＡＧ引起的防御性升压反应则减少（Ｐ＜０．０１）;中脑导水管周围灰质腹侧部（ｖＰＡＧ）、巨细胞旁外侧核（ＰＧＬ）的Ｆｏｓ样免疫阳性反应（ＦＬＩ）细胞计数分别为６６．５±８．３和１０．８±１．５（刺激ＮＲＯ＋ｄＰＡＧ组）,较单独刺激ｄＰＡＧ组明显增加,Ｐ值分别小于０．０１和０．００１;单或双脉冲刺激中缝隐核在ｖＰＡＧ可以记录到相关单位,其中８４％为兴奋单位,抑制单位占１６％。双侧ｖＰＡＧ内微量注射利多卡因（每侧２μｇ／０．１μｌ）,基础血压无明显变化,而刺激ＮＲＯ引起的降压反应幅度减小（Ｐ＜０．０１）,提示,延髓腹外侧区（ＶＬＭ）、ＮＲＯ存在不同功能分化的神经元;ＮＲＯ可能有向ｖＰＡＧ的兴奋性投射,此投射可加强ＮＲＯ的交感抑制效应。     

缺血-再灌注时大鼠心脏Gi蛋白α亚基的变化

本工作研究了心肌缺血－再灌注时,受体－腺苷酸环化酶细胞膜信号转导系统中Ｇ蛋白含量及功能的变化。采用免疫印迹法和放射免疫法分别测定大鼠心脏Ｇｉα２,Ｇｉα３和Ｇｓα的含量及腺苷酸环化酶的活性。结果显示缺血－再灌注时心功能明显损伤;心脏Ｇｓα无明显变化;心肌细胞膜Ｃｉα２和Ｇｉα３含量分别升高３７．４％（Ｐ〈０．０１）和４２．４％（Ｐ〈０．０１）;胞浆内Ｇｉα２和Ｇｉα３含量无明显变化;缺血心肌腺苷酸     

HL—60细胞诱导分化过程中TPK和PTPP活力的时空改变

对ＲＡ、ＨＨＴ和ＷＰ８５２诱导ＨＬ－６０细胞分化过程中胞浆和膜溶脱部分中的ＴＰＫ和ＰＴＰＰ活力变化进行了研究,结果表明,在诱导早期,ＴＰＫ的活力就有明显的波动变化;随着诱导时间的延长,胞浆部分ＴＰＫ活力下降,膜溶脱部分的ＴＰＫ活力则升高,诱导后,胞浆部分和膜溶脱部分的ＰＴＰＰ活力均明显升高,与ＴＰＫ活力变化相比较,ＰＴＰＰ变化幅度比ＴＰＫ的大。     

低氧、血管紧张素Ⅱ对肺内小动脉平滑肌细胞膜Ca2 ┐ATPase活力的影响

本课题观察了低氧及血管紧张素Ⅱ（ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎⅡ,ＡｎｇⅡ）对分离培养家兔肺内小动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭ－Ｃｓ）膜Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力的影响,同时用钙通道阻断剂维拉帕米（ｖｅｒａｐａｍｉｌ,ＶＰ）进行干预,进一步了解细胞内钙与Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力的关系。结果表明：ＰＡＳＭＣｓ膜Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力对低氧具有短暂的耐受性,随低氧时间延长,Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力呈时间依赖性抑制;低氧、ＡＮＧⅡ均能抑制Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力（Ｐ＜０．０１）低氧＋ＡⅡ对Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力的抑制具叠加效应（Ｐ＜０．０５）;ＶＰ可逆转低氧、ＡｎｇⅡ、低氧＋ＡｎｇⅡ对Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力的抑制（Ｐ＜０．０１）。结果提示：低氧,ＡＮＧⅡ可通过抑制肺血管平滑肌细胞膜Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力而可能削弱肺血管平滑肌舒张功能也可能是低氧性肺动脉高压（ＨＰＨ）形成的原因之一。     

HL－60细胞诱导分化过程中TPK和PTPP活力的时空改变

对ＲＡ、ＨＨＴ和ＷＰ_（８５２）诱导ＨＬ－６０细胞分化过程中胞浆和膜溶脱部分中的ＴＰＫ和ＰＴＰＰ活力变化进行了研究．结果表明,在诱导早期,ＴＰＫ的活力就有明显的波动变化;随着诱导时间的延长,胞浆部分ＴＰＫ活力下降,膜溶脱部分的ＴＰＫ活力则升高．诱导后,胞浆部分和膜溶脱部分的ＰＴＰＰ活力均明显升高。与ＴＰＫ活力变化相比较,ＰＴＰＰ变化幅度比ＴＰＫ的大。     

凝血酶激活的单链尿激酶型纤溶酶原激活剂的构建、表达、纯化和性质研究

用Ｋｕｎｋｅｌ突变法,将单链尿激酶型纤溶酶原激活剂（ｓｃｕ－ＰＡ）ｃＤＮＡ基因中编码Ｐｒｏ１５５—Ｌｙｓ１５８的片段定点突变,并将此突变的ｓｃｕ－ＰＡ（ｔｓｃｕ－ＰＡ）的ｃＤＮＡ克隆到表达载体ｐＣＭ－β－ｎｅｏ中,与ｐＣＭ－ｄｈｆｒ共转染ＣＨＯ／ＤＨＦＲ－细胞．获得的稳定表达株在无血清培养基中２４ｈ的表达量为６２０ＩＵ／１０６细胞．经锌离子螯合Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ亲和层析得到ｔｓｃｕ－ＰＡ纯品．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示ｔｓｃｕ－ＰＡ分子量为５３ｋＤ左右,与预期的结果相符．ｔｓｃｕ－ＰＡ是由凝血酶激活而不是由纤溶酶激活,但激活后也能转变为双链分子（ｔｃｕ－ＰＡ）．ｔｓｃｕ－ＰＡ仍保持了ｓｃｕ－ＰＡ的血纤维蛋白亲和性．酶动力学研究表明,激活后的ｔｓｃｕ－ＰＡ水解Ｓ２４４４的Ｋｍ和Ｋｃａｔ值与高分子量尿激酶（ＨＵＫ）相似．体外溶栓实验结果表明,ｔｓｃｕ－ＰＡ可以选择性地溶解富含凝血酶的血凝块,对贫凝血酶的血凝块作用不大     

红细胞分化因子诱导HL—60细胞排核过程中酪氨酸蛋白质磷酸化…

红细胞分化因子是从兔子网织红细胞中提出的一个蛋白因子,它可以使多种癌细胞株的生长受到抑制,以早幼粒白知病细胞（ＨＬ－６０）为研究其ＥＤＤＦ诱导过程中细胞内ＰＴＫ,ＰＴＰＰ及它们底物磷酸化水平的变化,实验发现：部分纯化的ＥＤＤＦ对ＨＬ－６０细胞生长有明显的抑制作用,经ＮＢＴ还原和Ｇｉｅｍｓａ染色,可见ＨＬ－６０细胞被诱导出现排核,同时,细胞的ＰＴＫ,ＰＴＰＰ酶活性明显的变化,ＰＴＰＰ和ＰＴＫ的底物蛋     

BIV—1—gp120在重组杆状病毒系统中的表达

将中国株ＨＩＶ－１Ｂ亚型ｇｐ１２０全基因序列克隆到杆状病毒转座载体ｐＦａｓｔＢａｃＩ中多角体启动子下游,构建成重组转座载体ｐＦａｓｔＢａｃＩ－ｇｐ１２０,利用细菌／杆状病毒（Ｂａｃ ｔｏ Ｂａｃ）表达系统筛选重组杆状病毒,在昆虫细胞Ｓｆ９中高效表达了ＨＩＶ－１的外膜糖蛋白ｇｐ１２０,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析结果一致,证明表达了２种糖基化程度不同的ｇｐ１２０。     

人血红细胞酷氨酸蛋白磷酸酶（PTPP）的研究：Ⅱ.胞浆PTPP的分离纯…

人血红细胞胞浆部分经（ＮＨ４）２ＳＯ４沉淀,ＤＥＡＥ－纤维素（ＤＥ２）柱层析,磷酸纤维素柱层析（Ｐ１１）得到部分纯化的ＰＴＰＰ,产率;５．７％,提纯１０７５倍。以＾３２Ｐ－Ｔｙｒ－Ｐｏｌｙ（Ｇ４：Ｔ）作底物,测得其表征Ｋｍ约为０．５－０．８μｍｏｌ／Ｌ。该酶的最适ｐＨ和最适温度分别为７．０－７．８及３７－４０℃。Ｚｎ＾２＋等二价金属离子及Ｎａ３ＶＯ４等酸根基团对其活性有明显的抑制作用;ＥＤＴＡ、甘     

黄地老虎颗粒体病毒DNA片段的克隆与颗粒体蛋白基因的定位

用ｐＵＣ１９质粒作载体,克隆了黄地老虎颗粒体病毒（Ａｇｒｏｌｉｓｓｅｇｅｔｕｍｇｒａｎｕｌｏｓｉｓｖｉｒｕｓ,简称ＡｓＧＶ）ＤＮＡＰｓｔＩ－Ｄ．Ｅ．Ｆ．Ｇ．Ｈ．Ｊ．Ｋ．等７个片段。以［￣（３２）Ｐ］－ｄＣＴＰ标记的油桐尺蠖核型多角体病毒（Ｂｕｚｕｒａｓｕｐｐｒｅｓｓａｒｉａｎｕｃｌｃａｒｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓ简称ＢｓＮＰＶ）多角体蛋白基因为探针,在３７℃条件下对ＡｓＧＶ）颗粒体蛋白基因进行了定位,将其分别定位于ＢｓｌⅡ－Ｓ或ＴＰｓＴＩ－Ａ或Ｂ和ＥｃｉＲＩ－Ａ片段上。     

牛病毒性腹泻病毒基因组cDNA文库的构建

以牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）┥ｎＬ株的基因组ＲＮＡ为模板,经逆向转录酶作用,合成第一链ｃＤＮＡ,再以ＲＮａｄｓｅ／Ｈ与ＤＮＡ聚合酶Ｉ联合作用合成ｄｓｃＤＮＡ,并以ｄＣ同聚物尾化。ｐＵＣ８ＤＮＡ在Ｐｓｔ Ｉ酶解后,以ｄＧ同聚物尾化,两者退火构成重组质粒,转化到Ｅ．ｃｏｌｉ ＪＭ１０１受体菌中,另以γ－＾３２Ｐ－ＡＴＰ标记ＢＶＤＶ ＲＮＡ制备探针,通过菌落原位杂交筛选重组子。酶切分配表明重组质粒插入     

AVP4—8的鼠脑结合位点有别于VP受体

ＡＶＰ４┐８的鼠脑结合位点有别于ＶＰ受体阎庆武杜雨苍＊（中国科学院上海生物化学研究所，上海２０００３１）加压素（ＶＰ）是一种下丘脑垂体后叶激素。它由９个氨基酸残基组成并且种属差异很小。大多数哺乳类ＶＰ的组成都是Ｃｙｓ１－Ｔｙｒ２－Ｐｈｅ３－Ｇｌｎ４－...     

天花粉蛋白的定点聚乙二醇修饰

用一种定点修饰天花粉蛋白（ｔｒｉｃｈｏｓａｎｔｈｉｎ,ＴＣＳ）的方法,将聚乙二醇（ＰＥＧ）偶联到预先选定的位点．利用ｎＴＣＳ无半胱氨酸（Ｃｙｓ）残基这一特点,通过定点突变将一个Ｃｙｓ残基引入ＴＣＳ以取代第７位的丝氨酸（Ｓｅｒ）残基．然后,与巯基反应的ＰＥＧ－ｍ ａｌｅｉｍ ｉｄｅ 即可偶联到新引入的Ｃｙｓ 残基上．经纯化得到均一的ＰＥＧ－ＴＣＳ复合物,在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上显示一条区带,表观分子量为３８ ｋＤ．复合物的体外致核糖体失活活性降低了６倍,但其体内引产活性与ｎＴＣＳ相同．定点ＰＥＧ修饰方法为改造ＴＣＳ提供了新途径．     

温度对麦长管蚜的影响

温度对麦长管蚜的影响汪世泽,郝树广（西北农业大学陕西杨陵７１２１００）ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＴｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｎＥｎｇｌｉｓｈＧｒａｉｎＡｐｈｉｄ￥．ＷａｎｇＳｈｉｚｅ;ＨａｏＳｈｕｇｕａｎｇ（ＮｏｒｔｈｗｅｓｔｅｒｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ,Ｙａｎｇｌｉｎｇ,ＳｈａａｎｘｉＰｒｏｖｉｎｃｅ７１２１００）．ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｃｏｌｏｇｙ,１９９３,１２（３）：５３－５６．ＩｎａｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｏｆＥｎｇｌｉｓｈｇｒａｉｎａｐｈｉｄ,ｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｒａｔｅＶ（ｔ）ｏｆａｌａｔａｅｉｓｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆａｐｔｅｒａｅ,ａｎｄｔｈｅＶ（ｔ）ｏｆ４ｔｈｉｎｓｔａｒｏｆａｌａｔａｅｉｓｔｈｅＩｏｗｅｓｔ．Ｔｈｅａｌａｔａｅａｐｐｅａｒｓｔｏｂｅａｂｌｅｔｏｔｏｌｅｒ－ａｔｅａｗｉｄｅｒｒａｎｇｅｏｆｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ,ｂｕｔｔｈｅｓｕｒｖｉｖａｌｃｕｒｖｅｉｓａｆｆｅｃｔｅｄｅｖｉｄｅｎｔｌｙｂｙｉｔ．Ａｔｌｏｗｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ,ｔｈｅｃｕｒｖｅｄｅｃｌｉｎｅｓｓｌｏｗｌｙ,ｂｕｔａｔｈｉｇｈｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ