人原发性肝细胞肝癌中丙型肝炎病毒C_（33c）抗原及HBxAg的分布及意义

作者应用抗ＨＣＶＮＳ３区Ｃ３３ｃ抗原２Ｂ６株单克隆抗体和抗ＨＢｘＡｇ多克隆抗体,采用ＡＢＣ法对１０２例人原发性肝细胞肝癌（ＰＨＣ）组织进行了ＨＣＶ及ＨＢＶ抗原定位研究。ＨＣＶＣ３。抗原及ＨＢｘＡｇ在ＰＨＣ中的阳性检出率分别是８１．４％及７４．５％,Ｃ３３ｃ抗原或ＨＢｘＡｇ阳性占所检病例９４．１％,相同病例二者同时阳性为６１．８％。１０２例ＰＨＣ中５０例有癌旁肝组织,其Ｃ３３ｃ抗原和ＨＢｘＡｇ的阳性检出率分别是６２％和９２％。ＨＣＶＣ３３ｃ抗原定位于肝癌细胞的胞浆内,胞核未见阳性信号。Ｃ３３ｃ抗原阳性细胞在ＰＨＣ中呈散在、局灶分布为主,在癌旁肝组织呈弥漫分布为主。本文结果提示ＨＣＶ感染在ＰＨＣ的发生中可能起重要作用。     

蛋白激酶底物p36在肝硬变、肝细胞肝癌中的表达及与HBV、HCV感染的关系

本文应用鼠抗蛋白激酶底物ｐ３６单克隆抗体,采用免疫组织化学法对ｐ３６在５４例肝硬变,７９例肝细胞肝癌中的表达分布进行了研究,同时结合ＨＢＶ、ＨＣＶ感染情况分析其相互关系,结果显示：ｐ３６在肝硬变及肝细胞肝癌中定位于肝细胞或癌细胞胞浆内,在胞浆内弥漫分布,阳性细胞呈灶状或弥漫分布,部分病例癌周肝细胞信号较癌组织为强,ｐ３６在肝硬变、肝细胞癌中的阳性率分别为８８．８％（４８／５４）及８２．３（６５／７９）,ＨＢｘＡｇ在两种组织的阳性率分别为７０．４％及７６％,ＨＣＶ核心抗原在两种组织的阳性率分别为８０％及７８．５％;三者同时阳性分别为５５．５％及５８．２％;ｐ３６、ＨＢｘＡｇ同时阳性分别为６８．５％及６４．５％;ｐ３６、核心抗原同时阳性分别为７４．１％及７０．８％,我们的结果提示,肝硬变、肝细胞肝癌组织中ｐ３６存在高表达,其高表达可能与ＨＢＶ、ＨＣＶ感染密切相关     

乙型肝炎、肝硬变和肝癌中HBxAg的表达及其在肝癌发生中的作用

对３７９例良、恶性肝组织进行的免疫组织化学研究显示,３３％的慢性迁延性肝炎（６／１８）、７６％的慢性活动性肝炎（２６／３４）、９２％的肝硬变（５７／６２）和９７％的肝细胞性肝癌（ＨＣＣ）（５８／６０）中有ＨＢｘＡｇ表达,阳性率高于ＨＢｓＡｇ或ＨＢｃＡｇ。癌周肝中的ＨＢｘＡｇ阳性率显著高于非癌周肝。与其它２种ＨＢＶ抗原不同,ＨＢｘＡｇ表达在细胞类型上有较明显的选择性,在肝小多角细胞（ＳＰＬＣ）、小细胞性不典型增生（ＳＣＤ）及ＨＣＣ中较强。与ＩＧＦⅡ、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ｃ－ｍｙｃ和ＥＧＦ－Ｒ表达进行的对照研究表明ＨＢｘＡｇ与ＩＧＦⅡ和ｃ－ｅｒｂＢ－２这２种ＨＣＣ发生相关基因的表达关系密切。ＰＣＮＡ染色结果显示ＨＢｘＡｇ阳性组织的细胞增殖活性显著高于ＨＢｘＡｇ阴性组织。我们的结果还表明ＨＢｘＡｇ表达与肝细胞不典型增生的发生和进展有关、提出ＨＢＶＸ基因可能通过其表达产物（ＨＢｘＡｇ）首先激活ＩＧＦⅡ、ｃ－ｅｒｂＢ－２基因,继而引起显著的ＳＰＬＣ增生和ＳＣＤ而参与ＨＣＣ发生的．     

新型HCV EIA诊断试剂盒的研制

丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因组结构区核壳蛋白（Ｃ）区抗原、膜蛋白Ｅ１和Ｅ２区抗原,以及非结构区ＮＳ３－ＮＳ５区抗原的区段,已经在原核细胞中获得有效的表达。同时,相应区段中的优势抗原表位肽也经化学合成法大规模地制备。ＨＣＶ基因组上各区段抗原性的分析发现,由Ｃ区和ＮＳ３区分别编码的Ｃ抗原和Ｃ３３ｃ抗原是ＨＣＶ基因组上两个优势抗原区段。其相应的抗体出现早（感染后６周可检出抗Ｃ３３ｃ抗体）,阳转率高（约９９％阳性检出率）,特异性和重复性均优于其它区段抗原。以中国人ＨＣＶ的Ｃ３３ｃ重组蛋白和分支状合成肽ＭＡＰ－Ｃ－１９为复合抗原,研制了适合我国抗ＨＣＶ抗体检测的新型丙型肝炎病毒酶免疫测定（ＨＣＶＥＬＡ）诊断试剂盒。它同当代美国Ａｂｂｏｔｔ／ＵＢＩＨＣＶＥＬＡ诊断试剂的符合率约９８％,同加拿大ＹＥＳ公司ＨＣＶＥＩＡ诊断试剂的符合率约９７．８％,阳性检出率提高了约２％,３次重复性达１００％,表明其特异性、敏感性和重复性均达到了当代第二代ＪＣＶＥＬＡ诊断试剂的水平。我国人群中抗ＨＣＶ抗体的分布情况为：正常人群的检出率１％－２％;外科类住院病人检出率约２８．８％;肝炎患者抗ＨＣＶ阳性率为３４．４％,慢活肝、肝硬化和重症肝炎患者     

乙型肝炎病人重叠感染丙型肝炎的评价

应用ＥＬＩＳＡ和ＰＣＲ法检测５０２例乙肝病人血清,４０１例ＨＢｓＡｇ阳性血清中,有１１４例（２８．４％）抗－ＨＣＶ和ＨＣＶＲＮＡ双项阳性,２５例（６．２％）ＨＣＶＲＮＡ单项阳性;２１例（５．２％）抗－ＨＣＶ单项阳性。将ＨＢｓＡｇ乙肝病人分成ＨＢＶＤＮＡ,ＨＢｅＡｇ阳性组和ＨＢＶＤＮＡ,ＨＢｅＡｇ阴性组。前者抗－ＨＣＶ阳性率为１１．６％～２０．５％,ＨＣＶＲＮＡ阳性率为１６．２％～２０．５％。后者抗－ＨＣＶ阳性率为２０．２％～５５．６％,ＨＣＶＲＮＡ阳性率为２３％～６０．３％。结果说明长期携带ＨＢＶ者和慢性乙肝病人均可重叠ＨＣＶ感染。ＨＢＶＤＮＡ阳性组抗－ＨＣＶ和ＨＣＶＲＮＡ阳性率明显高于ＨＢＶＤＮＡ阳性组     

人原发性肝内胆管细胞癌中HCV RNA及其NS3区抗原的分布及意义

应用原位分子杂交及免疫组分方法,使用地高辛标记ＨＣＶ５’非编码区探针及抗ＨＣＶ ＮＳ３区Ｃ３３ｃ单克隆抗体,对３５例人原发性肝内胆管细胞癌（ＰＩＣ）和癌旁肝组织的ＨＣＶ ＲＮＡ及其ＮＳ３抗原进行检测结果发现ＨＣＶ ＲＮＡ在ＰＩＣ中的阳性率为８３％,ＨＣＶ ＲＮＡ定位于癌细胞浆中,个别病例并在淋巴细胞、肝窦内皮细胞和枯否氏细胞中发现阳性信号。ＨＣＶ ＮＳ３区Ｃ３３ｃ抗原在ＰＩＣ的阳性率为８９％,阳性     

两例丙型肝炎病毒(HCV)和乙型肝炎病毒(HBV)重叠感染者的HCV核心区cDNA序列分析

从临床肝病患者中选择两例ＨＣＶ和ＨＢＶ重叠感染者ＨＳＱ和ＳＺＨ,他们血清中的生化指标丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）持续异常,肝活检病理示有严重的肝损伤。在ＡＬＴ异常期,血清学检测结果为ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ阳性,抗ＨＣＶＩｇＧ（包括Ｃ２２、Ｃ３３ｃ）阴性,但套式ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ阳性,核心区ｃＤＮＡ序列分析发现该区有１个密码子（ＧＧＣｎｔ３８５—３８７）缺失,对应缺失的氨基酸是甘氨酸（ＧＬＹ）,从血清学检测和序列分析结果推测,在ＨＣＶ和ＨＢＶ重叠感染中,ＨＢＶ和ＨＣＶ均可处于持续复制状态,抗ＨＣＶＩｇＧ抗体阴性可能是ＨＣＶ的多蛋白前体翻译和病毒颗粒装配受到ＨＢＶ干扰的结果。     

用套多聚酶链反应技术监测乙型肝炎病毒的母婴垂直传播

用套式多聚酶链反应（Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）技术对１６９对ＨＢｓＡｇ及ＨＢｓＡｇ／ＨＢｅＡｇ阳性孕妇及其新生儿外周血清进行了ＨＢＶ－ＤＮＡ检测,１０３对ＨＢｓＡｇ阳性孕妇及其新生儿外周务中ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为７２．８％和３３．０％;６６对ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ双阳性的孕妇及其新生儿外周血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为８６．４％和４３．９％,对５５例ＨＢｓＡｇ及ＨＢｓＡｇ／ＨＢｅＡｇ阳性产妇产后     

抗丙肝病毒核心抗原单克隆抗体的研制与初步鉴定

用基因工程重组技术获得的丙肝病毒（ＨＣＶ）核心蛋白抗原与鼠血清白蛋白交联后免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,用杂交瘤技术成功地建立了４株稳定分泌抗核心抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞,试验结果表明,该４株ＭｃＡｂｓ与免疫抗原及核心区Ｃ３３肽、ＣＰ９、ＣＰ１０抗原有较强的抗原－抗体反应,与ＨＣＶ ＮＳ３、ＮＳ４、ＮＳ５无反应,在竞争ＥＬＩＳＡ中,对ＨＣＶ－ＩｇＧ阳性血清有较好的抑制作用。４株ＭｃＡｂｓ中３株为ＩｇＧ２     

用套式多聚酶链反应技术监测乙型肝炎病毒的母婴垂直传播

用套式多聚酶链反应（Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）技术对１６９对ＨＢｓＡｇ及ＨＢｓＡｇ／ＨＢｅＡｇ阳性孕妇及其新生儿外周血清进行了ＨＢＶ－ＤＮＡ检测。１０３对ＨＢｓＡｇ阳性孕妇及其新生儿外周血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为７２．８％和３３．０％;６６对ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ双阳性的孕妇及其新生儿外周血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为８６．４％和４３．９％。对５５例ＨＢｓＡｇ及ＨＢｓＡｇ／ＨＢｅＡｇ阳性产妇产后的初乳进行了ＨＢＶ－ＤＮＡ检测,结果ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率为３６．４％。结果表明ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ双阳性的孕妇及其新生儿外周血清ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率较ＨＢｓＡｇ单阳性的孕妇及其新生儿要高,其初乳中ＨＢＶ－ＤＮＡ的检出率也高。还对１０５例注射了乙肝疫苗及高价乙肝特异性免疫球蛋白的６月龄婴儿的外周血清进行了ＨＢＶ－ＤＮＡ检测,结果有２３例阳性。     

肝癌中HBV和HCV基因和抗原的分布及意义

采用原位分子杂交方法检测HCV RNA及HBV X基因;采用免疫组织化学方法研究HCV核心抗原,非结构区C33c抗原及HBxAg在肝细胞肝癌中的定位及分布。结果表明（1）HCV RNA、HBV X基因在肝细胞肝癌组织检出率分别为40％（55／136）和82％（112／136）。HCV RNA定位于癌细胞的胞浆内,阳性细胞呈散在、灶状及弥漫分布三种形式;HBV X基因在肝癌细胞中的分布呈胞浆型、核型及核浆型,阳性细胞也呈上述三种分布形式;（2）HCV C33c抗原、核心抗原在肝细胞肝癌中的阳性率为81％（133／164）及86％（141／164）。C33c抗原定位于癌细胞及肝细胞的浆内;核心抗原毁定位于癌细胞核中,又可定位于胞浆中。C33c抗原阳性细胞以灶状分布为主;而核心抗原阳性细胞在癌组织以弥漫核阳性常见,在癌旁肝组织以胸浆阳性为主;（3）HBxAg在肝细胞肝 癌中的检出率为75％（123／164）,C33c和HBxAg二者同时阳性占63％（103／164）。HCV感染在我国肝细胞肝癌中比较普遍,HCV和HBV重叠感染占相当比例,可能在肝细胞肝癌的发生中起着重要作用。     

慢性肝炎中乙型和丙型病毒混合感染的重症化研究

在慢性肝炎中,乙、丙型病毒性肝炎混合感染相当多见,可使肝炎慢性化、重症化,肝组织损伤加重,肝硬化(LC)和肝癌(HCC)发生率增加[1]。本文应用血清学和分子生物学方法对196例肝病患者的血清进行检测,初步探讨了乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)、丙型肝类病毒(Hepatitis C virus,HCV)的复制状况以及两者间的相互作用与预后的关系。1材料和方法1.1病例受检的196例病例均为2004年1月至2005年7月我院住院及门诊病人,男149例,女47例,年龄15~82岁,其中慢性肝炎(CH)患者139例,肝硬化(LC)患者42例,肝癌(HCC)患者15例。所有病例诊断符合…     

Small rodent models of hepatitis B and C virus replication and pathogenesis

The narrow host range of infection supporting the long-term propagation of hepatitis B and C viruses is a major limitation that has prevented a more thorough understanding of persistent infection and t...     

西伯利亚旱獭中类人乙肝病毒的研究

对111份西伯利亚旱獭血清标本进行血清学,形态和组织病理学检测,HBsAg阳性22份,阳性率19.8％;抗-HBs1份,阳性率0.9％;HBV-DNA核酸杂交,阳性斑点16份,阳性率14.4％。IEM观察在3份标本中发现以22—24nm球形颗粒为主,其中有42—45mm的Dane样颗粒。20.7％的肝脏标本有组织病理改变,其中19份为急性肝类,4份为慢性肝炎。超薄切片肝细胞核内有20nm左右的HBeAg颗粒,结果进一步证实我国西伯利亚旱獭中有嗜肝病毒感染。     

丙型肝炎病毒基因组C区、NS3区、NS4区基因的融合、表达及初步应用

通过PCR技术从HCV全长基因组中扩增并克隆到Core区、NS4区的部分优势表面抗原肽的基因和C33a基因。再将它们以Core\,CC3c\,NS4的顺序和C33c、NS4的顺序分别拼接融合成融合抗原CCN、CN。片段之间以Gly-Gly-Gly-Gly柔性连接肽连接。经核苷酸序列分析表明,拼接点序列正确。将融合抗原CN、CCN基因分别克隆至T7启动子控制下的表达质粒PET24(a)+,PET22(b)+中,转化至大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导可高表达分子量约为43kD、58kD的融合抗原,表达产物以包涵体形式存在。表达产物经Ni²⁺IDA亲和柱纯化后,并对融合抗原CN、CCN的抗原性做了初步的鉴定。     

人肝癌细胞基因组中HBV DNA的整合与c-fos、p53基因表达之间的关系

为了探讨HBVDNA、c-fos和p53在肝癌发生中的作用及其关系。利用PCR技术和免疫组化ABC法,检测了肝癌基因组中HBVDNA的整合、c-fos和突变p53的表达。HBVDNA整合率为67%,C-FOS蛋白阳性率为67%,突变P53蛋白阳性率为58%。HBVDNA整合与c-fos激活、p53突变有显著的一致性(P＞0.05;P＞0.05),c-fos激活与p53突变之间呈负相关,但无显著意义(r=-0.2816,P＞0.05)。HBVDNA的整合可能引起c-fos的激活和/或p53的突变,从而导致肝癌的发生。     

Expression of HBsAg and HBcAg in liver tissue: correlation with disease activity.

The patterns of Hepatitis B surface antigen (HBsAg) and Hepatitis B core antigen (HBcAg) expression were studied in liver biopsies taken from 41 patients with chronic HBV disease. Immunohistochemical methods were used on deparaffinized sections for the identification of HBsAg and HBcAg in liver tissue. Twenty-one of the 41 cases (51.2%) were classified as inactive liver disease and 20 (48.8%) as active liver disease. In liver biopsies with inactive disease, HBsAg demonstrated varying types of cytoplasmic expression in a rather high number of hepatocytes distributed mainly in clusters, while HBcAg was rarely expressed in liver nuclei. On the other hand, in liver biopsies with active disease HBsAg was characterized by a diffuse cytoplasmic expression in a few discrete hepatocytes, while HBcAg was expressed in the nuclei of the hepatocytes in 70% of the cases and in half of the positive cases it was also detected in the cytoplasm. In conclusion, HBsAg expression in a few scattered hepatocytes correlates with active liver disease and positive HBcAg, while varying HBsAg cytoplasmic expression in a rather high number of clustered hepatocytes is related to chronic inactive liver disease and negative expression of HBcAg.