雌激素相关受体 ERR 的功能及其调控

雌激素相关受体 (estrogen -related receptor , ERR) 属于核受体超家族,是第一个发现的孤儿核受体,包括 ERRα, ERRβ和 ERRγ . ERR 的生物学功能主要体现在以不同的方式参与雌激素信号途径, ERR 与雌激素受体 (estrogen receptor , ER) 在骨骼组织和乳腺组织中拥有共同的靶基因,其中 ERRα和 ERRγ的表达状况还可作为乳腺癌诊断标志 . 另外, ERR 还在代谢调控中起重要作用 . 由于至今未在体内找到 ERR 的小分子配体,因而找到 ERR 活性调节因子对理解与雌激素相关的疾病如骨质疏松症、乳腺癌和糖尿病等将是非常有用的 .     

肌钙蛋白I2的原核表达及与ERRα1的体外相互作用

孤儿受体雌激素受体相关受体α1(ERRα1)与乳腺癌有密切的关系.酵母双杂交筛选发现乳腺组织中肌钙蛋白I2(TNNI2)与其有明显的相互作用.为进一步研究TNNI2与ERRα1的相互作用,融合表达了GST-TNNI2原核蛋白,并体外翻译了35S标记的ERRα1蛋白,将二者共同温育进行GST捕获实验.放射自显影结果显示,TNNI2能够捕获35S标记的ERRα1,证明TNNI2与ERRα1存在体外直接的相互结合,提示了肌钙蛋白I2在ERRα1参与的生理过程中可能有重要的作用.     

基因沉默孤儿核受体ERR-alpha抑制前列腺癌细胞的体内转移

目的:研究孤儿核受体ERRα对前列腺癌细胞E-cadherin(上皮细胞钙粘蛋白)的表达水平和体内转移能力的影响。方法:利用慢病毒介导的sh RNA构建稳定下调ERRα表达的DU145-sh ERRα和PC-3M-sh ERRα前列腺癌细胞模型,同时用ERRα特异性抑制剂XCT790抑制其活性,并利用Western Blotting(免疫印迹)检测上皮细胞标志物E-cadherin的表达水平。将PC-3M-sh ERRα细胞和PC-3M-scramble对照细胞用荧光素酶标记后原位注射小鼠前列腺,8周以后通过体内成像系统检测原位瘤的形成及其体内转移情况。结果:基因沉默ERRα表达水平和用其特异性抑制剂XCT790处理DU145后,E-cadherin的表达水平明显降低。在PC-3M-sh ERRα细胞中,E-cadherin的表达水平明显低于对照组,同时由其构建的6只原位前列腺癌小鼠模型中没有发生转移,而由对照组细胞构建的7只原位前列腺癌小鼠模型中有4只发生了转移。结论:在前列腺癌细胞中下调ERRα的表达水平抑制其E-cadherin的表达和体内转移能力。     

棕色田鼠睾丸和附睾雌激素α受体表达的增龄变化

应用免疫组织化学方法系统研究了初生（1日龄）到成体（60日龄）5个发育阶段各6只棕色田鼠睾丸和附睾内雌激素受体α（ERα）的表达。结果发现：①在生殖细胞中,1日龄组幼鼠的生殖母细胞和支持细胞有微弱的ERa阳性表达,10日龄组精原细胞中ERa有弱表达,25日龄组精子细胞出现了较强ERα阳性表达,发育到45日龄时精子细胞ERα阳性表达最强,成体组中各级生精细胞中均有ERα阳性表达。②在间质细胞中,1日龄组间质前体细胞有ERα阳性表达,10日龄表达减弱,而到25日龄增强,至45日龄达到峰值,而成体又减弱。③附睾中,1日龄附睾上皮细胞有ERα阳性表达,10和25日龄附睾管类肌细胞出现ERα阳性表达,45日龄和成体附睾管上皮细胞和类肌细胞中均有ERα阳性表达。上述结果表明,ERα可能作为一种特异性受体在棕色田鼠睾丸发育过程中影响睾丸间质细胞雄激素的分泌,进而调节生精过程和精子的发育成熟。     

脂肪来源干细胞通过Wnt/β-catenin通路调控前列腺增生上皮BPH-1细胞的增殖和凋亡

为了探讨脂肪来源干细胞对前列腺增生上皮BPH-1细胞增殖和凋亡的影响及分子机制,本研究从人体脂肪组织中分离脂肪来源干细胞并通过流式细胞术鉴定细胞表面标志物,将实验分为2组:对照组和脂肪来源干细胞共培养组。采用Transwell进行共培养,脂肪干细胞与前列腺增生上皮BPH-1细胞共培养组中两者比例为1:1,对照组中不含脂肪干细胞。CCK8检测前列腺增生上皮BPH-1细胞活力;羟脯氨酸法检测前列腺增生上皮细胞胶原合成能力;流式检测前列腺增生上皮细胞凋亡率;Western blotting检测前列腺增生上皮细胞Wnt3a、Bcl2和β-catenin蛋白表达水平。流式细胞仪检测结果,显示酶消化法能够从脂肪组织中分离出脂肪干细胞。人脂肪来源干细胞与前列腺增生上皮BPH-1细胞共培养能够显著抑制前列腺增生上皮BPH-1细胞的增殖能力,羟脯氨酸检测结果表明,脂肪干细胞能够显著抑制前列腺增生上皮BPH-1细胞胶原合成,流式检测结果显示脂肪干细胞能够显著促进前列腺增生上皮BPH-1细胞的凋亡,Western blotting检测显示脂肪干细胞能够显著抑制前列腺增生上皮BPH-1细胞Wnt3a、Bcl2和β-catenin蛋白表达。本研究的初步结论表明:脂肪来源干细胞通过抑制Wnt/β-catenin通路抑制前列腺增生上皮BPH-1细胞增殖。     

COX-2/PGE2对TNF-α促进MUC5AC分泌的影响

目的：研究环氧化酶-2（COX-2）/前列腺素（PGE2）在肿瘤坏死因子-α（TNF-α）刺激黏液生成过程中的作用。方法：体外培养的BEAS-2B气道上皮细胞系施以TNF-α刺激,以选择性及非选择性COX-2抑制剂为干预因素,比较各干预组与对照组中COX-2、PGE2水平及黏蛋白（MUC）5AC的含量的差异。结果：COX-2选择性抑制剂NS-398能抑制TNF-α引起的MUC5AC mRNA、MUC5AC蛋白含量增高（P〈0.05）,PGE2、COX-2及cAMP的含量也较刺激组减少,非选择性COX-2抑制剂吲哚美辛对MUC5AC mRNA及蛋白含量的影响不大。结论：在BEAS-2B上皮细胞系中,TNF-α能诱导COX-2/PGE2生成而引起黏蛋白分泌增加。     

雌激素受体相关受体亚型在鼻咽癌中的表达及分析

目的:探讨雌激素受体相关受体(estrogen receptor related receptors,ERR)α、β、γ亚型表达与鼻咽癌的关系.方法:随机抽取健康体格合者40人为时照组,鼻咽癌患者40例为试验组,采用RT-PCR方法检测ERRs家族各亚型的mRNA表达,采用Westston Blot印迹方法检测ERR各亚型在鼻咽癌组织中的表达.结果:RT-PCR及Western Blot蛋白印记检测显示ERR-α在对照组低表达、在实验组高表达,两组患者外周血及鼻咽组织中ERR-B表达差异无统计学意义,ERR-γ在对照组高表达、在实验组低表达.结论:ERR-α和ERR-γ在鼻咽癌患者体内表达异常,其可能与鼻咽癌的发生发展相关.     

前列腺组织中神经生长因子(NGF)表达的研究

研究前列腺组织中神经生长因子（ＮＧＦ） 的生理学意义。采用原位杂交和免疫组化法, 检测４３ 例前列腺增生组织, ８ 例腺癌组织和８ 例正常组织中β－ＮＧＦｍ ＲＮＡ及其蛋白的表达及分布。结果显示β－ＮＧＦｍ ＲＮＡ 在正常组织及增生组织中定位于间质细胞, 偶见于上皮细胞中; 而在癌组织中, 上皮细胞和间质细胞有同样强度的β－ＮＧＦｍ ＲＮＡ染色。其蛋白在良性组织中表达主要着色在间质细胞中,上皮细胞呈弱表达,而癌组织中上皮细胞见着色明显增强（Ｐ＜ ０．０５）。ＮＧＦ的自分泌异常可见是前列腺组织由良性向恶性转变的原因之一。     

肌钙蛋白I2辅助活化多种核受体的反式作用

为深入研究乳腺癌中孤儿受体ERRα1参与基因表达调控的详细机理,特别是核受体辅激活蛋白在其中的作用,以ERRα1的LBD为诱饵,用酵母双杂交系统筛选人乳腺组织cDNA文库得到了与其有明显相互作用的快速骨骼肌型肌钙蛋白I(TNNI2).应用酵母双杂交技术研究表明,TNNI2与多种核受体存在相互作用,且这种作用依赖于功能性的核受体AF2结构域.在哺乳细胞瞬时共转染实验中,TNNI2显示了对多种核受体反式激活功能的辅助活化作用.研究证明,TNNI2与许多辅激活蛋白类似,以配体依赖(对类固醇激素受体而言)或非依赖(对孤儿受体而言)的方式与核受体功能性AF2结构域相互作用,并增强多种核受体介导的反式作用.     

雌激素受体α基因多态性及其表达与子宫内膜增生的关系

目的:探讨子宫内膜增生症雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)基因多态性及其与表达的关系.方法:选择江西地区150例子宫内膜增生症患者为实验组,100例子宫内膜正常妇女为对照组.应用分子生物学的方法分析ERα基因Xba Ⅰ和PvuⅡ限制性片段长度多态性,通过逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法分析ERα表达.结果:(1)X等位基因频率的变化与子宫内膜增生程度具有相关性P＜0.01,不典型增生组中XX型频率是正常组的4倍.随着子宫内膜增生程度的增加,P等位基因频率减少,人群中PP基因型频率逐渐减少;(2)单纯性增生、复杂性增生ERαmRNA和蛋白表达均比正常组高(P＜0.01),而不典型增生ERαmRNA和蛋白质表达均比单纯增生、复杂增生低(P＜0.01).结论:ERα基因多态性与子宫内膜增生发生及增生程度存在相关性.ERα表达的下调与子宫内膜不典型增生的发生有关.     

ERα的辅调节因子与乳腺癌关系的研究进展

雌激素受体α（estrogen receptorα,ERα）是配体依赖的转录因子,属于核受体超家族成员。ERα介导转录的经典途径是与雌激素结合后作用于靶基因启动子区的雌激素反应元件（estrogen response element,ERE）,进而诱导靶基因转录。ERα招募辅调节因子（共激活子和共抑制子）参与ERα介导的基因转录调控。辅调节因子主要通过乙酰化、磷酸化、甲基化等表观遗传机制参与转录调控,影响靶蛋白表达水平。ΕRα介导的基因转录调控在乳腺癌的增殖、分化、侵袭转移等过程中发挥重要作用。综述在ERα介导的基因转录调控中几类辅调节因子对乳腺癌发生发展的影响。     

雌激素快速激活MAPK途径促进前列腺间质细胞的增殖

为研究雌激素促进前列腺间质细胞增殖的机理,使用雌二醇（E2）或BSA雌二醇（BSA-E2）处理前列腺间质细胞系wpmy-1,用MTT法及细胞计数法检测细胞增殖情况;用实时RT-PCR以及Western印迹方法检测细胞增殖核抗原（PCNA）的表达水平;用抗磷酸化ERK1/2抗体检测细胞内MAPK途径的激活情况.结果显示,2种形式的雌二醇均能促进前列腺间质细胞系wpmy-1的增殖,并且显著上调增殖相关核抗原PCNA的表达水平;2种形式的雌激素均能快速激活wpmy-1细胞内的MAPK信号通路;MAPK途径的特异性抑制剂PD98059能够显著降低雌激素对细胞增殖以及PCNA表达水平的上调作用.结果表明,雌激素能够通过膜受体快速激活前列腺间质细胞中的MAPK信号通路,进而促进前列腺间质细胞的增殖.     

不同疗法对去卵巢大鼠子宫ERα和ERRα蛋白表达的影响

目的:本研究旨在对比观察全身垂直振动、跑台运动、金雀异黄酮和氯化锂等不同干预疗法对去卵巢骨质疏松大鼠子宫雌激素受体α(ERα)和雌激素受体相关受体α(ERRα)蛋白表达的影响。方法:将80只3月龄雌性SD大鼠按体重分层后随机分为假手术组和去卵巢组。去卵巢10周时,将去卵巢组大鼠按体重分层后又随机分为去卵巢组、振动组、跑台组、金雀异黄酮组、氯化锂组和雌激素组,并开始进行不同的干预处理。干预处理8周时,腹主动脉取血处死各组大鼠,用放射免疫方法检测血清E_2水平,用Western blot检测子宫ERα和ERRα蛋白表达水平的变化。结果:大鼠去卵巢后,血清E_2水平显著下降,经雌激素处理后,血清E_2水平显著回升,但经其他几种方法处理后均无显著变化。Western blot结果显示,大鼠去卵巢后,子宫ERα蛋白表达水平显著增加,经雌激素、跑台运动、全身垂直振动和氯化锂处理后,子宫ERα蛋白表达水平显著下降,而经金雀异黄酮处理后,子宫ERα蛋白表达水平无显著变化。大鼠去卵巢后,子宫ERRα蛋白表达水平显著下降,经雌激素和金雀异黄酮干预后,子宫ERR-α表达水平显著增加,而经跑台运动、全身振动和氯化锂干预后,子宫ERR-α表达水平却显著下降。结论:跑台运动和全身垂直振动能抑制去卵巢骨质疏松大鼠子宫ERα和ERRα蛋白的表达,氯化锂能抑制ERα蛋白的表达,但促进ERRα蛋白的表达,金雀异黄酮能促进ERRα蛋白的表达,但对ERα蛋白的表达没有影响。     

免疫性炎症与前列腺体积及雄激素受体表达的关系

目的：探讨免疫性炎症与前列腺体积及雄激素受体表达的关系。方法：回顾性的分析了105例手术获得的前列腺标本。使用免疫组化的方法研究前列腺纽织中CD4、CD8和雄激素受体表达情况。如果CD4或CD8阳性则敕定义为免疫性炎症,并进一步探讨了免疫性炎症与前列腺体积、雄激素受体表达之间的关系。结果：在前列腺增生组织中,CD4、CD8和雄激素受体表达的阳性率分别为20（19．0％）,21（20．0％）和48（45．7％）。在免疫性炎症组,前列腺体积为67．0±26．3ml,而在非免疫性炎症组,为54．0±24．2ml,有显著性差别。免疫性炎症组雄激素受体表达的阳性率为65．6％,而非免疫性炎症组雄激素受体表达的阳性率为37．0％（X2=7．35,P〈0．05）。结论：免疫性炎症与前列腺体积、雄激素受体表达明显相关。免疫性炎症可能导致前列腺增生进展,因此,抗炎治疗可能是治疗前列腺增生的一个新的靶点。     

卵巢切除对大鼠子宫阴道雌激素受体亚型表达的影响

目的 通过观察雌激素受体亚型在去势大鼠子宫和阴道的表达, 研究卵巢切除对大鼠子宫、阴道的影响机制.方法 60只成年SD雌性大鼠随机分为正常组、假手术组、去势组,每组20只.8周后处死大鼠,分离摘取子宫、阴道,进行ERα、ERβ免疫组织化学染色和mRNA半定量RT-PCR检测.结果 ERα在各组子宫内膜上皮细胞、间质细胞及平滑肌细胞中均有表达,以内膜腔上皮和腺上皮细胞表达最强;ERα在各组阴道粘膜上皮细胞、间质细胞及平滑肌细胞中均有表达,以粘膜上皮细胞中表达最强.去势组子宫、阴道ERα表达水平较其它两组明显降低.ERβ主要在正常组和假手术组子宫内膜腔上皮细胞、腺上皮细胞和阴道粘膜上皮细胞中有表达,但较ERα表达弱.ERβ在去势大鼠子宫和阴道中未见明显表达.正常组和假手术组子宫、阴道雌激素受体亚型的表达强度和分布无明显差异.结论 卵巢切除后大鼠子宫、阴道ER亚型表达明显降低,尤其以ERβ表达下调明显.     

Cox-2、P504s、CK34βE12和P63在前列腺腺癌中的表达及其临床意义

目的：研究Cox-2、P504s、CK34βE12和P63在前列腺腺癌组织中的表达及其临床病理学意义。方法：用免疫组织化学法检测134例正常前列腺、良性前列腺增生和前列腺腺癌石蜡包埋组织中Cox-2、P504s、CK34βE12和P63的表达。结果：正常前列腺组织或良性前列腺增生组织未见或偶见P504s弱表达,但CK34βE12和P63均表达良好;前列腺腺癌组织中P504s表达良好,但CK34βE12和P63均表达消失,P504s表达阳性率为91．07％;与正常前列腺组和良性前列腺增生组相比,前列腺癌组的P504s阳性表达率存在显著性差异（p=0．001）。COX-2在正常的前列腺组织几乎不表达,而良性前列腺增生组织及前列腺腺癌组织均可见阳性表达,阳性率分别为4．76％和80．36％;COX．2阳性表达率在正常前列腺组或良性前列腺增生组和前列腺腺癌组间有显著性差异（p=0．0027）。COX-2与P504s表达存在相关性（r=0．377,P=0．039）;COX-2的表达与年龄、临床分期、分化程度、有无远处转移等临床病理特征间无明显相关关系。结论：联合P504s、P63、CK3413E12和COX-2免疫组化检测可提高前列腺腺癌病理诊断的准确率。     

无蹼壁虎心脏雌激素受体免疫组织化学研究

目的：观察雌激素受体（ERα和ERβ）在非繁殖期成年无蹼壁虎（Gekko swinhonis）心脏的表达并比较性别差异。方法：应用显示雌激素受体的免疫组织化学方法。结果：ERα和ERβ阳性反应均见于无蹼壁虎心肌细胞和成纤维细胞,且受体的表达无性别差异;ERα表达存在明显的心房（11．56±1．67）心室（6．68±1．88）差异（P〈0．01）。结论：雌激素可能是通过ERα主要作用于心房,通过ERβ调节整个心脏的机能;雌激素受体含量与性别无关,可能与生理条件下受体的活性及功能状态有关。     

甲基苯丙胺中毒大鼠纹状体COX-2、PGE2、EP2受体及小胶质细胞表达的研究

目的：通过研究COX-2、PGE2、EP2受体及小胶质细胞在甲基苯丙胺中毒大鼠纹状体内的表达变化探讨甲基苯丙胺中毒大鼠纹状体中COX-2／PGE2系统与小胶质细胞活化之间的关系。方法：将40只健康成年雄性SD大鼠,随机分成对照组10只和实验组30只（实验组分成三个亚组,分为末次给药后1天组、2天组和3天组,n=10）。实验组给予10mg／kg的MA腹腔注射,对照组给予同样剂量的生理盐水,每天注射两次,注射时间为8：00、20：00,连续注射4天。分别于末次给药后的第1天、第2天、第3天处杀。用免疫组化技术对中毒大鼠纹状体（CPU）中COX-2、EP2受体及Iba1（钙离子接头蛋白,小胶质细胞内一种特异性标记物）的表达进行检测,并进行图像分析。另外,取大鼠的纹状体运用酶联免疫法检测PGE2的含量。结果：COX-2、PGE2、EP2受体及小胶质细胞在各组均有表达。与对照组相比,实验组中：COX-2、PGE2、EP2受体的1天组表达均不同程度下降;2天组中COX-2表达水平大幅度上升,PGE2、EP2受体表达仍低于正常水平;3天组COX-2表达水平继续升高,而PGE2、EP2受体表达趋于正常组水平。而小胶质细胞表达水平则是三个实验组均高于正常组,且3天组高于2天组,2天组高于l天组。对照组与实验组有显著性差异（P〈0．05）。结论：COX-2／PGE2系统与甲基苯丙胺中毒大鼠纹状体内小胶质细胞活化无明显相关性;COX-2与甲基苯丙胺的神经毒性有关。     

猪雌激素受体关联受体a基因的克隆、表达及其对脂肪细胞脂质聚集的影响

雌激素受体关联受体α(Estrogen-related receptor α,ERRα)是调控机体能量代谢的关键转录调控因子,其在白色脂肪组织中的作用尚不清楚。本研究旨在通过touch down-PCR方法克隆猪ERRα基因的ORF序列;通过Western blotting和细胞免疫荧光染色法分析其在猪各组织及成熟脂肪细胞中的表达模式;利用ERRα特异性抑制剂XCT790处理原代培养的猪成熟脂肪细胞,探讨其对成熟脂肪细胞甘油三酯聚集的影响。结果显示,所克隆的猪ERRα基因ORF序列长1269bp(GenBank Accession No.FJ446485,尚未公布),编码422个氨基酸,其核苷酸和氨基酸序列与其他物种高度同源;ERRα蛋白高表达于猪白色脂肪组织(White adipose tissue,WAT)、肾脏以及心脏中,在脾脏中表达量较低;细胞免疫荧光化学染色显示,ERRα蛋白广泛分布于脂肪细胞的细胞核和胞浆中;XCT790在10μmol/L浓度时显著抑制了ERRα蛋白的表达和成熟脂肪细胞中甘油三酯的聚集。本研究将为有效调控体脂沉积提供新的靶点和理论参考。     

EGR1促进前列腺增生上皮细胞系 BPH-1的增殖

早期生长反应基因1（early growth response gene 1, EGR1）属于锌指结构的转录因子,表达受多种因素调节,其蛋白至少参与对30种以上靶基因的调控. EGR1在前列腺癌中作为癌基因其表达量与肿瘤的恶性程度成正比,而在良性前列腺增生（benign prostatic hyperplasia, BPH）中其机制和功能尚不明确. EGR1在大鼠和人BPH组织中表达升高, 提示EGR1在BPH进程中发挥重要作用. 通过构建EGR1表达载体,以及EGR1稳定转染的良性前列腺增生上皮细胞系BPH-1,可见过表达EGR1的BPH-1细胞增殖能力升高. 通过转染siRNA将EGR1表达抑制,BPH 1细胞的增殖水平下降. 雌激素在BPH疾病进程中发挥重要作用, 在BPH 1细胞中,雌二醇 (estradiol, E2) 能促进EGR1的核迁移,从而激活其转录活性. 在EGR1稳定转染的BPH 1细胞系中胰岛素样生长因子2 (insulin like growth factor 2, IGF2) 的表达上调,表明EGR1可以调控IGF2的表达. 同时发现,E2可上调BPH-1细胞中 IGF2的表达,而将EGR1敲除后上调效果消失, 说明E2通过EGR1来调节IGF2的表达. E2对EGR1及其靶基因的调节可能是E2参与影响BPH的重要环节. 本文为进一步研究E2和EGR1在BPH中作用奠定了基础.