都柏林念珠菌的PCR-RFLP鉴定

目的建立一种准确、可靠的鉴定都柏林念珠菌基因型的方法。方法临床念珠菌分离自临床生殖器念珠菌病患者,45℃温度试验时几乎不生长,且其他表型实验结果也符合都柏林念珠菌特征。对41例临床念珠菌和1例白念珠菌标准株、1例都柏林念珠菌标准株rDNA内部转录间隔区的基因进行聚合酶链反应（PCR）扩增,HpyF10Ⅵ酶切后观察PAGE图谱。结果聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）后,39例临床株鉴定为白念珠菌。2例临床菌株带型特殊,测序后行BLAST比对分析,1例鉴定为白念珠菌,另1例尚不能肯定为都柏林念珠菌,还需要进一步以其他分子生物学方法鉴定。结论PCR-RFLP方法酶切后两种念珠菌带型区分明显,可以鉴别大部分临床菌株。基因测序是该方法有意义的补充。     

EPHX2基因多态性与长沙地区汉族人群脑梗塞继发性癫痫遗传易感性的关联研

目的：研究EPHX2rs1042032 (A/G)多态性与长沙地区汉族人群脑梗塞继发性癫痫遗传易感性关联关系。方法：收集中南大 学湘雅医院及湘雅三医院脑梗塞未继发癫痫及脑梗塞继发癫痫患者血液标本。利用病例-对照研究方法,将标本分为对照组（即 无EP 组）402 例和病例组（即EP组）124 例,提取血样的DNA。然后根据人类基因组DNA序列,设计EPHX2rs1042032 PCR引 物,用PCR 方法对目的基因进行扩增。通过聚合酶链反应- 限制性片段长度多态性（PCR- restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP）方法,先对扩增的目的基因片段进行酶切,然后通过凝胶电泳对不同的等位基因进行分辨。结果：EP组 和无EP组间EPHX2rs1042032 多态位点基因型分布无显著统计学差异（P>0.05）。结论： EPHX2rs1042032 的基因多态性与脑梗 塞继发性癫痫可能无关。     

PCR-SSCP分析结合直接测序检测β-地中海贫血患者基因突变型

聚合酶链反应－单链DNA构象多态性（PCR－SSCP）分析适用于DNA多态性分析和基因突变检测．在遗传病诊断及癌基因、抑癌基因等基因突变检测中得到日益广泛的应用［1,2］．我们把PCR－SSCP分析同直接测序结合起来,应用于β-地中海贫血患者基因突变型的检测．同时,对假阳性和假阴性结果出现的频率也作了观察．1材料和方法1．112例卜地中海贫血患者外周血样品,由中国人民解放军第303医院提供,按常规方法提取白细胞DNA［3］l．2PCR按文献介绍的方法进行”’．引物序列：174－ATCACTTAGACCTCACCCTGT（－118——一98）;…     

DNA指纹技术在污染土壤生态毒理诊断中的应用

生物标记物能在细咆或分子水平上指示暴露．效应关系,是进行污染土壤生态毒理诊断的主要技术手段之一。随着分子生物学技术的飞速发展,出现了一系列以聚合酶链式反应为基础的、在分子水平上检测污染物质导致的生物体DNA损伤的DNA指纹技术。DNA指纹技术的主要类型有：随机扩增多态性DNA（RAPD）、聚合酶链式反应．单链构象多态性（PCR-SSCP）、扩增片段长度多态性（AFLP）、任意引物聚合酶链式反应（AP—PCR）、差异显示反转录聚合酶链式反应（DDRT）、短DNA重复序列（SSR）及限制片段长度多态性（RFLP）等。这些技术与检测基因突变、染色体畸变和损伤为主的一系列经典研究方法如彗星分析、微核实验等相比具有简便、快速、灵敏等优点。本文着重介绍了随机扩增多态性DNA、聚合酶链式反应．单链构象多态性、扩增片段长度多态性3种重要的DNA指纹技术在污染土壤诊断中的应用。     

树鼩微卫星DNA的多态性研究

目的探索并建立一种检测树鼩群体遗传多样性的方法。方法利用聚合酶链反应（PCR）扩增技术对30只树鼩个体的11个微卫星位点进行了遗传检测。结果所选的11个微卫星DNA位点中,有9个具有高度多态性,2个微卫星DNA位点多态性较差。结论所研究的树鼩微卫星位点中,有9个符合遗传标记特点,可用于检测树鼩群体的遗传多样性。     

载脂蛋白E基因多态性与动脉粥样硬化性脑梗塞关系的研究

应用聚合酶链反应(PCR)扩增ApoE基因外显子4中编码112位和158位氨基酸的 DNA片段,将该长为292bp的PCR产物以HhaI酶切,根据其限制性片段长度多态性图谱确定ApoE基因型。对广东汉族人群的50例动脉粥样硬化脑梗塞(ACI)患者和50例健康对照者的ApoE基因多态性频率的研究结果表明:所研究的人群中,ApoE基因多态性频率与ACI没有关联。ACI患者中各基因型亚组之间血清TG和TC浓度无显著性差异。 Abstract:The polymerase chain reaction(PCR)and restriction fragment length polymorphism techniques(RFLPs)were used to study the relation between apolipoprotein E gene polymorphism and atherosclerotic cerebral infarction(ACI).A 292 bp DNA fragment containing codes for the 112 and 158 amino acid residues in the fourth exon of ApoE gene was amplified by PCR.The PCR products were digested with HhaI.The polymorphism patterns of Apo E gene,allele frequencies in 50 Chinese healthy and 50 patients with ACI,and the serum levels of TG and TC in the different subgenotypes of 50 patients with ACI were detected.,no statistical significant differences of alleles frequencies were found between the cases with ACI and the control,and no statistical significant differences of the serum levels of TG and TC were found among the different subgenotypes of 50 patients with ACI.These results suggested that ApoE gene polymorphism was not associated with the development of ACI.     

EPHX2基因多态性与长沙地区汉族人群脑梗塞继发性癫痫遗传易感性的关联研究

目的:研究EPHX2 rs1042032(A/G)多态性与长沙地区汉族人群脑梗塞继发性癫痫遗传易感性关联关系。方法:收集中南大学湘雅医院及湘雅三医院脑梗塞未继发癫痫及脑梗塞继发癫痫患者血液标本。利用病例-对照研究方法,将标本分为对照组(即无EP组)402例和病例组(即EP组)124例,提取血样的DNA。然后根据人类基因组DNA序列,设计EPHX2 rs1042032 PCR引物,用PCR方法对目的基因EPHX2进行扩增。通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)方法,先对扩增的目的基因片段进行酶切,然后通过凝胶电泳对不同的等位基因进行分辨。结果:EP组和无EP组间EPHX2 rs1042032多态位点基因型分布无显著统计学差异(P0.05)。结论:EPHX2 rs1042032的基因多态性与脑梗塞继发性癫痫可能无关。     

鉴别都柏林假丝酵母和白假丝酵母的一种新的烟草琼脂培养基

根据表型特征鉴别都柏林假丝酵母（都柏林念珠菌）和白假丝酵母（白念珠菌）的方法一般不完全可靠，最可信的选择是基于聚合酶链反应（PCR）的分子生物学方法，但因其要求条件较高，不适于推广使用。原本用于鉴定新生隐球菌的Staib琼脂和向日葵琼脂培养基在区分都柏林念珠菌和白念珠菌中的作用逐渐得到肯定,     

Leber遗传性视神经病变家系的线粒体基因突变分析

为探讨Leber遗传性视神经病变（Leber′s hereditary optic neuropathy,LHON）家系线粒体DNA（mtDNA）常见致病原发突变的频谱,用聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）和单链构象多态性（single-stranded conformational polymorphism,SSCP）以及DNA测序的方法,对13个家系22位临床诊断为LHON的患者及其母系亲属21人的线粒体DNA进行检测,同时检测71例正常人作为对照。临床拟诊为LHON的13个家系中,11个家系存在mtDNA位点11778 G→A突变,另2个家系存在14484位点T→C突变。说明中国LHON病人存在线粒体DNA 11778或14484位点突变,其中14484位点突变在国内尚未见报道。 Abstract:The purpose of the study is to investigate the frequency of common pathogenic primary mitochondrial DNA mutations in pedigrees of Leber′s hereditary optic neuropathy (LHON).Mutations were determined by polymerase chain reaction (PCR),single-stranded conformational polymorphism (SSCP) and DNA sequencing.Twenty-two patients with suspicion of LHON and twenty-one their maternal relatives underwent molecular genetic evaluation.Seventy-one normal individuals underwent molecular genetic evaluation as control at the same time.Members from 13 families with suspicion of LHON,11 families had nucleotide position nt11778 G→A mutations.Another 2 families had nt14484 T→C mutations.It is concluded that the point mutations at nucleotides 11778 and 14484 are primary LHON mutations,but the point mutation of nt14484 is rare in Chinese.     

聚合酶链反应在研究DNA多态性中的应用

聚合酶链反应(Polymerase chain reaction PCR)是一种体外DNA扩增技术,自1985年Saiki等首次报道PCR方法以来,PCR技术迅速发展,并已广泛应用于生命科学各个方面。如基因克隆、遗传病的诊断、传染病的诊断、癌基因的检测等,由于PCR技术特异性强,扩增效率高、快速、录敏,且能克服限制性片段长度多态性(RFLP)的局限性,因此,它被有效地应用于研究DNA多态性。     

5个精神分裂症高发家系与COMT关联的分析

本研究旨在探测儿茶酚氧位甲基转移酶基因（COMT）多态性与精神分裂症（SP）的关系,搜寻中国汉族人精神分裂症易患性基因。 应用聚合酶链反应（PCR）和限制性片段长度多态性（RFLP）方法对5个精神分裂症高发家系进行初步研究。 用改进的传递/不平衡（TDT）进行统计分析,结果表明,在5个精神分裂症高发家系中,COMT基因与精神分裂症相关联（P=0.0455）。 研究结果提示,在我们研究的家系中,22号染色体长臂（22q11.2）可能存在精神分裂症易患性基因。 Abstract:This study is to explore the relationship between polymorphism of Catechol O-methyltransferase gene and schizophrenia.Search for a gene predisposing to schizophrenia in the Han nationality in China.Five pedigrees with high incidence of schizophrenia were studied by polymerize chain reaction(PCR) and restriction fragment length polymorphism(RFLP) technique.Statistics analysis of the transmission/disequilibrium test (TDT) showed that the COMT gene is associatted with schizophrenia in the five pedigree with high incidence schizophrenia(P=0.0455).The results suggest that there might have a schizophrenia liability gene on 22 chromosome (22q11.2) in our studied pedigrees.     

单根毛发具有不同的DNA分型

在DNA水平上研究遗传变异性已在基因定位和疾病诊断方面取得明显进展,并应用于法医学领域。用限制性片段长度多态性(RFLP)分析DNA时,多个位点分型需要微克量的DNA,单个位点则需数百毫微克量的DNA。象单根毛发和血斑等法医样品往往不能获得上述量的DNA。既然单个DNA分子的某一特定基因片段也能用聚合酶链反应(PCR)大量扩增,为了检测人单根毛发中的多态性DNA顺序,实验以PCR扩增毛发DNA,然后进行DNA分型。     

聚合酶链反应用于高效基因定位改造

聚合酶链反应（PolymeraseChainReaction,简称PCR）是近几年发展起来的一种DNA体外扩增技术,其原理和它的一些应用（诸如在临床医学、考古学和法医学等方面）已有综述[1,2,3].     

恒河猴与食蟹猴微卫星DNA多态性的比较分析

目的分析恒河猴和食蟹猴群体间的遗传多样性,确立一种对恒河猴和食蟹猴种群个体的遗传鉴别方法。方法利用聚合酶链反应（PCR）扩增技术采用15个多态性微卫星DNA位点对50只恒河猴和50只食蟹猴个体进行了DNA多态性的分析,对比两群体间等位基因数目差异。结果筛选的15个具有显著多态性的微卫星DNA位点对恒河猴和食蟹猴种群可以进行DNA多态性分析,其等位基因数目均在7个以上,且两群体间有11个位点的等位基因数存在一定的差异。结论利用这些多态性微卫星DNA位点建立一种有效鉴别恒河猴和食蟹猴种群遗传背景的方法具有一定的可行性。     

胰岛素受体基因多态性与2 型糖尿病的相关性

目的：探讨胰岛素受体基因（INSR）的第8外显子NaiⅠ多态性与湖北汉族人群2型糖尿痛的相关性;方法：采用同胞对（家系内对照）和随机病例-对照两种实验设计,并结合聚合酶链反应-限制性片断长度多态性（PCR—RFLP）技术分析了224个样本的INSR基因第8外显子NsiⅠ多态性,并洲定了身高、体重、腰围、臀围、血压和空腹血糖等生理指标;结果：两种实验设计中对照组与病例组的基因型和基因频率均无显著差异;结论：INSR基因在湖北汉族人群2型糖屎病的发生发展中可能不起主要作用。     

应用PCR技术检测病人血液标本中斑点热群立克次体DNA

本文以聚合酶链反应（PCR）,采用二次扩增法直接检测蜱传斑点热病人血液标本中斑点热群立克次体DNA,结果从7份标本中检出阳性1份,进一步的限制性片段多态性分析证明和斑点热群黑龙江立克次体基因型相同。实验证明：黑龙江立克次体对人具有致病性,同时也证明PCR技术快速、简单、敏感,用于斑点热群立克次体的早期诊断是可行的,并可作出分型鉴定。     

飞行员中血管紧张素转换酶基因插入或缺失多态性研究

为了解飞行员血管紧张素转换酶(ACE)基因插入或缺失（I/D）多态性情况,探讨ACE基因多态性与飞行员耐力可能的关系,用聚合酶链反应（PCR）扩增技术检测118例飞行员和96例健康对照者的ACE基因I/D多态性。 结果位于ACE基因内含子16的I/D多态性经PCR扩增后呈三种基因型：纯合子插入型（II）、纯合子缺失型（DD）和杂合子插入或缺失型（I/D）。飞行员组II基因型（44.07%）和I等位基因频率（0.65）显著高于健康对照组(分别为31.25%和0.52)。 结果表明ACE I基因有可能在飞行员的飞行耐力中起重要作用。 Abstract:In order to understand insertion/delation (I/D) polymorphism of the angiotensin-converting enzyme (ACE) gene in pilots,and to explore the relationship between ACE gene I/D polymorphism and the perfomance of the pilots,the polymerase chain reaction (PCR) was used to determine the genotypes for an I/D polymorphism in intron 16 of the ACE gene in 118 pilots and 96 healthy subjects as controls.The result showed that the I/D polymorphism in intron 16 of the ACE gene was categorized into three genotypes: two deletion alleles (genotype DD),heterozygous alleles (genotype ID),and two insertion alleles (genotype II).The genotype II and I allele frequency were significantly higher in pilots (44.07% and 0.65) than that in healthy subjects (31.25% and 0.52).It is suggested that I gene of ACE may play a role in perfomance of the pilots.     

老年心功能不全患者mink S38G多态性与房颤的相关性

探讨老年慢性心功能不全患者中,心肌细胞Iks通道β亚单位基因mink-S38G多态性与心房颤动（atrial fibrillation, AF）发生的相关性.收集慢性心功能不全患者共127例,其中房颤组63例,窦律组64例.采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性（restriction fragment length polymorphism, PCR—RFLP）检测房颤组和窦律组的mink基因S38G多态性位点的基因型.房颤组与窦律组之间minkS38G的3种基因型频率为SS(9.52% vs 23.44%),SG(41.27% vs 50.00%),GG(49.21% vs 26.56%).在房颤组中,GG基因型的频率明显高于窦律组,两组间基因型存在明显差异, P=0.013;多因素Logistic回归提示,minkS38G多态性与房颤的发生有明显相关（P=0.010）.因此,在老年慢性心功能不全患者中,mink基因S38G多态性与房颤的发生有关,具有GG基因型的患者其发生房颤的风险较高     

“聚合酶链反应（PCR）原理”的教学设计

试将“聚合酶链反应（PCR）技术”选修内容,移到必修的“DNA的复制”之后,引导学生由DNA体内扩增类比推理DNA体外扩增,构建单元知识结构框架。运用科学史料,引导学生体验PCR原理和技术的形成过程,认同从科学灵感到技术实践是科学家的智慧结晶。     

AGT基因SNPs与哈萨克族高血压左室肥厚关系的研究

目的探讨血管紧张素原基因（angiotensinogen gene,AGT）-6A／G,-20A／C,M235T和T174M 4个单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms,SNPs）与新疆哈萨克族高血压患者左室肥厚的关系。方法采用低渗溶血法破裂血细胞、蛋白酶K消化、饱和酚／氯仿抽提法提取白细胞基因组DNA。采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性（polymerase chain reaction—restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP）技术进行个体基因型分型。结果①在不考虑年龄、高血压病史时间、性别及收缩压、舒张压对左室肥厚的影响的前提下,未发现-6A／G、-20A／C与哈萨克族高血压左室肥厚的相关关系。②在以性别作为亚变量的分析结果中,我们发现-6A／G和-20A／C分别与哈萨克族女性和男性高血压左室肥厚相关。③不同SNPs间的配对连锁不平衡分析结果显示,除M235T与T174M之间外,其他各位点间存在有统计学意义的连锁不平衡关系。④单体型分析结果发现,研究人群AGT基因-6A／G、-20A／C、M235T和T174M4个SNPs构成了11种主要的单体型,其中H2（A—G—M—T）、H5（C—A—M—M）、H6（C—A-T—T）、H9（C-A—T—M）的频率在左室肥厚、非左室肥厚两组的分布存在差异,且具有统计学意义（P〈0．05）。结论AGT基因-6A／G、-20A／C、M235T和T174M变异可能与新疆哈萨克族高血压左室肥厚有关。