溶血磷脂酸抗缺氧无血清诱导的大鼠骨髓间充质干细胞凋亡作用

在体外缺氧无血清条件下模拟心肌缺血微环境,研究溶血磷脂酸(LPA)对骨髓间充质干细胞(BMMSCs)的抗凋亡作用.应用Hoechst33342染色和膜联蛋白V/PI双染流式细胞术观察细胞凋亡,并利用Western印迹方法检测ERK1/2和Akt的磷酸化水平变化.结果表明缺氧无血清条件引起明显的细胞凋亡,LPA处理6 h和1 6 h 组细胞凋亡率较缺氧无血清组显著降低(P＜0.05),而1 h组细胞凋亡率与缺氧无血清组无显著性差异.LPA处理组(1 h,6h,1 6 h组)ERK1/2磷酸化水平较缺氧无血清组降低,Akt磷酸化水平较缺氧无血清组增高.在缺氧无血清环境中,LPA有利于增强BMMSCs的抗凋亡能力,提高BMMSCs存活率,为临床提高BMMSCs治疗缺血性心肌病的疗效提供理论依据.     

人主动脉壁硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对培养的人主动脉平滑肌细胞生长的影响

从动脉粥样硬化（ＡＳ）高（北京）、低（南宁）发区人正常胸主动脉内－中膜分离ＨＳＰＧ,观察其对体外培养的ＨＡＳＭＣ生长的影响,细胞计数、~３Ｈ－ＴｄＲ参入及形态观察均表明ＡＳ高、低发区人主动脉ＨＳＰＧ都能剂量依赖性地抑制ＨＡＳＭＣ增殖,但抑制百分数未见显著差异,结果提示,人动脉壁中ＨＳＰＧ的含量可能与ＡＳ发病有关．     

人主动脉硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对培养人的脐静脉内皮细胞生长的影响

为探讨硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（ＨＳＰＧ）对内皮细胞生长的作用,用解聚提取及离子交换柱层析法分离出人主动脉ＨＳＰＧ,用倒置显微镜、细胞计数、及￣３Ｎ－ＴｄＲ参入观察其对培养的第一代人脐静脉内皮细胞（ｈＵＶＦＣ）生长的影响。结果发现：（１）倒置显微镜下观察,加入ＨＳＰＧ（１．７０μｇ已糖醛酸／ｍｌ）的ｈＵＶＥＣ生长密度高于对照组（未加ＨＳＰＧ）．（２）随着培养时间增加（２４,４８及７２ｈ）．根据细胞计数计算出同一剂量的ＨＳＰＧ（１７．０μｇ已糖醛酸／ｍｌ）对ｈＵＶＥＣ的促增殖％增高（分别为１４％,３０％及３７％）。（３）随着加入ＨＳＰＧ浓度的升高（４．３,８．５及１７．０μｇ已糖醛酸／ｍｌ．培养７２ｈ）．根据￣３Ｈ－ＴｄＲ参入计算出ＨＳＰＧ对ｈＵＶＥＣ的促增殖％亦增高（分别为４９％,７１％及９８％）。故人主动脉ＨＳＰＧ对培养的人脐静脉内皮细胞有促增殖作用。     

人主动脉硫酸乙酰肝系蛋白聚糖对培养人的脐静脉内皮细胞生长…

为探讨硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（ＨＳＰＧ）对内皮细胞生长的作用,用解聚提取及墩子交换柱层析法分离出人主动脉ＨＳＰＧ,用倒置显微镜,细胞计数,及＾３Ｈ－ＴｄＲ参入观察其对培养的第一代人脐静脉内皮细胞（ｈＵＶＥＣ）生长的影响,结果表明,（１）倒置显微镜下观察,加入ＨＳＰＧ（１．７０μｇ己糖醛酸／ｍｌ）的ｈＵＶＥＣ生长密度高于对照组（未加ＨＳＰＧ）（２）随着培养时间增加（２４,４８及７２ｈ）根据细胞计数计算     

人主动脉壁硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对培养的人主动脉平滑机细胞合成蛋白聚糖的影响

从人正常胸主动脉分离硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（ＨＳＰＧ）,观察其对体外培养的人主动脉平滑肌细胞（ＨＡＳＭＣ）合成ＰＧ的影响。ＨＡＳＭＣ在不加（对照）或加ＨＳＰＧ（１９μｇ醛酸／ｍｌ）的￣（３５）Ｓ－硫酸钠培养液中培养,以标记ＰＧ。继之,培养液及细胞层的４ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍提取液中的ＰＧｓ经离子交换及凝胶过滤柱层析分离,发现加ＨＳＰＧ后,培养液中的ＨＳＰＧ,硫酸软骨素ＰＧ（ＣＳＰＧ）及硫酸皮肤素－硫酸软骨素ＰＧ（ＤＳＣＳＰＧ）均明显增高,而细胞层中仅ＨＳＰＧ和ＣＳＰＧ增高,且加ＨＳＰＧ后细胞层的ＤＳＣＳＰＧ分子大小有所不同,进一步分析ＤＳＣＳＰＧ中ＤＳ及ＣＳ含量发现加ＨＳＰＧ组ＨＡＳＭＣ细胞层中的ＤＳ％含量略低于对照组。结果提示ＨＳＰＧ可刺激ＨＡＳＭＣ的ＰＧ合成,其可能与血管壁修复及动脉壁脂质沉积有关。     

人动脉壁蛋白聚糖与血清脂蛋白形成的不溶性复合物

本文报道了人主动脉壁中正常及异常(脂纹,FS)区的三种蛋白聚糖(PG)即:硫酸软骨素PG(CSPG)、硫酸皮肤素—硫酸软骨素PG(DSCSPG)及硫酸乙酰肝素PG(HSPG)与血清极低密度脂蛋白(VLDL)及低密度脂蛋白(LDL)所形成的不溶性复合物。在30mmol/L Ca~(2+)对,三种PG都能与这两种脂蛋白形成不溶性复合物,随放置时间的增加,形成的复合物都发生解离,但其复合物形成的曲线及解离程度明显不同。DSCSPG与CSPG比较,前者与两种脂蛋白更易形成不溶性复合物且不易解离。HSPG与两种脂蛋白形成不溶性复合物所需时间远大于CSPG及DSCSPG。FS区及正常区三种PG形成复合物曲线类型相似,异常区CSPG、DSCSPG与VLDL形成的复合物量低于正常区的相应PG,而与VLDL则高于正常区的相应PG。异常区的HSPG与两种脂蛋白形成不溶性复合物的量均高于正常区。     

硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对培养人脐静脉内皮细胞合成蛋白聚糖的…

以「＾３５Ｓ」－Ｎａ２ＳＯ４为示踪物,观察人正常主动脉中的硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（ＨＳＰＧ）对培养的第一代人脐静脉内皮细胞（ｈＵＶＥＣ）合成蛋白聚糖（ＰＧ）的影响,用解聚提取法及离子交换柱层析分离人主动脉ＨＳＰＧ,＾３５Ｓ－ＰＧｓ的混合物用离子交换及凝胶过滤柱层析法分离＾３５Ｓ－ＨＳＰＧ,＾３５Ｓ－硫酸软骨素－硫酸皮肤素ＰＧ（＾３５Ｓ－ＣＳＤＳＰＧ）及＾３５Ｓ－硫酸皮肤素ＰＧ（＾３５Ｓ－ＤＳＰＧ）,     

硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对培养人脐静脉内皮细胞合成蛋白聚糖的影响

以[35S」-Na2SO4为示踪物,观察人正常主动脉中的硫酸乙酸肝素蛋白聚糖（HSPG）对培养的第一代人脐静脉内皮细胞（hUVEC）合成蛋白聚糖（PG）的影响．用解聚提取法及离子交换柱层析分离人主动脉HSPG．35S-PGs的混合物用离子交换及凝胶过滤柱层析法分离35S-HSPG,35S-硫酸软骨素-硫酸皮肤素PG（35S-CSDSPG）及35S-硫酸皮肤素PG（35S-DSPG）．结果发现实验组（加HSPG）与对照组（未加HSPG）相比,hU-VEC的35S-PGs总量（培养液+细胞层）无差别,但实验组培养液中35S-PGs总量升高、35S-DSPG、35S-CSDSPG及其相对百分含量均升高,而35S-HSPG及其百分含量降低．细胞层的35S-PGs,35S-HSPG及其相对百分含量降低,35S-DSPG及其相对百分含量升高,而CSDSPG未见差别．