大鼠急性肾缺血再灌注损伤模型的建立与评估

目的：对现有的经腹部切口建立急性肾缺血再灌注损伤动物模型进行改良,探索建立急性肾缺血再灌注损伤模型的新方法。方法：实验组大鼠16例,经背部切口进入腹膜后间隙,游离钳夹双侧肾动脉45min后开放血流,建立急性肾缺血再灌注损伤模型;伪手术组8例,不夹闭肾动脉,余步骤与实验组相同;对照组8例无处理。术后通过建模成功率、组织病理检查、血肌酐和血尿素氮及氧化应激水平对模型进行评估。结果：实验组15只成功建立急性肾缺血再灌注损伤模型。术后1天病理检查显示实验组肾组织出现广泛损伤,术后实验组’肾小管坏死评分、肾MDA水平、血肌酐及血尿素氮值明显高于对照组（P〈0．05）。结论：经背部切口钳夹双侧肾动脉可建立稳定的大鼠急性肾缺血再灌注损伤模型。该造模方法简便易行,成功率高,且具备手术切口小、手术时间短及并发症少的优点,建立的模型适合于急性肾损伤的研究。     

探寻肝再生磷酸酶3在膀胱癌细胞T24中的作用

目的：已经有研究证明肝再生磷酸酶3（PhosphataseofRegeneratingLiver-3,PRL-3）在消化道肿瘤的发生发展过程中起到重要作用,但其在膀胱癌中发挥何种作用尚不清楚,本次研究主要探寻PRL-3在膀胱癌细胞T24中作用,以求为膀胱癌的治疗提供新思路。方法：采用siRNA干涉的方法下调T24中PRL-3蛋白表达水平,通过westernblot方法检测干涉效果,绘制细胞生长曲线、构建裸鼠种植瘤模型,检测PRL-3下调对细胞体外及体内增殖的影响。结果：我们所设计的siRNA能够下调PRL-3在A498细胞中的表达（F=7．26,P〈0．05）,细胞生长曲线显示下调PRL-3能够抑制细胞的增殖,这种作用从干涉后的第60h开始,随时间增加作用愈加明显（F≥8．35,P〈0．05）;动物实验表明,siRNA下调PRL-3能够抑制T24细胞在活体内的增殖,从干涉后第21天开始这种作用开始体现出来（F≥10．46,P〈0．05）,并且干涉组的肿瘤肿瘤明显低于两个对照组（F=13．63,P〈0．05）。结论：我们构建的siRNA能够在T24细胞中实现对PRL．3蛋白的下调,siRNA介导的PRL-3蛋白下调能够明显抑制T24细胞在活体外及活体内的增殖,这初步证明PRL-3在膀胱癌中发挥重要的作用。随着我们对PRL-3分子进一步深入的了解,揭示其发挥作用的具体机制,PRL-3很可能成为膀胱癌基因治疗的新靶点。     

金匮肾气丸和男宝胶囊对肾阳虚证雄性大鼠生殖能力影响的干预研究

目的:研究金匮肾气丸和男宝胶囊对肾阳虚证雄性大鼠生殖能力的影响及作用机理.方法:用成年雄性SD大鼠80只随机分成4组:空白对照组(正常组)、金匮肾气丸组、男宝胶囊组、模型组.除正常组外,其他组大鼠用氢化可的松注射液制造肾阳虚模型.正常组和模型组用等体积蒸馏水灌胃,治疗组用相应剂量的药物灌胃,持续给药30d.检测各组大鼠左侧睾丸、脾脏、胸腺质量,测血清睾丸酮(T)、促黄体生成激素(LH)、促卵泡生成激素(FSH)水平,精子密度、精子活率改变情况.结果:模型组左侧睾丸、脾脏、胸腺质量低于正常组、金匮肾气丸组和男宝胶囊组(P.∞.05 o模型组血清T、LH、FSH水平低于正常组、金匮肾气丸组和男宝胶囊组(P＜0.05).模型组精子密度、精子活率低于正常组、金匮肾气丸组和男宝胶囊组(P＜0.05).结论:金匮肾气丸和男宝胶囊对肾阳虚证雄性大鼠生殖能力有较好的治疗作用.     

一株新的人肾癌原代细胞系的建立及其生物学特性鉴定

目的:取肾癌病人标本建立一株新的人肾癌细胞系,初步对该细胞系进行鉴定,为进一步的肾癌基础研究提供实验模型.方法:2008-2009年间共采集20例肾癌新鲜手术标本,于手术后1 h内将每例标本切取四块0.5cm× 0.5 cm× 0.5 cm组织块,分别包埋于2只裸鼠的右后肢皮下及背部皮下,连续传代3次,取移植瘤体外培养,记录细胞株的生长曲线,测定细胞集落形成率,对细胞进行DNA含量测定,进行染色体分析及病理学检查.结果:其中1只裸鼠皮下移植瘤生长,继续传代,肿瘤生长速度明显加快.取移植瘤标本体外培养得到肾癌细胞系XJG-9201.形态结构,分化程度与原发瘤一致,染色体众数为65.细胞群体倍增时间为38.2h,细胞周期分析G1期62.7%,G2期11.2%,S1期25.3%,集落形成率为70%.结论:肾癌细胞系XJG-9201与原发癌保持相同的生物学特性,体外连续传代1年以上传115代.细胞形态不变,生长周期恒定,已成为一个稳定的细胞系.     

Cox-2、P504s、CK3413E12和P63在前列腺腺癌中的表达及其临床意义

目的:研究Cox-2、P504s、CK34βE12和P63在前列腺腺癌组织中的表达及其临床病理学意义.方法:用免疫组织化学法检测134例正常前列腺、良性前列腺增生和前列腺腺癌石蜡包埋组织中Cox-2、P504s、CK34βE12和P63的表达.结果:正常前列腺组织或良性前列腺增生组织未见或偶见P504s弱表达,但CK34βE12和P63均表达良好;前列腺腺癌组织中P504s表达良好,但CK34βE12和P63均表达消失,P504s表达阳性率为91.07%;与正常前列腺组和良性前列腺增生组相比.前列腺癌组的P504s阳性表达率存在显著性差异(p=0.001).COX-2在正常的前列腺组织几乎不表达,而良性前列腺增生组织及前列腺腺癌组织均可见阳性表达,阳性率分别为4.76%和80.36%;COX-2阳性表达率在正常前列腺组或良性前列腺增生组和前列腺腺癌组间有显著性差异(p=0.0027).COX-2与P504s表达存在相关性(r=0.377,P=0.039);COX-2的表达与年龄、临床分期、分化程度、有无远处转移等临床病理特征间无明显相关关系.结论:联合P504s、P63、CK34βE12和COX-2免疫组化检测可提高前列腺腺癌病理诊断的准确率.     

Cox-2、P504s、CK34βE12和P63在前列腺腺癌中的表达及其临床意义

目的：研究Cox-2、P504s、CK34βE12和P63在前列腺腺癌组织中的表达及其临床病理学意义。方法：用免疫组织化学法检测134例正常前列腺、良性前列腺增生和前列腺腺癌石蜡包埋组织中Cox-2、P504s、CK34βE12和P63的表达。结果：正常前列腺组织或良性前列腺增生组织未见或偶见P504s弱表达,但CK34βE12和P63均表达良好;前列腺腺癌组织中P504s表达良好,但CK34βE12和P63均表达消失,P504s表达阳性率为91．07％;与正常前列腺组和良性前列腺增生组相比,前列腺癌组的P504s阳性表达率存在显著性差异（p=0．001）。COX-2在正常的前列腺组织几乎不表达,而良性前列腺增生组织及前列腺腺癌组织均可见阳性表达,阳性率分别为4．76％和80．36％;COX．2阳性表达率在正常前列腺组或良性前列腺增生组和前列腺腺癌组间有显著性差异（p=0．0027）。COX-2与P504s表达存在相关性（r=0．377,P=0．039）;COX-2的表达与年龄、临床分期、分化程度、有无远处转移等临床病理特征间无明显相关关系。结论：联合P504s、P63、CK3413E12和COX-2免疫组化检测可提高前列腺腺癌病理诊断的准确率。     

L-左旋肌肽诱导人肾癌Caki-2细胞凋亡的体外研究

目的:研究L-左旋肌肽诱导人肾癌Caki-2细胞凋亡的作用及可能机制。方法:常规培养肾癌Caki-2细胞,以1×10~4/mL的密度接种,取对数生长期Caki-2细胞分为L-左旋肌肽5、20、50 mM处理组和空白对照组,分别采用L-左旋肌肽5、20、50 mM和生理盐水处理24、48h后,采用MTT法检测各组Caki-2细胞的增殖情况,采用流式细胞法检测各组细胞周期和细胞凋亡情况,采用Western blot方法检测各组Caki-2细胞caspase-3、Bcl-2及HIF-1α蛋白的表达情况。结果:与空白对照组相比,L-左旋肌肽5、20、50 mM处理组在24 h和48 h的细胞存活率均显著降低(P0.05),且其对Caki-2细胞的生长抑制作用呈现明显的时间-剂量依赖关系,其中50 mM L-左旋肌肽处理Caki-2细胞48 h后,细胞存活率最低。L-左旋肌肽5、20、50 mM处理组在作用48 h后,Caki-2细胞随着L-左旋肌肽作用浓度的增加,Bcl-2和HIF-1α的蛋白表达水平依次降低(P0.05),而caspase-3蛋白表达水平逐次提高(P0.05)。结论:L-左旋肌肽在体外可抑制人肾癌Caki-2细胞的增殖,并诱导人肾癌Caki-2细胞的凋亡,其作用机制可能与抑制HIF-1α表达及激活caspase-3表达相关。     

BK通道对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的作用及机制

目的:探讨缺血再灌注损伤早期肾脏皮质内大电导钙依赖性钾通道(BK)通道的表达及意义。方法:建立成年SD大鼠肾脏急性缺血再灌注损伤模型,快速收集24小时缺血大鼠与对照大鼠血和损伤侧肾脏皮质标本,使用ELISA方法检测血肌酐和尿素氮含量,实时荧光定量RT-PCR和蛋白免疫印迹方法检测肾脏组织中BK通道α亚基的m RNA表达水平和蛋白表达水平。结果:(1)急性缺血再灌注大鼠损伤侧肾脏皮质BK通道α亚基m RNA水平较对照大鼠同侧肾脏皮质的表达明显降低(P0.01)。(2)急性缺血再灌注大鼠损伤侧肾脏皮质BK通道α亚基蛋白水平较对照大鼠同侧肾脏皮质的表达也明显降低(P0.05)。(3)NS1619预处理缺血再灌注大鼠血尿素氮和血肌酐含量显著降低(P0.05)。结论:BK通道表达和功能的改变是参与大鼠肾脏缺血再灌注损伤的重要机制。     

近红外荧光染料IR-783在膀胱癌中的成像研究

目的:观察研究近红外荧光染料IR-783在膀胱癌中的特异性成像。方法:通过染料与膀胱癌细胞及正常细胞共孵育,观察近红外荧光染料IR-783是否能够实现膀胱癌细胞的选择性成像。利用细胞器示踪剂观察近红外荧光染料在膀胱癌细胞内的共定位;使用IR-783检测循环血液中及尿液中的膀胱癌细胞。结果:近红外荧光染料IR-783可被膀胱癌细胞选择性摄取。IR-783可选择性聚集在膜性细胞器如线粒体和溶酶体内,这种选择性聚集作用使IR-783可以保持较长的染色效果。近红外染料可以检测到血液或尿液极少量的膀胱癌细胞。结论:近红外荧光染料IR-783能够被膀胱癌细胞特异性吸收,可用于血液和尿液中膀胱肿瘤细胞的特异性诊断,具有重要的临床应用前景。     

肾透明细胞癌MAPK9的表达与索拉非尼疗效的关系

目的:探讨肾透明细胞癌组织中MAPK9表达及其与肾透明细胞癌主要临床病理特征之间的关系,分析MAPK9对索拉非尼靶向治疗疗效的关系。方法:回顾分析2006年5月-2013年10月经病理确诊的32例肾透明细胞癌转移患者的MAPK9的表达情况。所有患者术后均服用索拉菲尼并随访;同时选取10例距肿瘤3 cm癌旁正常肾组织作为对照。对比分析肾透明细胞癌患者与对照组MAPK9的阳性表达率,分析MAPK9阳性表达与疗效的相关性,并分析MAPK9阳性表达与生存率之间的关系。结果:肾透明细胞癌组MAPK9阳性表达21例(65.6%),较正常对照组2例(20.0%)有显著性差异(P0.01)。TNMⅠ~Ⅱ期MAPK9阳性表达12例(85.7%),较TNMⅢ~Ⅳ期10例(55.6%)有显著性差异(P0.05);核分级1~2级MAPK9阳性表达18例(81.8%),较3~4级4例(40.0%)有显著性差异(P0.05)。MAPK9阳性表达患者与阴性表达患者疗效有显著性差异(P0.05)。MAPK9阳性患者PFS为(646±103)d,较阴性患者PFS为(502±89)d,有显著性差异(P0.05)。MAPK9阳性患者OS为(866±75)d,较阴性患者OS为(657±62)d,有显著性差异(P0.01)。结论:MAPK9在肾透明细胞癌中高表达,与肿瘤的临床TNM分期、病理分级相关。MAPK9阳性表达患者其靶向治疗疗效越好,提示MAPK9可能是一个预测索拉菲尼靶向治疗肾透明细胞癌疗效的潜在因子。