诱导血红素加氧酶-1表达在器官移植中的保护作用

器官移植术中及术后移植器官的缺血再灌注损伤（ischemia-repeffusion injury,IRI）和免疫排斥反应一直困扰着外科医生.血红素加氧酶-1（heme oxygenase-1,HO-1）是血红素代谢过程中的限速酶,广泛分布于哺乳动物的各种组织细胞中.血红素在它的催化下降解代谢为一氧化碳（CO）、胆绿素和游离铁离子.HO-1在氧化应激、炎性反应、低氧和缺血等状态下均能高度表达.HO-1及其催化血红素代谢产物主要通过抗炎性反应、抗氧化反应、调节同种异体反应性T细胞的活性及增殖、抗内皮细胞凋亡、抑制内皮细胞活化等作用机制,对移植器官起到抗IRI和抗免疫排斥作用,从而增加移植器官成活率及延长其存活时间.     

大鼠肝及脑组织中微粒体血红素加氧酶同工酶研究

采用离子交换层析和免疫印迹法分离、纯化和分析血红素和苯肼诱导后大鼠肝脏、脑组织.结果显示：纯化诱导后的大鼠肝脏,获得 HO-1和 HO-2,前者活性高于后者为2∶1.未诱导的大鼠肝脏仅获得HO-2,但诱导剂作用后,HO-1活性明显增加,而HO-2未见改变.HO-1和HO-2表观分子质量分别为30 ku和36 ku.诱导剂未作用的肝脏及作用的脑层析后仅获得HO-2活性的洗脱峰.免疫印迹法检测发现大鼠肝脏HO-2抗体与脑HO-2间有交叉反应,与肝脏HO-1无反应.实验表明在诱导剂作用的大鼠肝脏内含HO-1和HO-2同工酶,其中HO-1为诱导型酶.诱导剂作用的脑仅含HO-2.两种构型在表观分子质量,诱导性和免疫化学特性方面明显不同.     

不同强度的运动训练对大鼠骨骼肌自由基的影响

目的：探讨不同强度的运动训练对大鼠骨骼肌自由基代谢的影响。方法：对Wistar大鼠进行8周不同强度的跑台运动训练,观察了运动训练对大鼠在不同功能状态下骨骼肌中自由基代谢的影响。结果：在安静状态下以及力竭运动后对照组大鼠骨骼肌中超氧化物歧化醇（soD）、过氧化晦（CAT）的活性都明显低于训练组,丙二醛（MDA）的含量明显高于训练组。结论：三种不同强度的运动训练都能提高大鼠安静状态下骨骼肌中SOD、CAT的活性,降低MDA含量,抑制因力竭运动所导致的SOD、CAT活性的降低,而且中、大强度运动训练的效果强于小强度运动训练。     

核因子-κB在脂多糖诱导大鼠心肌血红素加氧酶-1基因表达中的作用

目的：观察核因子-κB（NF-κB）在脂多糖（LPS）诱导大鼠心肌血红素加氧酶-1（HO-1）表达中的作用,探讨其对内毒素休克（ES）的影响。方法：用生理多导仪监测大鼠静脉注射LPS（8mg／Kg）后12h平均动脉压（MAP）变化：用免疫组化方法检测心肌组织NF-κBp65和HO-1蛋白表达的变化;用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）检测心肌组织HO-1基因表达的变化。结果：①LPS组MAP较对照组快速持续降低（P〈0．01）：②LPS可诱导大鼠心肌间质血管内皮细胞和心肌细胞NF-κB阳性表达增强,1／2h和2h表达明显升高,6h和12h逐渐降低;③LPS可诱导大鼠心肌HO-1基因表达上调,2h开始增加,6h达到高峰,12h表达下调;LPS组大鼠心肌间质血管内皮细胞和心肌细胞HO-1蛋白表达在6h明显增强,12h表达减弱。④应用PDTC可明显减轻ES大鼠心肌损伤,并抑制心肌HO-1蛋白和基因表达。结论：LPS活化的心肌NF-κB参与LPS诱导心肌HO-1蛋白和基因高表达的信号转导,可能是导致ES顽固性低血压的机制之一。     

跑台运动训练和停训对去卵巢大鼠体成分和骨密度的影响

目的：研究中等强度跑台运动训练和停训对去卵巢大鼠骨密度和体成分的影响。方法：将60只成年雌性SD大鼠按体重分层后随机分为假手术组、去卵巢静止组和去卵巢运动组,每组20只。去卵巢运动组大鼠每周进行4次时间45min、速度18m／rain、跑道倾角5℃的跑台训练,持续训练14周时,将各组大鼠又随机分为两个亚组,即：假手术-16周（Sham．16）和假手术32周（Sham-32）组、去卵巢-16周（OVX-16）和去卵巢-32周（OVX-32）组以及去卵巢运动（EX）和停训组（DEX）。分别在末次训练结束36—48小时内或停训16周时,用双能X线骨密度仪检测各组大鼠体成分和骨密度的变化。结果：（1）训练结束时,OVX-16组大鼠体脂重量和含量显著高于Sham-16和EX组,而瘦体含量、全身骨密度和腰椎骨密度显著低于Sham-16和EX组,各组其他检测指标无显著变化。（2）停训16周时,OVX-32组大鼠体重、脂肪重量和体脂含量显著高于Sham-32组,而全身、腰椎和左右股骨骨密度以及瘦体含量显著低于Sham．32组;DEX组大鼠脂肪重量和体脂含量显著高于OVX-32组,而瘦体含量显著低于OVX-32组。结论：跑台运动对去卵巢大鼠体成分和骨密度的改善效应在停训16周时均未能被保持。     

血红素加氧酶介导GA对小麦糊粉层中α-淀粉酶的诱导表达

单独以赤霉素（GA）处理或与HO．1诱导物高铁血红素（Ht）和CO水溶液组合处理均导致小麦糊粉层中血红素加氧酶（H0）活性的提高,同时仪-淀粉酶基因表达和α-淀粉酶活性也明显受诱导;用HO-1专一性抑制剂锌原卟啉（ZnPPIX）预处理6h后,上述效应部分受阻断。这暗示HO可能参与GA诱导的α-淀粉酶基因表达。     

运动性和高血压性心肌肥大重塑时心肌初级和次级应答基因表达的差异

我们前期研究表明运动性和高血压性心肌肥大细胞表型变化在结构、功能和代谢方面均表现不同,但两者基因表达的不同特征尚不清楚。本实验采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ分子杂交方法对游泳运动１２周大鼠和自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）肥大心脏心肌初级和次级应答基因表达进行比较研究。结果表明,游泳大鼠心系数比对照大鼠提高２６％（Ｐ〈０．０１）,心肌ｃ－ｆｏｓ和心房钠尿肽（ＡＮＦ）基因表达在最后一次运动后即刻明显增强,在运动后２     

性激素对血红素氧化酶在大鼠前列腺腹侧叶表达的影响

血红素氧化酶(heme oxygenase,HO)是产生内源性一氧化碳(carbon monoxide,CO)的限速酶,最近发现内源性CO在调节平滑肌张力方面起重要作用。而人的良性前列腺增生(benign prostates hyperplasia,BPH)所致的膀胱出口梗阻与前列腺平滑肌张力有密切关系,但还不清楚内源性HO/CO系统是否介导了前列腺平滑肌的活动。为了观察性激素对大鼠前列腺腹侧叶中血红素氧化酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)和血红素氧化酶-2(heme oxygenase-2,HO-2)基因表达的影响,我们采用睾丸切除术建立雄性SD大鼠去势模型,用RT-PCR方法观察HO-1和HO-2的转录水平,应用免疫组织化学结合图像分析技术,观察去势、外源性雄激素和雌激素对前列腺腹侧叶中HO—1和HO-2蛋白水平的影响。结果表明,HO-1和HO-2在正常大鼠前列腺腹侧叶中都有表达,腺上皮细胞和纤维平滑肌间质呈现HO-1的免疫活性,HO-2的免疫染色仅在腺上皮细胞内检测到;去势组HO-1的mRNA和蛋白表达水平显著低于正常对照组(P<0.01):外源性给予雄激素组和雌激素组的HO-1表达水平明显增高(P<0.01),且雌激素主要增加前列腺纤维平滑肌间质的HO-1表达:HO-2在各组间的表达无明显差异(P>0.05)。这些结果提示,性激素对HO-1有诱导作用,但对HO-2无明显的影响,因此推测一氧化碳-血红素氧化酶(CO—HO)     

血红素氧合酶-1对心肌相对缺血/再灌注损伤的延迟保护作用

目的：探讨血红素氧合酶-1（HO-1）在运动预适应（EP）中对大鼠心肌相对缺血/再灌注（rI/R）损伤的延迟保护作用。方法：40只Wistar大鼠随机分为5组：正常对照组（CN）、相对缺血/再灌注组（IR）、运动预适应＋相对缺血/再灌注组（EI）、Hemin（HO-1诱导剂）＋相对缺血/再灌注组（HE）和运动预适应＋ZnPP（HO-1抑制剂）＋相对缺血/再灌注组（EZ）。测定大鼠再灌注期心率脉压乘积（PRP）、冠脉流出液MDA含量、HO-1活性等。结果：心肌HO-1活性：EI组和HE组较IR组显著升高,EZ组则显著降低。EZ组较EI组显著降低,EI组和HE组间亦有显著性差异。再灌注后60 min时间点PRP恢复率：EI组较IR组显著增高;IR组与HE组未见显著性差异,但30min时间点HE组显著增高;EZ组较EI组显著降低。冠脉流出液MDA含量：EI组、EZ组和HE组MDA含量较IR组皆显著降低;EZ组较EI组显著升高。结论：EP可以诱导HO-1合成,进而通过HO-1对24 h后发生的rI/R损伤产生延迟保护作用。     

人胎儿γ-珠蛋白基因的再活化及在β血红蛋白病治疗中的

在个体发育过程中,人β类珠蛋白基因的表达存在从胎儿（γ）到成人（β）珠蛋白基因的表达转换（或称开关）.β-地中海贫血和镰刀型贫血症是两种最为常见的严重危害人类健康的单基因遗传病,通过诱导胎儿期血红蛋白（HbF,α2γ2）在成人期表达对该病的治疗是一种有效的策略.一些活化γ珠蛋白基因表达的转录因子和辅助因子已经被鉴定,一些可以增加胎儿血红蛋白在成人红细胞中表达的药物也已被鉴别和实验,它们的作用机制被部分揭示,这些研究为发展通过活化γ-珠蛋白基因治疗镰刀形细胞贫血和重型β-地中海贫血的方法提供了重要线索和实验依据.     

心脏性猝死者心肌HO-1和VEGF的表达及意义

目的：探讨血红素加氧酶-1（heme oxygenase-1,HO-1）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）在心脏性猝死病人心室肌细胞中的表达及其意义。方法：运用免疫组织化学方法和Simple PCI图像分析系统观察33例心脏性猝死组和18例非心脏性猝死对照组尸检心肌组织中HO-1、VEGF蛋白的表达情况。结果：心脏性猝死组心肌组织HO-1（155.090±8.957）和VEGF蛋白表达（121.020±10.927）均显著高于非心脏性猝死对照组（116.200±6.355、84.207±4.402,均p〈0.05）。结论：HO-1和VEGF蛋白在心脏性猝死者心肌组织表达增强,可能与心脏性猝死有一定关系。     

EGCG经AKT1-Mdm-2-p53途径抑制卵巢癌HO-8910细胞的增殖

目的：初步探讨EGCG对卵巢癌HO-8910细胞增殖的抑制作用及其机制。方法：通过绘制细胞生长曲线、平皿克隆和软琼脂集落形成实验观察EGCG对HO-8910细胞增殖的抑制作用;Westem—blotting检测AKT1、Mdm-2与p53蛋白的表达。结果：（1）细胞生长曲线、平皿克隆和软琼脂集落形成实验结果显示,EGCG可有效抑制HO-8910细胞的增殖（n=3,P〈0．05）。（2）Western—blotting检测结果显示,EGCG处理后AKT1与Mdm-2蛋白表达均降低,而p53蛋白表达升高（P〈0．05）。结论：EGCG通过抑制HO-8910细胞中AKT1与Mdm-2蛋白表达,促使p53蛋白表达而发挥其对细胞增殖的抑制作用。     

血红素加氧酶／一氧化碳系统在1，6-二磷酸果糖抗IL-1β致胰岛细胞凋亡中的作用

目的：探讨1,6-二磷酸果糖（FDP）对白介素-1β（IL-1β）致胰岛细胞凋亡的保护作用及其机制与血红素加氧酶／一氧化碳（HO-1／CO）系统的关系。方法：应用离体培养乳鼠的胰岛细胞,分别检测IL-1β、FDP作用后细胞形态、细胞活性、细胞凋亡率、细胞HO-1的活性和细胞培养上清液中胰岛素的基础和高糖刺激分泌量以及CO的含量的变化,同时设立正常对照组。结果：正常胰岛细胞HO-1活性较低,CO含量少,凋亡细胞率为4．71±0．62。IL-1β作用20h后,与正常组比较胰岛细胞活性明显降低,基础和高糖刺激胰岛素分泌减少,胰岛细胞凋亡率明显增加（P〈0．01）;细胞HO-1活性有所增加,上清液中CO生成增多（P〈0．05）,损伤后与FDP共同孵育细胞活性显著升高,胰岛素基础和高糖分泌量增多,胰岛凋亡率明显降低,HO-1活性和CO生成显著提高（P〈0．01）,具有统计学意义。结论：FDP能降低IL-1β诱导胰岛细胞的凋亡,改善细胞活性,促进细胞的分泌功能,机制可能与FDP增加HO-1活性,从而CO生成增多有关。     

有氧运动对非酒精性脂肪肝大鼠肝细胞PPAR琢mRNA 表达的影响*

目的：研究有氧运动对非酒精性脂肪肝大鼠肝细胞PPARα表达的影响,探讨运动对非酒精性脂肪肝的保护防治作用.方法：36只雄性SD大鼠随机分为对照组,高脂组和高脂运动组.后两组喂食普通饲料的同时在实验前三周给予脂肪乳剂灌胃,以诱发脂肪肝.七周有氧运动后测大鼠体重、肝湿重、测血浆TC、TG、ALT、SOD及MDA水平;采用荧光定量PCR法测肝细胞PPARα mRNA的表达水平.结果：1）与对照组相比,高脂组TC、TG显著升高（P＜0.05,P＜0.01）,高脂运动组均无显著性差异.高脂组TC、TG显著高于高脂运动组（P＜0.01,P＜0.01）.2）高脂组PPARα mRNA表达显著低于对照组（P＜0.05）和高脂运动组（P＜0.01）;高脂运动组显著高于对照组.3）高脂组肝小叶结构模糊,肝窦界限不清,汇管区结构模糊,肝细胞肿胀,有空泡样改变,肝脂肪变性.高脂运动组肝脏仍有脂肪积聚,但肝细胞空泡消失,呈好转趋势.4）高脂运动组MDA显著低于高脂组（P＜0.01）;高脂运动组SOD显著高于高脂组（P＜0.01）.结论：运动可以通过上调PPARαmRNA来促进脂肪酸氧化、降低血脂,从而有效预防肝细胞脂肪变性.     

慢性缺氧对大鼠颈动脉体中wnt-1和β-catenin表达的影响

目的：观察慢性缺氧对大鼠颈动脉体（carotidbody,CB）中Wnt-1和β—catenin蛋白表达量的影响。方法：雄性SD大鼠40只,随机分为5组：正常氧组、慢性低压性缺氧1周、2周、3周和4周组。处理后,立即取出大鼠双侧CB,提取总蛋白,用westernblot法检测各组大鼠CB中Wnt-1和β-catenin表达量。结果：缺氧3周组和缺氧4周组之间Wnt-1的表达量无明显区别（P〉0．05）,而其余各组之间Wnt．1的表达量均具有统计学差异（P〈0．05）;相对于正常氧组,缺氧3周组大鼠CB中β-catenin的含量明显增加,有统计学意义（P〈0．05）。结论：本研究提示Wnt／β-catenin信号通路可能参与了慢性缺氧引起的颈动脉体干细胞增殖分化的过程。     

SOCS-3过表达对红系基因表达的影响

目的:建立能稳定、高效表达细胞因子信号转导抑制因子-3(SOCS-3)的细胞株SOCS-3-K562,为探讨SOCS-3在造血发育中的作用奠定基础。方法:通过重组慢病毒系统感染人红白血病细胞K562,采用流式细胞分选术,根据绿色荧光蛋白表达情况,获得稳定高表达SOCS-3的K562细胞;利用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹实验,比较分选获得的细胞与对照细胞的SOCS-3表达差异;利用半定量PCR检测SOCS-3表达升高对K562红系发育相关基因GATA-1、β-globin表达水平的影响。结果:构建了人SOCS-3慢病毒表达载体;与对照组相比,通过流式细胞分选获得的K562细胞的SOCS-3基因表达水平升高8.05倍,蛋白表达水平升高3倍;SOCS-3表达升高后,K562细胞的GATA-1、β-globin基因表达受到明显抑制。结论:SOCS-3在造血发育中有重要的调控作用,而对其表达进行改变将在规模化的造血细胞定向诱导研究中发挥重要作用。     

不同周龄Balb／c小鼠脏器质量及其变化趋势分析

目的：测定不同周龄Balb／c小鼠主要脏器质量、脏器系数,并进行比较。方法：取120只3周龄、5周龄、7周龄的Balb／c小鼠,雌雄各半,精确测量小鼠体重和主要脏器质量,计算脏器系数。结果：①雌性与雄性Balb／c小鼠脏器质量相比较：3周龄时肝、脾有显著差异（P〈0．05）;5周龄时肝有非常显著差异（P〈0．01）,脾、肺有显著差异（P〈0．05）;7周龄时肝、肺及双肾有非常显著差异（P〈0．01）,心、脾有显著差异（P〈0．05）。②雌性与雄性Balb／c小鼠脏器系数相比较：3周龄时肝、脾有显著差异（P〈0．05）;5周龄时肝、脾有非常显著差异（P〈0．01）,膀胱有显著差异（P〈0．05）;7周龄时肺、双肾有非常显著差异（P〈0．01）,脾、膀胱有显著差异（P〈0．05）。结论：随着周龄的增长,Balb／c雌、雄性小鼠之间,存在差异的脏器也在增多。     

运动训练对大鼠主动脉应力和NF-κB及c-fos表达的影响

目的：探讨不同强度运动训练对大鼠主动脉应力和NF-κB及c-fos表达的影响。方法：采用跑台训练方式,建立大鼠有氧运动和疲劳运动模型,运用免疫组织化学SABC法研究不同强度运动训练对大鼠主动脉VEC和VSMC中NF-κB及c-fos表达的影响。结果：胸主动脉血压的变化与对照组比较,有氧训练和疲劳训练均显著性升高（P〈0．05）,但有氧训练与疲劳训练之间差异不显著。与对照组比较,有氧训练大鼠VEC和VSMC中NF-κB和c-fos均显著性下调表达,胸主动脉张开角显著性升高（P〈0．05）,疲劳训练大鼠VEC和VSMC中NF-κB和c-fos均显著性上调表达（P〈0．05）。与有氧运动组比较,疲劳运动大鼠VEC和VSMC中NF-κB和c-fos表达与胸主动脉张开角升高均具有显著性差异（P〈0．05）。表明不同强度运动大鼠主动脉VEC中NF-κB和c-fos表达变化趋势不同,疲劳训练组表达的增加趋势更显著。结论：运动可引起大鼠主动脉VEC和VSMC NF-κB及c-fos表达的变化,且与运动强度关系密切。有氧训练引起的慢性剪切应力变化可使主动脉VEC和VSMC NF-κB加及c-fos显著性下调表达,与VEC和VSMC维持血管功能的稳态有关;疲劳训练可导致壁面摩擦剪切力、周向应力增加,过度的剪切力作用可引起主动脉VEC和VSMC NF-κB及c-fos显著性上调表达,血管张开角显著增加,血管发生非均匀生长,引起血管结构与功能的重塑。