血管内皮细胞生长因子受体(KDR)的分子克隆与原核表达

血管内皮细胞生长因子（ＶＥＧＦ）是特异的血管内皮细胞促分裂素,它主要通过相应受体（ＫＤＲ）刺激血管内皮细胞增殖．ＶＥＧＦ及其受体在肿瘤血管形成中起重要作用．通过逆转录及多聚酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）成功地从人脐静脉内皮细胞扩增出编码ＫＤＲ胞外ＶＥＧＦ结合区的ＤＮＡ片段,将该片段克隆在谷胱甘肽转移酶（ＧＳＴ）融合蛋白表达载体ｐＧＥＸ２Ｔ中,获得在大肠杆菌Ｊｍ１０９的稳定表达．表达的不溶性融合蛋白可经碱变性法大量提取,为后续的研究工作奠定了基础．     

葡萄糖异构酶基因工程菌的改造初探

葡萄糖异构酶（ｇｌｕｃｏｓｅｉｓｏｍｅｒａｓｅ,ＧＩ）是使用量最大的工业酶之一,可用于高果糖浆的生产,也可以用含木聚糖物质及废料为底物发酵生产乙醇,具有重要的经济价值．本文选择了表达载体ｐＢＶ２２０［１］,利用ＰＣＲ方法删除了原表达质粒ｐＴＫＤＧＩ１中ＧＩ结构基因５′端多余的核苷酸,并添加了合适的酶切位点,重新构建了能在大肠杆菌ＤＨ５α中高效表达ＧＩＧ１３８Ｐ的表达质粒ｐＢＺＧＩ１．传代实验表明,新表达体系的稳定性明显优于原表达体系．粗酶液经热处理、ＤＥＡＥＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ和分子筛Ｓｅ…     

猴免疫缺陷病毒SIV核心蛋白基因在大肠杆菌中表达的研究

应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）,直接从ＳＩＶ感染的猴艾滋病（ＳＡＩＤＳ）模型猴的外周血淋巴细胞总ＤＮＡ中扩增出７６７ｂｐ的ＳＩＶ核心蛋白Ｐ２７基因片段。扩增产物经ＥｃｏＲＩ及ＳａｌＩ双酶切后,克隆入相同酶切的表达质粒ｐＢＶ２２０中,获得含ＳＩＶ核心蛋白基因片段的重组质粒ｐＢＶＳＧ,并进行ＤＮＡ序列分析。用该重组质粒转化大肠杆菌ＤＨ５ａ经筛选、增殖及４２℃温度诱导,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明外源基因表达蛋白含量占菌体总蛋白１４．５％,Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ证实表达产物能被ＳＩＶＰ２７单克隆抗体及ＳＡＩＤＳ模型猴血清中特异性抗体识别。     

白介素10的临床应用研究

１９８９年,Ｆｉｏｒｅｎｔｉｏ等发现Ｔｈ２细胞分泌一种能抑制Ｔｈ１细胞功能的未知因子,称为细胞因子合成抑制因子（ｃｙｔｏｋｉｎｅｓｙｎｔｈｅ－ｓｉｓｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｆａｃｔｏｒ,ＣＳＩＦ）。Ｍｏｏｒｅ等发现ＣＳＩＦ与ＥＢ病毒（ＥＢＶ）中ＢＣＲＦ－...     

血管内皮细胞生长因子及其受体的分子生物学研究进展

血管内皮细胞生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ）是最直接的血管内皮细胞促分裂素,它通过其受体（ＶＥＧＦＲ）介导其活性,不同ＶＥＧＦ剪接体与不同类型的ＶＥＧＦＲ结合,通过胞内信号传导,发挥不同的生物学效应。本总结了ＶＥＧＦ及其受体的结构、特点、分类、分子生物学特征、二的连续及由ＶＥＧＦ诱导的胞内信号传导作用,并简单讨论了它们可能的     

粘虫核型多角体病毒凋亡抑制基因的定位,序列和启动子结构

以ＡｃＮＰＶ凋亡抑制基因ｐ３５为探针,与ＬｓＮＰＶＤＮＡ的限制性片段和ＬｓＮＰＶＤＮＡＥｃｏＲＶ片段杂交,发现ＥｃｏＲＶ５．５ｋｂ片段有强烈的杂交信号。将此片段亚克隆后,测定了１２４４ｂｐ序列,发现一个完整的ＯＲＦ,推导的３０２个氨基酸与ＡｃＮＰＶｐ３５蛋白有７０．４％的氨基酸同源性,证明所测ＯＲＦ为ＬｓＮＰＶ的ｐ３５基因。结构分析发现其５′端有早期基因启动子元件ＧＣ、ＡＣＧＴ和ＴＡＴＡｂｏｘ。有２２ｂｐ的顺向重复序列,包括由两个重叠的ＴＡＴＡｂｏｘ和上下游两个ＡＣＧＴｍｏｔｉｆ组成的两套启动子元件,这些结构特征与ＡｃＮＰＶ的凋亡抑制基因十分相似。     

人主动脉硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对培养人的脐静脉内皮细胞生长的影响

为探讨硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（ＨＳＰＧ）对内皮细胞生长的作用,用解聚提取及离子交换柱层析法分离出人主动脉ＨＳＰＧ,用倒置显微镜、细胞计数、及￣３Ｎ－ＴｄＲ参入观察其对培养的第一代人脐静脉内皮细胞（ｈＵＶＦＣ）生长的影响。结果发现：（１）倒置显微镜下观察,加入ＨＳＰＧ（１．７０μｇ已糖醛酸／ｍｌ）的ｈＵＶＥＣ生长密度高于对照组（未加ＨＳＰＧ）．（２）随着培养时间增加（２４,４８及７２ｈ）．根据细胞计数计算出同一剂量的ＨＳＰＧ（１７．０μｇ已糖醛酸／ｍｌ）对ｈＵＶＥＣ的促增殖％增高（分别为１４％,３０％及３７％）。（３）随着加入ＨＳＰＧ浓度的升高（４．３,８．５及１７．０μｇ已糖醛酸／ｍｌ．培养７２ｈ）．根据￣３Ｈ－ＴｄＲ参入计算出ＨＳＰＧ对ｈＵＶＥＣ的促增殖％亦增高（分别为４９％,７１％及９８％）。故人主动脉ＨＳＰＧ对培养的人脐静脉内皮细胞有促增殖作用。     

普通小麦—提莫菲维小麦白粉病抗性渐渗系中渗入片段的准确鉴定

用小麦（ Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ａｅｓｔｉｖｕｍ Ｌ．） 第二部分同源群的３６ 个探针,对携带抗白粉病（ Ｅｒｙｓｉｐｈｅ ｇｒａｍｉｎｉｓｆ．ｓｐ ｔｒｉｔｉｃｉ） 基因Ｐｍ６ 的普通小麦提莫菲维小麦（ Ｔ．ｔｉｍｏｐｈｅｅｖｉ Ｚｈｕｋ ．） 渐渗系进行检测,通过这些渐渗系与受体亲本“Ｐｒｉｎｓ”之间杂交谱带多态性的比较,发现所测出多态性标记位点均位于这５ 个渐渗系的２Ｂ 染色体上,但其渗入片段的位置与大小有明显区别。ＩＧＶ１＿４５６ 和ＩＧＶ１＿４５８ 被鉴定为２Ｂ 染色体从短臂标记Ｘｃｄｏ４０５ 到长臂标记Ｘｂｃｄ１３５ 之间的区域已被提莫菲维２Ｇ 染色体区段所代替;而ＩＧＶ１＿４６３ 则在２Ｂ 染色体长臂Ｘｂｃｄ３０７ 到Ｘｃｄｏ６７８ 标记之间的区域被提莫菲维渗入成分所代替;ＩＧＶ１＿４６４ 、ＩＧＶ１＿４６５ ２ＢＬ染色体上的渗入片段更小,即ＩＧＶ１＿４６４ 在２ＢＬ染色体上标记Ｘｐｓｒ９３４ 与Ｘｂｃｄ１３５ 之间的区域有提莫菲维２Ｇ 染色质成分渗入,ＩＧＶ１＿４６５ 仅在Ｘｂｃｄ１３５ 附近有更小的外源成分渗入。根据５个渐渗系渗入成分重叠区段比较可把Ｐｍ６ 定位于２ＢＬ染色体上Ｘｂｃｄ１３５ ２ＢＬ标记的邻近区域内     

血管内皮生长因子C的研究进展

血管内皮生长因子Ｃ（ＶＥＧＦ－Ｃ）是一种特异性血管、淋巴管内皮细胞调节因子,其结构与ＶＥＧＦ具有同源性。ＶＥＧＦ－Ｃ通过受体ＣＥＧＦＲ－２和ＶＥＧＦＲ－３发挥作用,其ｍＲＮＡ的表达具有一定的组织特点,并受多种因素的调节。ＶＥＧＦ－Ｃ对于胚胎发育,细胞分化、活体内外血管、淋巴管内皮细胞均有重要的调节作用。     

转译优化对EPO基因在COS7细胞中表达的影响

利用ＣＯＳ７细胞暂时表达系统,研究转译起始序列对ＥＰＯ－ｃＤＮＡ表达的影响。通过ＤＮＡ重组技术,构建了原ＥＰＯ－ｃＤＮＡ表达载体ｐＣＳＶ－ＥＰＯ（１）,其转译起始序列为５＇ＡＡＴＴＣＡＴＧＧ３＇。同时通过定点突变技术,将起始序列改变成５＇ＣＣＡＣＣＡＴＧＧ３＇,而构建了另一表达载体ＰＣＳＶ－ＥＰＯ（２）。后经序列分析证明无误后和前均通过ＤＥＡＥ－ｄｅｘｔｒａｎ法转染ＣＯＳ７细胞上清,测定结果为     

大鼠运动性肥大心脏心肌血管内皮生长因子及其基因表达 …

目的和方法：血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈＶＥＧＦ）是新近确定的一种特异作用血管内皮细胞的活性肽。最近发现正常心肌细胞可表达ＶＥＧＦ高血压肥大心脏恼肌ＶＥＧＦ及其因表达增强,但对运动性心肌肥大时的变化尚不清楚,本实验采用免疫组分和分子杂交方法,对游泳运动１０周大鼠稳定期肥大心脏心肌ＶＥＧＦ及其基因表达进行了研究,结果：ＷｉｓｔａｒＫｙｏｔｏ（ＷＫＹ）大鼠,自发     

苏云金杆菌以色列亚种cryIVB基因在E.coli中的高表达

韭菜迟眼蕈蚊（Ｂｒａｄｙｓｉａｏｄｏｒｉｐｈａｇａ）幼虫以取食根部危害韭菜的生长．为了研究有效的生防制剂,采用ＤＮＡ聚合酶链式反应方法,从苏云金杆菌以色列亚种（Ｂｔｉ）得到３．５ｋｂ的开放阅读框架（ＯＲＦ）,其包括Ｂｔｉ杀虫蛋白基因ｃｒｙＩＶＢ的结构基因和部分上游启动区．将结构基因亚克隆到高表达载体ｐＱＥ５２中,构建了高表达质粒ｐＱＥ５２Ｂ．在Ｅ．ｃｏｌｉＳＧ１３００９（ｐＲＥＰ４）中,经ＩＰＴＧ诱导,１３０ｋＤ的蛋白表达量约占细胞总蛋白的７．９％,其对韭菜迟眼蕈蚊三龄幼虫具有较强的毒杀作用．为进一步利用ｃｒｙＩＶＢ基因,构建生防工程菌株打下了基础     

戊型肝炎病人血清抗—HEV IgG与IgM和HEV RNA的动态变化

利用酶联免疫试验（ＥＩＡ）及逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）,检测了２１０份急性非甲非乙非丙肝炎患者血清和４０例戊型肝炎（戊肝）病人系列血清。在急性非甲非乙非丙肝炎血清中,抗－ＨＥＶ ＩｇＧ、抗－ＨＥＶ ＩｇＭ和ＨＥＶ ＲＮＡ阳性率分别为６２．８６％、４５．２３％和４０．４８％。在戊肝系列血清检测中,抗－ＨＥＶ ＩｇＧ阳性率发病１个月内为９２．５％,发病２￣６个月１００％,１２个月９４．７％,     

血管内皮细胞生长因子受体Flt—1胞外区基因的克隆及其在中国仓？…

朋原代培养的人脐静脉血管内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）提取细胞总ＲＮＡ,采用逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）方法得到ＶＥＧＦ受体Ｆｌｔ－１胞外区前３个ＩｇＧ样区域ｃＤＮＡ片段（Ｆｌｔ－１ｎ３）。将获得的受体基因克隆到真核表达载体ｐｃＤ－ＮＡ３．１中,得到重组质粒ｐｃＤＮＡ３．１／Ｆｌｔ－１ｎ３,通过南体转染方法将其转入中国仓鼠卵巢细胞（ＣＨＯ）,用Ｇ４１８筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞砍隆。经固相结合实验筛选     

鸡传染性支气管炎病毒S1基因在昆虫细胞中表达水平初探

将含有鸡传染性支气管炎病毒 Ｓ１ 基因ｃ Ｄ Ｎ Ａ 的重组转移质粒ｐ Ｓ Ｘ Ｉ Ｖ Ｖ Ｉ＋ Ｘ３ Ｓ１ ． Ｈｏｌｔｅ 和ｐ Ｓ Ｘ Ｉ Ｖ Ｖ Ｉ＋ Ｘ３／４ Ｓ１ ． Ｈｏｌｔｅ 分别与粉纹夜蛾核型多角体病毒 Ｔｎ Ｎ Ｐ Ｖ Ｓ Ｖ Ｉ－ Ｇ Ｄ Ｎ Ａ（ Ｏ Ｃ Ｃ－ ,ｇａｌ＋ ） 共转染草地夜蛾（ Ｓｆ９） 细胞,经空斑纯化得到重组病毒 Ｔｎ Ｎ Ｐ Ｖ（ Ｘ３） Ｓ１ ． Ｈｏｌｔｅ Ｏ Ｃ Ｃ＋ 和 Ｔｎ Ｎ Ｐ Ｖ（ Ｘ３／４） Ｓ１ ． Ｈｏｌｔｅ Ｏ Ｃ Ｃ＋ 。将重组毒株分别感染 Ｔｎ５ Ｂ１ 细胞,并进行 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 与 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ 检测。结果表明, Ｔｎ Ｎ Ｐ Ｖ（ Ｘ３／４） Ｓ１ ． Ｈｏｌｔｅ Ｏ Ｃ Ｃ＋ 在感染的细胞中高效表达了 Ｓ１ 蛋白, Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 凝胶薄层色谱分析结果显示,感染病毒后７２ ｈ Ｓ１ 蛋白的表达量占细胞内总蛋白量的３５ ．８ ％ ,而 Ｔｎ Ｎ Ｐ Ｖ（ Ｘ３） Ｓ１ ． Ｈｏｌｔｅ Ｏ Ｃ Ｃ＋ 感染的细胞内检测不出 Ｓ１ 蛋白。经分析认为这一差异主要来自 Ｓ１ 基因翻译起始位点及其附近的周围环境。     

LIF基因转染的ES细胞生长与分化特性的研究

我们将人Ｄ型ＬＩＦｃＤＮＡ以正反两种方向分别克隆到载体ＰＫＣＲ３,并引入ｎｅｏ基因,构建成ｐＳＶＬＤ和ＰＳＶＬＤ质粒,按磷酸钙沉淀法分别转染ＥＳ－５胚胎干细胞,,经Ｇ４１８和没浓度ＬＩＥ条件培液共同筛选,,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分析以及ＥＳ－５细胞集落分化抑制能力测定,建立了过度表达分泌ＬＩＦ的ＥＳＬ（＋）细胞株和表达外源反义ＬＩＦＲＮＡ的ＥＳＬ（－）细胞株。我们发现,我们发现,ＥＳＬ     

侵染西番莲属(Passiflora)植物的五个黄瓜花叶病毒分离物的特性比较

从紫果西番莲（Ｐａｓｉｆｌｏｒａｅｄｕｌｉｓ）、杂交种西番莲（Ｐ．ｅｄｕｌｉｓＸＰ．ｅｄｕｌｉｓｖａｒ．ｆｌａｖｉｃａｒｐａ）、黄果西番莲（Ｐ．ｅｄｕｌｉｓｖａｒ．ｆｌａｖｉｃａｒｐａ）、转心莲（Ｐ．ｃａｅｒｕｌｅａ）及龙珠果（Ｐ．ｆｏｅｔｉｄａ）分离到的５个黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）分离物（ＰＥ、ＰＥ２、ＰＥｆ、ＰＣ、ＰＦ）所作的生物学性质、理化特性和血清学关系的比较研究结果表明,５个分离物在寄主反应及血清学性质上存在不同,而在病毒粒体形态、体外抗性、蚜虫传毒和病毒外壳蛋白分子量方面无明显差异。根据５个分离物的寄主反应和血清学关系,可将其区分为ＣＭＶ的两个亚组,其中ＰＥ、ＰＥ２、ＰＣ和ＰＦ属ＣＭＶ亚组Ｉ,ＰＥｆ属ＣＭＶ亚组Ｉ。     

低氧大鼠肺动脉内皮细胞VEGF变化与PKC活性关系的探讨

目的：探讨低氧培养大鼠肺动脉血管内皮细胞ＶＥＧＦ的表达变化与ＰＫＣ活性的关系。方法：培养大鼠肺动脉血管内皮细胞,观察低氧（１％Ｏ２）培养不同时间大鼠肺动脉血管内皮细胞浆、膜ＰＫＣ活性和培养液中ＶＥＧＦ水平变化;加入ＰＫＣ抑制剂（ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ）后,测定低氧、常氧培养不同时间二者的变化。结果：低氧时膜ＰＫＣ活性和培养液中ＶＥＧＦ水平明显升高（Ｐ＜０．０１）。而加入ＰＫＣ抑制剂后,常氧和低     

人主动脉硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对培养的人血管壁细胞生长的作用

通过培养的人主动脉平滑肌细胞（ｈＡＳＭＣ）及脐静脉内皮细胞（ｈＵＶＥＣ）,应用３Ｈ－ＴｄＲ参入、Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析、逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）、放射免疫分析（ＲＩＡ）、和紫外比色法等技术观察了人主动脉中硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（ＨＳＰＧ）对ｈＡＳＭＣ和ｈＵＶＥＣＤＮＡ合成的作用及对血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）、ＰＤＧＦ受体、转化生长因子β（ＴＧＦ－β）、内皮素－１（ＥＴ－１）或碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）基因表达和肾素－血管紧张系统（ＲＡＳ）的影响,结果显示,ＨＳＰＧ明显抑制培养的ｈＡＳＭＣ基础的ＤＮＡ合成（ｃｐｍ值为：１０３８５±３２６３ｖｓ,２５５４１±６４２１,Ｐ＜０．０１）及外源性ＰＤＧＦ诱导的ＤＮＡ合成（ｃｐｍ值为：９８７８±１９４７ｖｓ．１３４８１±４４ｌ０,Ｐ＜０．０５）;抑制ＰＤＧＦＡ链、ＴＧＦ－Ｂｐ和ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达,提高ＰＤＧＦａ和β受体ｍＲＮＡ的表达;显著降低ｈＡＳＭＣ培养液中血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）的浓度和血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）的活性,推测ＨＳＰＧ抑制ＰＤＧＦＡ链、ＴＧＦ－β及ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达,降低ＡＣＥ活性及ＡｎｇⅡ浓度是其抑制ｈＡＳＭＣ增殖的重要机     

双乙酰还原酶的分离纯化研究

比较了５种细菌、４种酵母菌和鸡肝中双乙酰还原酶含量,其中粪肠杆菌（Ｅｎｔｅｒｏ－ｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ）ＡＳ１．５９５中含量较高,为９．６ＩＵ／ｇ湿菌体。并对ＡＳ１．５９５菌酶和鸡肝酶进一步经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００和ＤＺＡＥ柱分离纯化,提纯倍数分别为４５、８９３,最后收率分别为１８．５％、５．１％。