基于绿色低共熔溶剂法高效提取鸡骨草中的黄酮和皂苷

为了研究鸡骨草中总黄酮和总皂苷的最佳提取工艺,通过单因素试验和星点设计-响应面法,对低共熔溶剂的性质(如种类、组分摩尔比、含水量)、提取温度、提取时间、液料比等多个因素进行考察。结果显示,总黄酮的最佳提取条件为:摩尔比1∶2、含水量30%的氯化胆碱/乙二醇作溶剂,提取温度80℃,提取时间40min,液料比15∶1(mL/g);总皂苷的最佳提取条件为∶摩尔比1∶4、含水量25%的氯化胆碱/乳酸作溶剂,提取温度80℃,提取时间64min,液料比56∶1(mL/g)。在最佳条件下,总黄酮和总皂苷的提取率较传统提取溶剂分别提高了33.3%和96.4%。本研究为鸡骨草中黄酮和皂苷的高效、安全提取提供了一条新思路。     

苦瓜皂苷提取工艺研究

采用正交设计研究回流法苦瓜皂苷的提取工艺。考察提取温度、乙醇浓度、固液比和提取时间等因素在不同水平下对苦瓜皂苷提取率的影响,并对结果进行方差分析和显著性检验。结果显示乙醇提取法最佳工艺组合为A3B1C2D3,即70％乙醇,固液比为1：15,100℃回流提取1．5h,重复提取3次。     

响应面法优化超声提取苜蓿皂苷工艺条件

目的:利用响应面法对超声提取苜蓿皂苷的工艺条件进行了优化.方法:研究了超声波条件下影响提取的几个因素,包括超声时间、超声温度、超声功率、固液比等,并通过响应面法优化工艺条件.结论:根据中心组合设计原理采用四因子三水平的响应面分析法,通过对各因子显著性和交互作用的分析,得出了超声提取苜蓿皂苷的最佳工艺条件为:超声时间22min,超声温度43℃,超声功率403W,固液比1:51(g/ml),此时苜蓿皂苷的得率为4.53%.     

絮凝剂在银杏叶提取液中除杂工艺研究

本实验以黄酮醇苷含量为评价指标,筛选硅藻土、明胶、壳聚糖、101果汁澄清剂、ZTC1+1天然澄清剂、活性炭六种澄清剂,分别采用单因素和正交试验法对银杏叶提取液的澄清条件进行工艺优化。结果表明:银杏叶提取液的最佳澄清条件为明胶做澄清剂,每10 g生药加1%明胶溶液3 m L,浓缩液药比为6∶1(m L/g)、p H为5.5、温度为40℃。明胶作为银杏叶提取液的除杂澄清剂稳定、可行。     

水浴回流与超声波辅助回流提取百合皂苷工艺比较研究

分别采用单因素试验法和正交试验法对水浴和超声波辅助回流提取法对百合总皂苷的提取工艺进行比较,获得最佳水浴回流提取工艺为:乙醇浓度为50%、温度为90℃、提取时间为3 h、固液比为1∶18。在该工艺条件下百合皂苷的提取率为1.98%;超声波辅助回流提取最佳工艺为:温度为90℃、乙醇浓度为70%、提取时间为25 min、固液比为1∶30、提取功率为105 W。在该工艺条件下百合皂苷的提取率为2.33%,超声波辅助回流提取法的百合皂苷提取率和稳定性、重复性都优于传统的水浴回流提取法。     

动态连续逆流提取绞股蓝皂苷的研究

本文在中试条件下,通过单因素试验和正交试验考察不同因素对绞股蓝皂苷提取得率的影响,从而探讨动态连续逆流提取绞股蓝皂苷的最佳工艺。结果表明:动态连续逆流提取绞股蓝皂苷最佳条件为:提取溶剂温度为80℃,料液比为1∶35(g/mL),提取时间为50 min。在此条件下,绞股蓝提取物平均提取得率为33.95%,皂苷得率为8.9%;动态连续逆流提取绞股蓝皂苷具有生产连续性好、皂苷提取得率高、产品纯度高等优点。     

超声波法提取剑花总皂苷工艺研究

利用超声波法,采用正交实验对剑花总皂苷提取工艺进行研究。结果表明,提取剑花总皂苷的最优条件为:粒度80目,最佳溶剂水,超声时间40 min,溶剂挥干温度80℃,料液比1:20。     

连续逆流提取机及其在绞股蓝皂苷提取工艺中的应用

简述了中草药连续逆流提取机的基本结构和工作原理.以水为溶媒、绞股蓝为原料,进行绞股蓝有效成分的提取试验.以绞股蓝水溶出物和总皂苷为目标物,考察提取温度、液料比和提取时间等因素对提取得率的影响,并通过L9(33)正交实验设计,对提取工艺进行优选.采用中草药连续逆流提取机提取绞股蓝有效成分的最佳工艺条件:提取溶剂温度80 ℃,料液比1:35(g/mL),提取时间50 min;所得提取物得率为33.95%,总皂苷得率为8.9%.     

响应面法优化微波提取绞股蓝愈伤组织中人参皂苷Rb1的工艺研究

以绞股蓝愈伤组织为原料,优化绞股蓝人参皂苷Rb1的微波提取工艺,在单因素试验的基础上,选择液料比、微波功率和微波处理时间为自变量,人参皂苷Rb1为响应值,采用响应曲面法设计、分析研究各自变量及其交互作用对人参皂苷Rb1提取率的影响.利用响应面分析方法,模拟得到二次多项式回归方程的预测模型,并确定人参皂苷Rb1微波辅助提取工艺的最佳条件为：料液比1：20（g/mL）,处理时间6 min,微波功率200 W.在此最佳工艺条件下,人参皂苷Rb1得率为3.95 mg/g.     

浸提法提取不同极性燕麦提取物的工艺优化

目的：优化燕麦不同极性提取物的浸提工艺。方法：通过极性、半极性和非极性的程序化设计，以提取物质量及提取率为指标，以水、乙醇、正己烷为溶剂，选取温度、时间、料液比为影响因素，采用L9（34）正交试验进行传统浸提，通过极差分析和方差分析评估燕麦不同极性提取物的提取条件。结果：燕麦水提物的最佳提取条件为60℃、1h、料液比1∶20 g/mL，燕麦醇提物及燕麦黄酮的最佳提取条件为70℃、2h、料液比1∶50 g/mL，燕麦正己烷提取物的最佳提取条件为45℃、10 min、料液比1∶10 g/mL。结论：优化后的提取工艺切实可靠，同时能全面反映燕麦中存在的可溶性组分及其含量，为评价燕麦在体内的生物学作用与不同极性成分之间的量效关系奠定了坚实的基础。     

NPC1L1:固醇脂质吸收的关键蛋白质

NPC1L1是最近发现的一种与NPC1同源的蛋白质。在体内的分布有物种差异性,其亚细胞定位存在很大争议。近些年发现NPC1L1在固醇类脂质代谢途径中起着重要作用,是肠道吸收固醇类脂质尤其是胆固醇的关键蛋白质,这项新发现使得人们对固醇类脂质的吸收机制有了了解。高胆固醇血症是心血管系统疾病的一个高危因子,因此,对NPC1L1的研究具有重大的实际意义,正逐渐成为研究的热点。     

Stoichiometry studies reveal functional properties of KDC1 in plant shaker potassium channels

Functional heteromeric plant Shaker potassium channels can be formed by the assembly of subunits from different tissues, as well as from diverse plant species. KDC1 (K(+) Daucus carota 1) produces inward-rectifying currents in Xenopus oocytes when coexpressed with KAT1 and other subunits appertaining to different plant Shaker subfamilies. Owing to the presence of KDC1, resulting heteromeric channels display slower activation kinetics, a shift of the activation threshold toward more negative membrane potentials and current potentiation upon the addition of external zinc. Despite available information on heteromerization of plant Shaker channels, very little is known to date on the properties of the various stoichiometric configurations formed by different subunits. To investigate the functional properties of heteromeric nKDC1/mKAT1 configurations, we realized a series of dimeric constructs combining KDC1 and KAT1 alpha-subunits. We found that homomeric channels, formed by monomeric or dimeric alpha-subunit constructs, show identical biophysical characteristics. Coinjections of diverse tandem constructs, instead, displayed significantly different currents proving that KDC1 has high affinity for KAT1 and participates in the formation of functional channels with at most two KDC1 subunits, whereas three KDC1 subunits prevented the formation of functional channels. This article brings a contribution to the understanding of the molecular mechanisms regulating plant Shaker channel functionality by association of modulatory subunits.     

Variation in salinity tolerance and shoot sodium accumulation in Arabidopsis ecotypes linked to differences in the natural expression levels of transporters involved in sodium transport

Salinity tolerance can be attributed to three different mechanisms: Na⁺ exclusion from the shoot, Na⁺ tissue tolerance and osmotic tolerance. Although several key ion channels and transporters involved in these processes are known, the variation in expression profiles and the effects of these proteins on Na⁺ transport in different accessions of the same species are unknown. Here, expression profiles of the genes AtHKT1;1, AtSOS1, AtNHX1 and AtAVP1 are determined in four ecotypes of Arabidopsis thaliana. Not only are these genes differentially regulated between ecotypes, the expression levels of the genes can be linked to the concentration of Na⁺ in the plant. An inverse relationship was found between AtSOS1 expression in the root and total plant Na⁺ accumulation, supporting a role for AtSOS1 in Na⁺ efflux from the plant. Similarly, ecotypes with high expression levels of AtHKT1;1 in the root had lower shoot Na⁺ concentrations, due to the hypothesized role of AtHKT1;1 in retrieval of Na⁺ from the transpiration stream. The inverse relationship between shoot Na⁺ concentration and salinity tolerance typical of most cereal crop plants was not demonstrated, but a positive relationship was found between salt tolerance and levels of AtAVP1 expression, which may be related to tissue tolerance.     

Carboxamide SIRT1 inhibitors block DBC1 binding via an acetylation-independent mechanism

SIRT1 is an NAD⁺-dependent deacetylase that counteracts multiple disease states associated with aging and may underlie some of the health benefits of calorie restriction. Understanding how SIRT1 is regulated in vivo could therefore lead to new strategies to treat age-related diseases. SIRT1 forms a stable complex with DBC1, an endogenous inhibitor. Little is known regarding the biochemical nature of SIRT1-DBC1 complex formation, how it is regulated and whether or not it is possible to block this interaction pharmacologically. In this study, we show that critical residues within the catalytic core of SIRT1 mediate binding to DBC1 via its N-terminal region, and that several carboxamide SIRT1 inhibitors, including EX-527, can completely block this interaction. We identify two acetylation sites on DBC1 that regulate its ability to bind SIRT1 and suppress its activity. Furthermore, we show that DBC1 itself is a substrate for SIRT1. Surprisingly, the effect of EX-527 on SIRT1-DBC1 binding is independent of DBC1 acetylation. Together, these data show that protein acetylation serves as an endogenous regulatory mechanism for SIRT1-DBC1 binding and illuminate a new path to developing small-molecule modulators of SIRT1.     

人骨髓间充质干细胞向神经细胞分化过程中Notch通路信号分子表达的变化

本研究探讨Noah信号通路在人骨髓间充质干细胞（human mesenchymal stem cells,hMSCs）体外增殖及向神经细胞分化过程中的作用。采集健康自愿者骨髓,体外培养获得hMSCs,取第3代hMSCs,在诱导剂（β-ME,DMSO,BHA）作用下向神经细胞分化。诱导后用免疫细胞化学鉴定神经元特异性烯醇化酶（neuron-specific enolase,NSE）和尼氏体的表达以确定诱导效果：用流式细胞术检测细胞生长周期时相的变化。在诱导前后,用免疫荧光和RT-PCR方法检测Notch通路中Notch1受体蛋白、配体Jagged1（JAG1）、调节蛋白活化相关物早老素1（presenilin 1,PS1）、靶基因hairy and enhancer of split1（HES1）信号分子表达的变化。结果显示：诱导前,处于G0/G1期的hMSCs占58．5％,S＋G2/M期的细胞占41．5％;诱导后,G0/G1期细胞比例升高,而S＋G2/M期细胞比例下降,NSE阳性细胞率达（77±0．35）％,细胞质中可见深蓝色的块状或颗粒状尼氏体。免疫荧光显示,诱导前后hMSCs内Notch1和JAG1均呈阳性表达,但RT-PCR检测发现诱导后Notch1、JAG1、PSl和HES1 mRNA表达量较诱导前明显降低（均P〈0．05）。结果表明,诱导hMSCs向神经细胞分化能抑制Notch信号分子表达,低水平的Notch信号激活可能有利于神经细胞的分化。     

eEF1A1基因克隆、原核分泌表达及融合蛋白纯化

eEF1A1作为蛋白合成中的重要翻译延伸因子,可与多种功能性蛋白如F-actin、BPOZ-2结合,并在细胞凋亡、蛋白降解方面起重要作用.以往原核基因工程蛋白表达系统大多为包涵体表达的变性分子,需要复性.为了获得eEF1A1原核分泌性可溶性蛋白分子,克隆了人eEF1A1蛋白编码序列(约1 300 bp),并成功构建pET22b-A原核分泌表达重组质粒,转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株,0.4 mmol/L终浓度IPTG诱导,经不同温度下包涵体与胞浆蛋白组分分析,快速明确蛋白表达情况,即诱导4 h后,37℃表达于包涵体组分,在30℃分泌表达至胞浆组分.通过His-Trap亲和层析纯化柱进行线性洗脱,Bradford法测定蛋白浓度高达620 mg/mL,SDS-PAGE分析纯度约为95%,蛋白大小符合50 kD,Western blotting显示目的蛋白能被eEF1A1抗体识别;质谱分析证实重组蛋白为人eEF1A1蛋白分子.为进一步研究其与重要功能性蛋白的相互作用及在细胞凋亡和蛋白降解中的作用奠定基础.     

一个中国Gilbert综合征家系的遗传学分析

对一个中国汉族Gilbert综合征遗传家系致病基因突变位点进行鉴定,以期了解该病的分子遗传学基础。首先提取先证者基因组DNA,PCR扩增尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶UGT1A1基因的5个外显子,以琼脂糖电泳鉴定PCR产物,纯化后直接测序鉴定。基因扫描显示,与血清胆红素水平密切相关的UGT1A1基因在第1和第5外显子存在纯合突变,而 UGT1A1基因启动子区域和内含子/外显子剪接边界位点序列未检测到突变。进一步对其他家系成员该基因的相应位点进行突变检测,结果显示他们在第1和第5外显子也存在杂合突变,其中还有两个成员在启动子区域检测到(TA)插入突变。对家系成员未抗凝新鲜血液进行生化检测证实了基因突变分析的结果。综合以上结果发现该家系三种突变并存,致病因素为第1和/或第5外显子突变,为显性遗传,两种突变位点纯合导致先证者出现严重胆红素代谢功能障碍。该家系因此成为Gilbert综合征突变位点及其致病机理研究的一个典型临床病例。     

细胞色素P450 1A1基因多态性与我国某些肿瘤遗传易感性

近年来有关细胞色素P450基因多态性与肿瘤遗传易感性的研究正日益吸引越来越多的关注,本文对我国近年来有关细胞色素P450 1A1(CYP1Al)基因多态性与几种肿瘤遗传易感性的研究进行探讨,推测我国几种高发病率肿瘤的发生与我国CYP1A1基因多态分布状况有关,以此为进一步研究CYP1A1与肿瘤的关系作参考。