柠檬酸铁对过亚硝酸根硝化酪氨酸反应的影响

由一氧化氮和超氧阴离子迅速反应生成的过亚硝酸根(ONOO^-)是一种强细胞毒性物质. 使含酚基物质如酪氨酸等硝化,是过亚硝酸根损伤生物系统的重要途径之一. 研究了柠檬酸铁和草酸铁对过亚硝酸根硝化酪氨酸反应的影响.在生理pH条件下柠檬酸铁和草酸铁对硝化反应无影响. 在弱酸性条件下柠檬酸铁和草酸铁可催化硝化反应. 对pH影响铁配合物在硝化反应中的催化活性的原因进行了讨论.     

TEC酪氨酸激酶基因是一种与肝再生调控相关的早期反应基因

 肝再生过程中立即早期反应基因的表达在成熟肝细胞由G0 期向G1期的转变中起着关键作用 .为探讨肝再生早期基因表达的变化 ,利用表达性差异显示分析 (RDA)技术研究了 2 3肝部分切除后 1h再生肝选择性基因表达 ,发现一株TEC酪氨酸激酶同源序列存在于差减产物中 ,RNA狭缝杂交证实确为差异表达基因 .从大鼠肝cDNA文库中分离其全长cDNA ,序列分析结果表明 ,该基因为小鼠 人TEC酪氨酸激酶的同源体 ,进而以该cDNA为探针 ,用Northern杂交证实 2 3肝部分切除后TEC酪氨酸激酶基因在 1h内呈现瞬间表达增加 ,其表达水平较基础水平增高 2 5倍 ;在原代培养大鼠肝细胞体系中 ,EGF可迅速诱导TEC基因表达 ,且不被蛋白合成抑制剂阻断 .结果表明 ,TEC基因是一种与肝再生调控密切相关的早期反应基因 .     

铁和铁调素在肝纤维化中的作用

多种慢性肝纤维化疾病均伴有肝脏过多的铁沉积,铁在肝纤维化发病中起重要作用。其机制包括:铁通过催化自由基生成和脂质过氧化反应破坏细胞生物大分子,引起细胞凋亡和坏死,激活肝星状细胞转化为肌成纤维细胞等。近来研究证实,由肝脏产生的铁调素(Hepc)表达的降低在慢性肝纤维化疾病肝脏铁沉积中起重要作用,补充外源性Hepc可以降低肝纤维化患者肝脏铁含量。因此,铁调素用于治疗铁过载疾病及肝纤维化具有重要价值。     

大鼠肝脏F抗原基因的克隆、表达及产物纯化

肝脏F抗原是一种新型的能直接反映肝损伤程度的血清学标志,它是1968年由美国学者Fravi从小鼠肝中分离出来的[1].F抗原是存在于哺乳动物肝细胞质中的一种水溶性不稳定的单链蛋白质,相对分子量为43kD[2],正常肝组织中的F抗原含量是血清中的1370倍,只有肝细胞被破坏时,F抗原才释放     

正常肝信息核糖核酸的翻译和对离体肝癌细胞的逆转分化作用

正常肝信息核糖核酸是从肝聚核蛋白体抽提RNA,通过寡聚(dT)纤维素亲和层析制备。分离的正常肝mRNA在麦胚蛋白合成系统和爪蟾卵翻译系统检定,能够翻译白蛋白,由此证明是有生物学活性的。用正常肝mRNA在离体情况下对肝癌细胞进行逆转分化研究,发现:(1)小鼠正常肝mRNA能抑制小鼠腹水肝癌细胞核酸和蛋白质的合成;初步见到人的正常肝mRNA能轻度抑制人体肝癌细胞(BEL-7404)的生长。(2)相应的正常肝mRNA分别在小鼠腹水肝癌和人肝癌细胞诱导了白蛋白合成;在人体肝癌细胞内核蛋白体聚成聚核蛋白体。(3)人体肝癌细胞受刀豆凝集素(Con A)凝集的能力减弱,这种凝集特性的改变,可以维持至3次细胞传代。这些实验结果显示肝癌细胞并非固定不可改变的,在正常肝mRNA作用下能够向正常逆转分化;讨论了mRNA转化机理,认为可能是通过肝mRNA翻译的蛋白质或mRNA本身直接调节基因转录来实现的。     

外源蛋白(BglS)在大肠杆菌中的合成、定域和加工

B.subtilis中编码β-1,3-1,4葡聚糖酶的基因bglS,它的产物在E.coli中的合成受宿主、载体和基因片段插入方向的影响。从E.coli细胞中BglS蛋白质定域分析和SDS-PAGE中活性酶分子检测发现存在着32kD和27kD两种活性酶分子,酶分子在周质空间很少停留。这种不同的活性酶分子的出现和分泌特点,可能与大肠杆菌细胞蛋白质加工和转位的方式有关。     

豇豆初生叶多胺氧化酶的分子特性（英文）

从6 d苗龄的豇豆幼苗初生叶中提纯得到的多胺氧化酶是一种糖蛋白,其碳水化合物含量为8.17%.全酶分子量约为146 kD,由分子量为70kD的两个相同亚基组成,每个亚基含1个Cu2+.该酶的等电点为6.2,吸收光谱分别在波长278 nm和500 nm处有1吸收峰.8种蛋白质修饰剂修饰试验并配合底物保护证实酪氨酸、赖氨酸和色氨酸残基及-SH都不是该酶活性中心的必需基团,而组氨酸残基则是活性中心的必需基团.进一步分析部分失活的修饰酶动力学参数的变化得知,组氨酸残基可能处于酶分子的催化部位而非底物的结合部位.     

铁过载引起的疾病：一种“沉默”的疾病

铁是人体生命必需的微量元素,但摄入过多也会对身体健康造成危害。在广大公众心目中．往往只认识到铁提供给人体营养价值的一面,而忽视了铁过量的潜在危害。铁过量会影响心脏、肝脏、内分泌系统和其他器官的正常功能。介绍了血色病、神经退行性疾病、癌症等与铁过载有关的疾病,以期引起人们对铁代谢的全面认识。     

草鱼肠道肝胰脏蛋白酶活性初步研究

对不同种类不同蛋白质水平的饲料与草鱼肠道、肝胰脏蛋白酶活性之间的关系,对草鱼前、中和后肠蛋白酶活性的差异,以及这些酶的最适酪蛋白浓度和最适pH值进行了测定研究。草鱼肠道和肝胰脏蛋白酶活性在饲料含蛋白质32—40％的范围内随着蛋白质含量的增加而升高。肝胰脏蛋白酶活性要比肠道稍高些。饲草草鱼肝胰脏蛋白酶比活为每毫克酶蛋白每分钟产生332．5微克酪氨酸,肠道蛋白酶比活为260．0微克酪氨酸。草鱼肠道蛋白酶活性以后肠较高,前、中肠次之。在pH4—9范围内,以酪蛋白作为底物,草鱼肠道、肝胰脏蛋白酶最大活性分别在pH6．5和pH7．0。在酪蛋白实际浓度为83．33—333．33微克／毫升范围内,肠道和肝胰脏蛋白酶最适酪蛋白浓度分别为166．67微克／毫升和208．33微克／毫升。     

铁过载人群外周血相关指标变化分析

目的：探讨铁过载人群外周血相关指标的变化及血清铁蛋白(SF)和铁营养、血常规指标之间的关系,为铁过载的诊断及分类提供科学依据。方法：随机抽取196名铁正常人群(男SF:15~200μg/L、女SF：15~150μg/L)和226名铁过载人群(男SF:＞200μg/L、女SF:＞150μg/L)。采用放射免疫法检测SF浓度,检测铁营养状况和血常规指标,分析血清铁蛋白和铁营养、血常规指标之间的相关性。结果：铁过载人群血清铁浓度22.93μmol/L和转铁蛋白饱和度36%显著高于铁正常组的17.83μmol/L和28%(P<0.05),铁过载组人群不饱和铁结合力水平为40.69μmol/L和转铁蛋白浓度245.67mg/dL,显著低于正常组的46.97μmol/L和264.33 mg/dL(P<0.05),两组间总铁结合力水平的比较无显著差异(P>0.05);铁过载组红细胞计数平均为4.98×1012/L和血红蛋白含量平均为155g/L,显著高于铁正常组的4.82×1012/L和147g/L (P<0.05),铁过载组红细胞压积44%和平均红细胞血红蛋白含量31.17pg,显著高于铁正常组人群的42%和30.61pg (P<0.05),两组之间白细胞计数和血小板计数的比较无显著差异(P>0.05)。相关分析显示,血清铁蛋白与血清铁、转铁蛋白饱和度、红细胞计数、白细胞计数、血红蛋白、红细胞压积和平均红细胞血红蛋白含量呈显著正相关(P<0.05),与不饱和铁结合力、转铁蛋白水平和血小板计数呈显著负相关(P<0.05)。结论：中老年人群铁过载时,机体内血清铁、转铁蛋白饱和度、红细胞计数、血红蛋白、红细胞压积和平均红细胞血红蛋白含量均升高,不饱和铁结合力和转铁蛋白水平均降低;血清铁蛋白和血红蛋白呈显著正相关。因此,采用血常规检查和铁营养指标的联合检测来评价铁过载的程度,可为铁过载的早期发现、早期治疗提供科学依据。     

水母雪莲愈伤组织和悬浮培养细胞的抗冻性研究

水母雪莲（Saussurea meduasaMaxim）是典型的高山雪线植物。本文研究了其愈伤组织及悬浮细胞的培养过程,并对其抗寒性做了初步研究。 研究结果表明,水母雪莲愈伤组织和悬浮培养细胞分别可抵抗-6.5 ℃、-7.5 ℃的冰冻低温胁迫。水母雪莲愈伤组织细胞内丰富的蛋白质和淀粉粒多糖构成其较强抗冻能力的物质基础。低温锻炼后,悬浮细胞分泌蛋白中有新的多肽（76,48,27.5,19.5 kD）合成,而33,51 kD两条多肽合成增强。悬浮细胞抗冻能力的提高同蛋白质合成的增强是一致的。     

家蚕核糖体蛋白L7基因cDNA序列的克隆和分析

为了研究家蚕孤雌生殖的调节机制,应用二维凝胶电泳(2DE)技术分离正常生殖的家蚕卵与孤雌生殖家蚕卵的差异蛋白质,在蛋白质水平上筛选与家蚕孤雌生殖过程相关的重要蛋白质.利用MALDI-TOF-TOF MS分析这些差异蛋白,获得了大量小肽的序列特征.BLAST搜索本实验室构建的cDNA文库,获得了1个与家蚕孤雌生殖相关的核糖体蛋白L7基因.根据已有的cDNA文库,采用RACE方法克隆得到该核糖体蛋白基因的全长cDNA.利用生物信息学的方法和工具,对这个基因在核酸水平和蛋白质水平分别作了详细的分析和讨论并进行蛋白结构预测.结果表明,核糖体L7基因的cDNA全长为858 bp,编码区包含6个外显子,共编码268个氨基酸残基,蛋白的疏水性平均值为-0.586,分子量大小为30 kD,极性的最大值为 39.616,最小值为0.451,等电点为10.52.分子系统分析显示,该蛋白与Apis, Lysiphlebus 和Meladema中的核糖体蛋白L7具有较高的同源性.     

Angioarrestin(hARPl)C端FD区的克隆、表达及其免疫活性鉴定

 Angioarrestin是一种具有潜在应用价值的肿瘤血管形成抑制因子.利用DNA重组法构建了angioarrestin C端 hFD cDNA 和麦芽糖结合蛋白(MBP)重组原核表达质粒 pMAL-C2-hFD.将重组质粒转入大肠杆菌E.coli BL21（DE3）,经0.3 mmol/LIPTG 在37℃条件下诱导表达4h,SDS-PAGE 检测,融合蛋白表达量约占细菌总蛋白的20%.Western印迹证实,目的蛋白N端带有MBP标签.取表达上清纯化、透析、浓缩并冻干,以此为抗原免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体.此多抗可以与pET 22b（+）表达系统获得的 hFD重组蛋白发生良好的抗原抗体反应,ELISA检测多抗效价达1∶10240.实验证明：通过基因重组可获得angioarrestin C端hFD在大肠杆菌中的高效表达蛋白,且该蛋白具有较高的免疫活性.以此为抗原制备的抗angioarrestin多克隆抗体为深入研究angioarrestin提供了材料.     

褐飞虱细胞色素P450基因CYP4C62的原核表达及多克隆抗体的制备

【目的】细胞色素P450单加氧酶在昆虫生长发育和适应环境过程中发挥着重要功能。【方法】本研究克隆了褐飞虱Nilaparvata lugens细胞色素P450基因CYP4C62的开放阅读框（不含信号肽编码序列部分）,在大肠杆菌Escherichia coli中实现了高效表达,经Ni-NTA琼脂糖凝胶亲和层析柱纯化得到了重组的CYP4C62蛋白。将该蛋白免疫日本大耳白兔Oryctolagus cuniculus雄兔,制备了兔抗CYP4C62血清抗体。采用间接ELISA方法检测了血清抗体的效价;并通过Western印迹杂交检测了该抗体的免疫学特异性。【结果】结果表明,通过大肠杆菌表达出的CYP4C62蛋白相对分子量为56 kD。间接ELISA法检测表明,制备的兔抗CYP4C62抗体的效价达到1∶100 000。Western印迹杂交证实,该抗体既可与异源表达的CYP4C62蛋白特异性结合,也可以与褐飞虱总蛋白中内源的CYP4C62特异性结合,表明具有较好的免疫反应特异性。【结论】CYP4C62多克隆抗体的成功制备,为后续分析CYP4C62在褐飞虱各组织中的时空表达水平,并通过免疫组织化学法定位分析该蛋白的组织、细胞及亚细胞分布规律,及最终解析CYP4C62的生物学功能奠定了基础。     

Dynamics of protein nitration in cells and mitochondria

Nitric oxide is a precursor of reactive nitrating species such as peroxynitrite and nitrogen dioxide that modify proteins to generate 3-nitrotyrosine. Many diseases are associated with increased levels of protein-bound nitrotyrosine, and this is used as a marker for oxidative damage. However, the regulation of protein nitration and its role in cell function are unclear. We demonstrate that biological protein nitration can be a specific and dynamic process. Proteins were nitrated in distinct temporal patterns in cells undergoing inflammatory activation, and protein denitration and renitration occurred rapidly in respiring mitochondria. The targets of protein nitration varied over time, which may reflect their sensitivity to nitration, expression pattern, or turnover. The dynamic nature of the nitration process was revealed by denitration and renitration of proteins occurring within minutes in mitochondria that were subject to hypoxiaanoxia and reoxygenation. Our results have implications that are particularly important for ischemia-reperfusion injury.     

从绿藻礁膜（Monostroma nitidum Wittr）分离半乳糖专一的凝集素

礁膜（Monostroma nitidum Wittr）经 25%～80%硫酸铵分级、DEAE-纤维素52离子交换层析和Sephadex G-200凝胶过滤层析,得到纯化礁膜凝集素（Monostroma nitidum lectin,MNL）,在SDS-PAGE上显示单一蛋白染色带. 用Sephadex G-200层析测得其分子质量为66.6 kD, 用SDS-PAGE测得其分子质量为66.2 kD．该凝集素可以凝集人A、B、AB、O型红细胞,且凝集活性相同. 在对人（A、B、AB、O）、兔、鲤、鲫、鼠、羊、鸡、狗的红细胞凝集作用中,兔凝集作用最强．该凝集素在pH 4.00～10.53范围内均有活性,但在pH 5.20～9.40范围内活性最大．经100 ℃热处理30 min后,该凝集素对兔红细胞血凝活性保留25%,活性最大的温度范围为25～55 ℃．MNL被EDTA抑制,最小抑制浓度为3.13 mmol/L,但对 Ca^２＋和Mg^２＋不敏感．该凝集素凝集兔红细胞的作用不被D -果糖、D-甘露糖、D-葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、γ-球蛋白、牛甲状腺球蛋白所抑制,但被D- 半乳糖和乳糖抑制,最小抑制浓度分别为5 mmol/L和2.5 mmol/L．     

High glucose induced rat aorta vascular smooth muscle cell oxidative injury: involvement of protein tyrosine nitration

The alteration and further damage of vascular smooth muscle function have been implicated in the development of vascular complications and diabetes. Little is known about protein tyrosine nitration in vascular smooth muscle cell injury induced by high glucose. In this article, vascular smooth muscle cell was exposed to 30 and 40 mM high glucose for 72 h, and then the cell injury in vascular smooth muscle cell induced by high glucose was studied. It was found that high glucose stimulated vascular smooth muscle cell injury in a dose-dependent manner, including decreasing intracellular and extracellular glutathione contents, increasing malondialdehyde and intracellular reactive oxygen species content, increasing the production of nitric oxide (increased nitrite content in cell and medium), as well as increasing protein tyrosine nitration. By comparing protein tyrosine nitration induced by high glucose conditions and extrinsic factors (hemin–nitrite–glucose oxidase system and 3-morpholinosydnonimine), it may be speculated that protein is nitrated selectively, and specific protein tyrosine nitration is involved in diabetic vascular complications.     

Protein tyrosine nitration in the cell cycle

Nitration of tyrosine residues in proteins is associated with cell response to oxidative/nitrosative stress. Tyrosine nitration is relatively low abundant post-translational modification that may affect protein functions. Little is known about the extent of protein tyrosine nitration in cells during progression through the cell cycle. Here we report identification of proteins enriched for tyrosine nitration in cells synchronized in G0/G1, S or G2/M phases of the cell cycle. We identified 27 proteins in cells synchronized in G0/G1 phase, 37 proteins in S phase synchronized cells, and 12 proteins related to G2/M phase. Nineteen of the identified proteins were previously described as regulators of cell proliferation. Thus, our data indicate which tyrosine nitrated proteins may affect regulation of the cell cycle.     

嗜水产气单胞菌诱导的草鱼免疫球蛋白分析

取草鱼经嗜水产气单胞菌疫苗免疫,获免疫血清分两组,一组样品经饮和硫酸铵分级沉淀,秀析和电泳分析,另一组经Sephadex G-200柱层析分离及电泳分析,各分离样品经特异性集活性测定,发现沉淀分离组样品中抗体凝集活性最强的主要为35％饱和硫酸铵沉淀的组分,而柱层析分离组样品的凝集抗体主要集中在第一个洗脱蜂里。在电泳图谱中,各免疫组均比对照组增加了一条大分子B带,分子量为309kD左右,后者经变性电泳分离表现为两条区带,相对分子量分别为52kD和26KD。因而推测它们是单体IgG解离的重链和经链,而聚集在B带的是IgG的聚合形式IgM。     

人DNAJB6蛋白与人巨细胞病毒皮层蛋白pUL23相互作用的鉴定

pUL23是人巨细胞病毒（HCMV）UL23基因编码的皮层蛋白. HCMV皮层蛋白与病毒颗粒的形成、病毒转移、免疫调控等病毒生活过程相关.利用GAL4 酵母双杂交系统筛选人胚肾cDNA文库,获得与人巨细胞病毒皮层蛋白pUL23相互作用的宿主蛋白分子DNAJB6 ［DnaJ (Hsp40) homolog, subfamily B, member 6］.回复酵母双杂交、体外GST-Pull down和免疫共沉淀试验再次确认两者之间的相互作用.该结果为进一步研究pUL23蛋白在HCMV生活周期中的作用机制提供依据.