METTL3介导EZH2 m6A修饰在结直肠癌5-氟尿嘧啶耐药中的作用机制研究

摘要 目的：探讨甲基转移酶样蛋白3（METTL3）在5-氟尿嘧啶耐药中的作用机制。方法：大剂量间歇诱导法建立5-FU耐药细胞株。在耐药组细胞中分别敲减METTL3及EZH2抑制GSK343处理。qPCR及Western blot检测METTL3和EZH2表达。CCK-8检测各组细胞增殖情况。m6A甲基化RNA免疫沉淀技术分析EZH2 mRNA m6A修饰修饰情况。结果：各药物浓度处理下的耐药组细胞增殖活性与未处理细胞无显著差异（P>0.05）而原代细胞组肠癌细胞较未处理细胞在0.5-10 μg/mL处理下细胞增殖活性显著减低（P<0.01）。耐药组细胞与原代细胞组相比,METTL3及EZH2表达水平显著升高（P<0.01）。耐药组细胞METTL3敲减后或GSK343处理后,在0.5 μg/mL-10 μg/mL浓度间下的细胞增殖活性与0 μg/mL处理细胞增殖活性相比显著减低（P<0.05）。耐药组细胞METTL3敲减细胞的EZH2表达与对照细胞比,显著下调（P<0.01）。m6A甲基化RNA免疫沉淀实验显示耐药组细胞METTL3敲减细胞的EZH2 mRNA m6A修饰水平（m6A富集度为6361.95±67.47%）,较未敲减细胞修饰水平（396.30±57.74）显著减低（P<0.01）。结论：METTL3在肠癌细胞5-FU耐药抵抗中起到关键作用,靶向抑制METTL3有望成为缓解肠癌耐药的重要分子靶点。     

SELEX法筛选宫颈癌前病变核酸适配子

构建随机ssDNA文库,通过SELEX技术,以正常、炎性宫颈脱落细胞为反筛细胞,以上皮内低级别病变(CIN1)、上皮内高级别病变(CIN2、CIN3)和鳞状细胞癌脱落细胞为正筛细胞,经过12轮筛选特异性适配子高度富集得到宫颈癌前病变适配子库,经特异性、亲和力分析和细胞免疫荧光确立高特异性适配子CIN-Ap4可作为诊断宫颈癌前病变生物标志物,为宫颈癌前病变分子诊断奠定理论基础,提供新思路。利用Prime Premier 5.0设计构建了随机ssDNA文库并根据文库两端固定序列设计引物,对对称PCR和间接不对称PCR中的退火温度、循环数以及上、下游引物浓度比等条件进行优化,分析确定50μL反应体系中对称PCR的最佳反应条件为:最佳退火温度为49.5℃,最佳循环数为15个循环;间接不对称PCR的最佳反应条件为:50μL反应体系中上、下游引物浓度的最佳比例为80∶1,最佳循环数为35个循环。实验结果表明成功构建了寡核苷酸文库,在最适PCR条件下可获得理想的dsDNA和ssDNA,并具有良好的重复性,为顺利筛选适配子提供保证。     

早期胃癌血清特异标志物过氧化物酶4核酸适配体的筛选、鉴定与应用

胃癌是世界上死亡率第三的重大疾病,而在早期阶段却有着良好的治愈率和生存率。因此,找到针对早期胃癌的特异性标志物从而提高早期胃癌的检出率,是目前亟待解决的问题。在本实验室的早期研究中,发现过氧化物酶4（peroxiredoxin-4,PRDX4）有极大的潜能作为早期胃癌的特异性标志物,并且由于蛋白质结构的特殊性,能够分泌至血清中,为早期胃癌的无创化诊断提供了可能。本文为寻找血清中PRDX4蛋白的特异性适配体,通过消减-SELEX方法找到9种适配体。经特异性和亲和力分析后,证实其中Ap-EGACS-11在9种适配体中具有最高的特异性和亲和力。随后在适配体的验证研究中证实,相对于进展期胃癌病人血清、结直肠癌病人血清和正常人血清,Ap-EGACS-11对早期胃癌病人血清的检出率最高。该结果表明,PRDX4具有早期胃癌特异性血清标志物的潜能,且Ap-EGACS-11可直接作为早期胃癌的检测试剂。     

内蒙古图牧吉大鸨种群动态及时空分布稳定性

大鸨（Otis tarda）是我国I级重点保护野生鸟类,对大鸨重要栖息地种群数量的变化趋势进行研究,将为大鸨及其栖息地的保护提供科学依据。2017年至2020年,对内蒙古图牧吉国家级自然保护区内及周边的大鸨种群数量动态进行了全面调查,共选择33个监测地点,对大鸨的数量、性别和分布地点进行了调查。结果表明,大鸨种群数量从2017年193只增加至2020年253只;大鸨1月的越冬种群数量从2017年67只减少至2019年55只,2020年重新恢复至67只。各月大鸨种群数量呈现较大的变化,数量高峰期分别是5月和10月。12月至次年2月,越冬种群数量50 ~ 70只。雌性大鸨从3月开始监测到,数量高峰值出现在4月和5月,达到50 ~ 70只,不同的年份略有差别;6月之后数量开始下降,至9月开始略有回升,在10月以后,野外基本观察不到雌性个体。在野外易于观察的4月,2017至2020年4年中雌雄比的平均值是1︰2。2017年和2018年,大鸨在马鞍山区域分布较多,数量也较为稳定。然而进入2019年,分布地点减少,这可能与当地人类活动的干扰有关;2020年保护区功能区进行了调整,将2014年调整出保护区范围的马鞍山区域重新划入保护区中,湿地和草地面积均有所增加,大鸨分布地点数量逐渐恢复。针对目前保护区存在的问题,建议采取退耕还草、加强保护空缺管理及禁牧等保护措施对大鸨及其栖息地进行保护。     

基于卫星跟踪大天鹅春季迁徙时间及其影响因素

候鸟春季迁徙时间与其能否顺利完成迁徙过程,以及对繁殖地的成功选择和繁殖成效密切相关,通过对大天鹅越冬地和停歇地的春季迁徙时间选择原因及其影响因素进行分析,有助于深入理解候鸟春季迁徙时间策略和栖息地保护状况。2015年2月和12月,在河南三门峡湿地捕捉了60只越冬大天鹅并佩戴卫星跟踪器,获取了详细的大天鹅在越冬地和停歇地的春季迁徙时间等信息,并进一步分析了春季迁徙时间与气候因子的相关性。结果表明,大天鹅主要在夜间22：00-0：00和0：00-1：59迁离越冬地。大天鹅迁离越冬地的日期与温度呈显著性正相关,迁离时多选择顺风且风速较小的天气。大天鹅迁离越冬地后主要是在夜间飞行,而迁离停歇地后主要是在日间飞行。越冬地的温度越高,越有利于植物的生长,大天鹅可以快速地积累能量,提前开始春季迁徙。野外调查表明,内蒙古黄河中上游作为迁徙的重要停歇地,春季两岸捕鱼、农耕和放牧等为活动较多,因此大天鹅多选择在夜间觅食补充能量,在日间迁离。最后,针对黄河流域大天鹅栖息地的保护现状,提出了禁止经济开发项目、建立保护区和开展宣传教育等保护建议。     

基于环志数据探讨兴凯湖水鸟的迁徙规律

黑龙江兴凯湖位于中俄交界,该地区水鸟的迁徙路线及其保护状况受到我国及相邻国家政府和保护组织的高度关注。我们整理了兴凯湖水鸟的环志回收数据,对水鸟的迁徙规律进行了分析。结果表明,从2010年至2019年兴凯湖共环志鹤鹳类和雁鸭类968只,回收记录共29只次,其中白枕鹤（Grus vipio）6只次、东方白鹳（Ciconia boyciana）8只次、斑嘴鸭（Anas poecilorhyncha）3只次、绿头鸭（A. platyrhynchos）3只次、琵嘴鸭（A. clypeata）7只次、凤头潜鸭（Aythya fuligula）1只次和豆雁（Anser fabalis）1只次。水鸟环志回收数据揭示了兴凯湖鹤鹳类和雁鸭类的主要迁徙规律,证实了兴凯湖作为东北亚水鸟迁徙廊道的重要性,为我国与相邻国家开展水鸟的联合保护提供科学依据。     

卫星跟踪中蒙之间秃鹫春季迁徙路线及活动区域

秃鹫(Aegypius monachus)被世界自然保护联盟(IUCN)列为近危物种。每年冬季或者早春在渤海湾都会救护到因体质较弱而无法飞行的秃鹫,为了对秃鹫及其迁徙路线进行更有效的保护,于2016年春季对两只救护放飞秃鹫(ID1051和ID2016),利用卫星跟踪技术研究其迁徙路线和活动区,旨在为秃鹫的救护和保护提供基础资料。结果表明,ID1051和ID2016都迁徙到蒙古国的布尔干省和后杭爱省交界处,行程分别为2 200 km和2 400 km。ID2016在度夏初期、中期和后期的活动区面积(50%Fixed Kernel),分别为31 261.01km^2、1 492.96 km2和11 027.70 km^2。秃鹫在迁徙过程中主要时间在静息,其次是飞行和寻觅行为。在0至7时和19至24时,即晨昏和夜间秃鹫都处于静止状态。从8时开始,秃鹫开始活动,并在12和13时达到活动高峰,随后活动逐渐趋缓,直至18时趋于静止状态。本文提供了秃鹫的春季迁徙路线以及重要中途停歇地,为秃鹫的救护和保护提供了基础资料。     

卫星跟踪中蒙之间秃鹫春季迁徙路线及活动区域

秃鹫(Aegypius monachus)被世界自然保护联盟(IUCN)列为近危物种。每年冬季或者早春在渤海湾都会救护到因体质较弱而无法飞行的秃鹫,为了对秃鹫及其迁徙路线进行更有效的保护,于2016年春季对两只救护放飞秃鹫(ID1051和ID2016),利用卫星跟踪技术研究其迁徙路线和活动区,旨在为秃鹫的救护和保护提供基础资料。结果表明,ID1051和ID2016都迁徙到蒙古国的布尔干省和后杭爱省交界处,行程分别为2 200 km和2 400 km。ID2016在度夏初期、中期和后期的活动区面积(50%Fixed Kernel),分别为31 261.01km~2、1 492.96 km2和11 027.70 km~2。秃鹫在迁徙过程中主要时间在静息,其次是飞行和寻觅行为。在0至7时和19至24时,即晨昏和夜间秃鹫都处于静止状态。从8时开始,秃鹫开始活动,并在12和13时达到活动高峰,随后活动逐渐趋缓,直至18时趋于静止状态。本文提供了秃鹫的春季迁徙路线以及重要中途停歇地,为秃鹫的救护和保护提供了基础资料。     

环境温度对大天鹅越冬行为和活动区的影响

环境温度变化通过影响鸟类的行为进而使其活动区也发生变化,探讨三者之间的关联性有助于理解鸟类是如何通过行为调整以适应周围环境的变化,来满足自身的生理需求。本研究通过卫星跟踪的方法获得了在河南三门峡湿地越冬的31只大天鹅(Cygnus cygnus)详细位点数据,在ArcGIS和R语言中采用核密度估计法计算大天鹅的活动区面积,在SPSS中采用Spearman分析平均温度与活动区面积的相关性;并利用瞬时扫描法获得大天鹅越冬行为观察数据,采用非参数Kruskal Wallis检验对大天鹅行为的差异性进行分析,探讨了环境温度与大天鹅越冬行为和活动区三者之间相互作用的模式。研究表明,从越冬初期至后期,随着环境温度的先下降后升高,大天鹅的取食、运动、静息等主要行为发生了较大的变化,静息和取食行为先增加后减少,运动行为则先减少后增加。越冬不同时期的核心区和活动区面积与温度呈显著性正相关。大天鹅在不同时段的活动区面积大小整体上均呈现出先减少后增加的趋势。随着环境温度的变化,大天鹅的越冬行为也随之发生了调整,进而使活动区面积发生改变,主要体现在越冬初期大天鹅通过增加活动区面积及时补充能量增加体能,越冬中期减少活动保持能量需求,越冬后期增加盘旋飞行使得活动区面积增大等。大天鹅这一系列行为和活动区的调整都是为了更好地满足越冬不同时期的生理需求。     

中老年女性血清铁蛋白（SF）水平与年龄和体质指数（BMI）之间的关系的 流行病学研究

目的：评估中老年女性血清铁蛋白（SF）水平与年龄和体质指数（BMI）之间的关系。方法：选自中国4046 名健康女性进行横 断面研究，受试者年龄均在45-70 岁并签署了知情同意书。所有受试者血清铁蛋白水平采用放射免疫分析法测定。采用Spearman 秩相关检验分析血清铁蛋白与各指标之间的相关性。不同组别SF 差异的显著性用Kruskal-Wallis 秩和检验来比较。结果： Spearman 相关性分析显示血清铁蛋白与年龄（r = 0.425；p < 0.05）和BMI（r = 0.238；p < 0.05）均呈正相关。Kruskal-Wallis 秩和检 验显示不同年龄组和不同BMI组的血清铁蛋白水平均有显著性差异（p < 0.05）。65-70 岁人群的血清铁蛋白平均水平比45-50 岁 人群高出近两倍。并且肥胖人群中血清铁蛋白水平要远远高于偏瘦人群。结论：中老年女性铁储存的增加与年龄的增长和体质指 数的增加呈现正相关关系。