可可西里碱性土壤样品细菌的分离和生物学特性

可可西里是位于青海玉树藏族自治州的自然环境保护区,由于当地的恶劣气候特点,其土壤微生物多样性很少被研究.采用5种分离培养基对来源于可可西里的12个盐碱土壤样品进行选择性分离,共分离得到5株细菌.其中4株菌分别属于游动微菌属(Planomicrobium)、库克菌属(Kocuria)、气球菌属(Aerococcus)和芽...     

2株具抗菌活性的稀有放线菌的筛选和鉴定

从药用植物根际土壤样品中分离得到了一批放线菌菌株,通过对其进行了抗茵活性筛选,发现菌株45725具有较好的抗耻垢分枝杆菌活性,菌株06-2230具有较强的抗绿脓杆菌活性。菌株45725和06-2230在酵母-麦芽膏琼脂（ISP2）、燕麦琼脂（ISP3）、无机盐淀粉琼脂培养基（ISP4）、葡萄糖天冬素琼脂培养基（ISP5）和马铃薯培养基（PDA）上生长良好,基生菌丝丰富,无气生菌丝。2株菌的最适生长温度为28℃,最适生长pH值7．0～7．5。综合2株菌的形态学、生理生化、细胞化学分类特征和基于16SrRNA基因序列的系统发育分析和DNA—DNA杂交结果,菌株45725和06—2230分别是多形态放线菌属的2个不同种。     

hPARP1酶在杆状病毒/昆虫细胞中的高表达及快速纯化

PARP1是动物细胞内的一种重要的DNA修复酶。近几年PARP1作为新型的抗癌靶点,受到广泛的关注。为了获得高活性的PARP1,首先将hPARP1基因克隆到载体pFastBacTM1中,构建转移载体pFast-hPARP1;然后转化大肠杆菌Escherichia coli DH10Bac感受态细胞中。其次,通过位点特异性转座,将hPARP1基因整合到Bacmid穿梭载体中,构建表达质粒Bacmid-hPARP1。最后,通过脂质体将表达质粒转染Sf9昆虫细胞。Western blotting和酶活测定法对hPARP1的表达和活性进行分析。采用3-氨基苯甲酰胺亲和层析柱对收获的昆虫细胞中表达的hPARP1酶进行纯化。Western blotting结果表明在昆虫细胞中hPARP1酶表达成功。经3-氨基苯甲酰胺亲和层析柱纯化后,Sf9昆虫细胞表达出的hPARP1酶的比活由0.051 nmol/(minμg)提高到了1.988 nmol/(min.μg),而且每100 mL的细胞中能够收获约3.2 mg酶。实验结果为PARP1大规模生产和应用提供了可参考利用的技术。     

根际放线菌I06—03431产生的核苷类抗生素3431的研究

在抗稻瘟菌农用抗生素的筛选过程中,从60多种中药植物根际土壤获得的放线菌中发现,放线菌106—03431的发酵液具有强抗稻瘟菌的活性。经色谱分离纯化,获得活性成分3431,经光谱学数据分析,证明3431为已知核苷类抗生素,丰加霉素（Toyocamycin）：进一步生物活性研究表明,0．005μg／mL的3431能够抑制稻瘟菌孢子萌发和菌丝生长。另外,3431还具有与植物生长调节剂6-苄基腺嘌呤（6-BA）一样的抑制拟南芥根生长的活性。     

绿脓杆菌SecA ATPase抑制剂筛选模型的建立和应用

Sec途径(分泌途径,Secretion pathway)是蛋白质转运的主要途径。其中,SecA ATPase是蛋白质转运途径中的"动力泵",它通过ATP的水解循环驱使蛋白质前体穿过细菌内膜。SecA蛋白在细菌中是独有且不可缺少的。克隆和高效表达绿脓杆菌PasecAN75蛋白(绿脓杆菌SecA蛋白N端645个氨基酸残基组成的片段,大小约75 kD)并优化其ATPase酶活测定体系,在此基础上建立了更为灵敏的SecA蛋白ATPase活性抑制剂的筛选模型。运用该模型从化合物库的3220个样品中筛选得到可抑制绿脓杆菌SecA ATP酶的活性阳性化合物4个,从7196个微生物发酵液中得到66个阳性样品,筛选阳性率为0.67%(以抑制率大于30%为筛选阳性标准)。而后通过已建立的细胞水平筛选模型对其抗菌活性进行验证。研究结果表明3个化合物样品和6个发酵液样品在酶水平和细胞水平对绿脓杆菌SecA ATPase均有较好的抑制作用,值得进一步研究。     

藓类植物孢子生活力的快速检测方法初探

通过对温度和光照条件的实验探索,筛选出金发藓（Polytrichum commune）和细叶小羽藓（Haplocladium microphyllum）2种藓类孢子萌发的最适条件。采用碘-碘化钾染色法、TTC染色法、红墨水染色法、亚甲基蓝染色法对6种藓类植物孢子的生活力进行测定,并将测得的生活力结果与孢子萌发率进行了比较分析。结果表明,亚甲基蓝染色法测定的藓类植物孢子平均生活力百分率与孢子平均萌发率最为接近,且染色效果明显,可用于苔藓植物孢子生活力的快速测定。亚甲基蓝染色法测得的孢子生活力（x）与其离体萌发率（y）的相关性达到极显著水平（r=0.976）,其回归方程为y=-8.547+1.069x(P<0.01),可通过孢子生活力方便预测萌发率。     

女性泌尿生殖系统的病原菌分析

目的 了解女性泌尿生殖系统的病原菌感染现状及体外耐药情况,为临床医师提供诊断和治疗依据。方法 对丽水市中医院2002-2005年女性泌尿生殖系统病原菌进行统计分析。结果 共分离出致病菌344株,其中G^-菌113株（32．8％）;G^＋菌175株（50．18％）;真菌56株（16．3％）。G^-菌中以大肠埃希菌（33．6％）、奇异变形杆菌（8．8％）为主;G^＋菌中以表皮葡萄球菌（28．6％）、粪肠球菌（14．3％）为主;真菌中主要是白色假丝酵母菌（91．1％）。所分离细菌中,耐药率最低的为特治星（哌拉西林-他唑巴坦）、头孢他啶、头孢噻肟及万古霉素、利福平。结论 泌尿生殖系统感染的病原菌耐药率呈上升趋势,真菌的感染应引起高度重视,加强对细菌耐药性监测,综合分析,合理使用抗生素。     

卵叶泥炭藓茎尖包埋玻璃化法超低温保存研究

该研究通过对脱水时间和化冻温度的探索,检验了包埋玻璃化法在超低温保存湿润生境中苔藓的可能性。结果表明:卵叶泥炭藓无菌苗在4℃条件下预培养3d后,在0℃用60% PVS_2装载30min,PVS_2脱水60min后迅速投入液氮保存,24h后用40℃水浴快速化冻2min再培养,成活率可达42.41%,且再生植株与常温状态下的植株形态指标没有显著性差异。研究认为,包埋玻璃化法超低温保存湿润环境中生长的苔藓植物是可行的。     

自然界中难分离培养微生物的分离和应用

采用在分离培养基中添加自然来源的抽提液,或加入一些特殊化合物,使其中处于Viable but non-culturable（VBNC）状态的微生物恢复其生长繁殖能力,从而得到分离。实验结果发现甜菜碱、丙酮酸钠、SOD以及过氧化氢酶可使分离到的微生物种类及菌落总数明显增加。还采用固液结合的方法来分离那些在普通平板培养基上不能形成肉眼可见菌落的那些微小菌落的微生物。采用这几种方法从4份土壤样品中共分离得到52株放线菌,103株细菌,17株真菌。对其中的放线菌和真菌进行了生物活性的测定,得到多株具有抗菌活性的微生物,经过多次复筛的平均阳性率为4.325％,略高于用常规方法分离得到的微生物。因此证明有效的分离方法将为今后微生物药物的筛选和药用微生物菌种的保藏提供更丰富的来源。