54kD钙结合蛋白对血小板膜磷脂酶A2的影响

用钙离子沉淀和柱层析的方法从猪血小板中分离纯化到了一个分子量为５４ｋＤ、具有Ａｎｎｅｘｉｎ样生物学作用的钙结合蛋白,并用对钙离子有高度特异亲和力的偶氮胂试剂确定了该蛋白质具有钙结合能力。为了研究５４ｋＤ钙结合蛋白对猪血小板膜磷脂酶Ａ２的作用,我们用密度梯度离心方法制备了猪血小板膜,并用其作为酶和底物的材料,用游离脂肪酸的微量显色法建立了测定猪血小板膜结合的ＰＬＡ２活性的方法。我们的实验结果表明：５４ｋＤ钙结合蛋白在反应体系钙离子浓度低于１ｍｍｏｌ／Ｌ时,对膜结合的ＰＬＡ２具有激活作用;在钙离子大于１ｍｍｏｌ／Ｌ时;对膜结合的ＰＬＡ２具有抑制作用。并且抑制作用不随底物浓度的升高而降低．     

血小板衍生生长因子

血小板衍生生长因子(PDGF)为一种耐热的阳离子多肽,当血小板粘附于血管损伤部位时,PDGF从血小板а颗粒中释放出来,作用于附近的结缔组织细胞,使其分化与增殖,从而促进损伤的修复和愈合。PDGF还通过其促细胞生长的作用、对动脉平滑肌细胞的化学趋化性,以及刺激平滑肌细胞膜表面低密度脂蛋白受体活性,从而在诱导动脉粥样硬化斑块形成过程中占有重要地位。最近发现,PDGF与肿瘤密切相关。     

血小板衍生生长因子对细胞的生物学效应

PDGF是血小板主要成分,是强有力的促细胞分裂剂,刺激多种类型细胞的分裂和增殖,具有广泛的细胞生物学效应。本文讨论了PDGF的作用机制,认为与酪氨酸激酶有关;简述了PDGF的细胞效应;对影响细胞周期的因素进行了探讨,并提出了今后对PDGF研究的可能方向。     

竹叶青蛇毒血小板聚集剂的分离纯化及生化特性

经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶过滤和ＦＰＬＣＭｏｎｏＱ阴离子交换柱层析及Ｓｕｐｅｒｏｓｅ－１２凝胶过滤,从竹叶青蛇的蛇毒中纯化到一个能诱导人血小板聚集的均一组分．经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其分子量为６８０００左右．等电点为４．３．测定了它的氨基酸组成,对它活化血小板的作用机理进行了初步研究,结果表明它是一种强的血小板激动剂．     

竹叶青蛇毒血小板聚集剂的分离纯化及生化特性

经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶过滤和ＦＰＬＣ Ｍｏｎｏ Ｑ阴离子交换柱层析及Ｓｕｐｅｒｏｓｅ－１２凝胶过滤。从竹叶青蛇的蛇毒中纯化到一个能诱导人血小板聚集的均一组分。经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其分子量为６８０００左右。等电点为４．３。测定了它的氨基酸组成。对它活化血小板的作用机理进行了初步研究,结果表明它是一种强的血小板激动剂。     

Beta proteobacterium sp.T1菌株产壳聚糖酶的分离纯化

目的:分离纯化Beta proteobacterium sp.T1菌株所产的壳聚糖酶.方法:采用(NH4)2SO4(20%～70%)分级盐析、阴离子交换树脂DEAE Cellulose 52柱层析、SephadexG-100柱层析技术进行分离纯化,采用SDS-PAGE鉴定酶的纯度、分子量.结果:经DEAE Cellulose 52柱层析,壳聚糖酶纯化了13.19倍;经Sephadex G-100柱层析,壳聚糖酶纯化了26.32倍.结论:纯化后的酶经SDS-PAGE鉴定已达到电泳纯,分子量29.5kDa.     

猪胸腺末端脱氧核苷酰转移酶的分离纯化及性质的研究

 本文报道了一种较简便的从猪胸腺中分离纯化末端脱氧核苷酰转移酶(TdT)的方法。经一次磷酸纤维素柱层析,使TdT与DNA聚合酶分离;经三次柱层析,可获得SDS-电泳纯,分子量约60K的产品。其酶学性质与牛胸腺TdT相似。     

大鼠肺细小动脉平滑肌细胞培养新方法的建立及血小板衍生因子对其增殖迁移的影响

目的：建立一种操作简单、实验仪器要求低的大鼠肺细小动脉平滑肌细胞（PASMCs）分离和培养的方法,并且探索血小板衍生因子（PDGF）介导的增殖、迁移的情况。方法：向右心注射铁及琼脂糖,利用琼脂糖能同时粘附血管内皮细胞、平滑肌细胞及铁粉,再结合胶原酶I的消化,通过磁力架吸引铁,特异性地分选出带血管的肺组织,经过3~4周左右的培养及纯化,得到肺细小动脉平滑肌细胞。用倒置相差显微镜观察细胞形态,免疫细胞化学法和免疫荧光染色法进行α-平滑肌肌动蛋白鉴定。MTT实验和划痕实验检测PDGF诱导的肺动脉细小平滑肌细胞的增殖和迁移。结果：分离后第14天、第21天及传代后进行鉴定,均表明分离培养的细胞为PASMCs。MTT结果表明,与不加PDGF组相比,PDGF增殖明显增加（P<0.05）。划痕实验结果显示PDGF刺激组比不刺激组迁移显著增多。结论：本方法分离培养大鼠的PASMCs,操作方便,实验仪器要求低。PDGF能够促进肺细小动脉平滑肌细胞的增殖、迁移。     

血小板衍生生长因子受体结构与功能的研究

血小板衍生生长因子受体(platelet-derived growth factor receptor, PDGFR),包括PDGFRα和PDGFRβ,属于第三类受体酪氨酸激酶家族.它们参与血管再生和创伤修复等重要生理过程,并能够促进肿瘤细胞的增殖、迁移与存活.目前,在多种肿瘤、纤维化以及心血管疾病中均检测到高表达或突变的PDGFR受体以及高表达的血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factor, PDGF), PDGF/PDGFR已成为基础生物学与转化医学研究所关注的重要靶点.本文总结了当前关于PDGFR的结构与功能研究,对PDGF/PDGFR信号传导机制以及PDGF/PDGFR信号异常与疾病的关系进行了梳理,论述了针对该信号通路的多种靶向药物的治疗机制,并对今后研究方向进行了展望.     

旋毛虫基因重组抗原的纯化

根据旋毛虫基因重组抗原蛋白的特点,筛选出裂解处理工程菌菌体的方法,并探索了用ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－３００（ＨＲ）柱层析纯化重组蛋白的程序。用本法处理和纯化后,重组蛋白的纯度可达９０％以上。所纯化的三种重组抗原蛋白均能与猪旋毛虫病血清发生特异性反应而不与正常猪血清和猪囊虫病血清反应,其中以重组蛋白ＲＰ３４的特异性最强,ＲＰ３７较弱,ＲＰ４６介于两者之间。研究结果表明,本纯化方法易于操作、设备简单和特异性蛋白回收率高,是处理和纯化旋毛虫基因重组抗原的最佳程序。     

PDGF 及其受体介导的信号转导与妇科肿瘤关系研究进展

血小板衍生生长因子(Platelet-Derived Growth Factor,PDGF)是一类与生长、发育、癌症发生等密切相关的细胞因子,由多种细胞分泌产生,具有广泛的生物学活性,涉及多种疾病.目前关于PDGF分子结构、表达调控、生物学活性等已有较为深入的研究,本文在介绍上述研究成果的同,对PDGF在妇科肿瘤中的病理生理作用进一步综合分析.PDGF参与卵泡的发生;PDGF与子宫肌瘤、宫颈、卵巢癌等疾病相关联.PDGF在妇科肿瘤的发生、发展中起着重要的作用.     

鸡胚白细胞转移因子的制取及性质研究

本试验以鸡胚为原料,采用冻融法得到含有转移因子（ＴＦ）的可透析白细胞提取物（ＤＬＦ）,经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５凝胶柱层析分离纯化得到ＴＦ溶液。对其性质及生化指标与猪脾ＴＦ作了对照试验。结果表明,鸡胚ＴＦ与猪脾ＴＦ在紫外、红外吸收光谱、电泳性质等方面均有相关性。     

huGM-CSF(9-127)-IL-6(29-184)融合蛋白的复性及纯化研究

利用Q Sepharose H.P.离子交换柱层析在8mol/L尿素变性条件下对huGM-CSF(9-127)-IL-6(29-184）融合蛋白进行初步纯化,然后再利用Sephacryl S-200分子筛柱层析复性及纯化后获得目的蛋白,其纯度达到95％以上。该纯化方案成功地解决了稀释复性或透析复性产物在进行Q Sepharose H.P.离子交换柱层析时目的蛋白不稳定而沉积于柱上的问题,获得了较好的复性效果,复性率达到80％以上。使用该纯化方案,1天内便可基本完成重组蛋白的复性及纯化过程,而且也便于扩大。     

一种简便纯化肾钠钾ATP酶的方法

本文描述了一个简便的从猪肾外髓迅速纯化(Na~ -K~ )ATP酶的方法。避免了超离心机的使用。所得制剂的比活力为440～600微克分子磷/毫克蛋白/小时,37℃。主要纯化过程包括用两价阳离子Mg~( )沉淀微粒体组份,SDS溶解微粒体杂蛋白及Sepharose 2B柱层析。     

一种简便纯化肾钠钾ATP酶的方法

本文描述了一个简便的从猪肾外髓迅速纯化(Na~ -K~ )ATP 酶的方法。避免了超离心机的使用。所得制剂的比活力为440～600微克分子磷/毫克蛋白/小时,37℃。主要纯化过程包括用两价阳离子Mg~( )沉淀微粒体组份,SDS 溶解微粒体杂蛋白及Sepharose 2B 柱层析。     

huGM-CSF(9-127)-IL-6(29-184)融合蛋白的复性及纯化研究

利用Q Sepharose H.P.离子交换柱层析在8mol/L尿素变性条件下对huGM-CSF(9-127)-IL-6(29-184)融合蛋白进行初步纯化,然后再利用Sephacryl S-200分子筛柱层析复性及纯化后获得目的蛋白,其纯度达到95%以上。该纯化方案成功地解决了稀释复性或透析复性产物在进行Q Sepharose H.P.离子交换柱层析时目的蛋白不稳定而沉积于柱上的问题,获得了较好的复性效果,复性率达到80%以上。使用该纯化方案,1天内便可基本完成重组蛋白的复性及纯化过程,而且也便于扩大。     

八角莽草酸不同纯化方法的比较研究

利用重结晶、醇沉和柱层析等方法对八角莽草酸进行提取纯化,并比较了不同方法的纯化结果。结果表明:乙醇沉淀法的纯化效果明显,醇沉后进行硅胶柱或大孔树脂柱层析分离纯化莽草酸的效果都大为提高,纯度都达到82%以上。利用一种新的洗脱体系-乙酸乙酯和甲醇的混合溶剂,用于硅胶柱层析法纯化莽草酸,能将莽草酸与其近似物很好地分离,纯度达到94.6%,纯化的效果优于大孔树脂柱。最终确定了高效提取纯化莽草酸的工艺流程:微波提取——醇沉法初步纯化——柱层析法进一步纯化。     

Matrex Cellufine Sulfate在重组HBsAg纯化中的应用

建立纯化重组CHO细胞HBsAg的新工艺。将含有HBsAg的重组CHO细胞培养收获液,采用Butyl S Sepharose疏水作用柱层析、Matrex Cellufine Sulfate亲和柱层析、Sepharose 4FF凝胶过滤柱层析进行纯化,得到HBsAg纯品,该HBsAg经检定合格。HBsAg回收率为72％。     

猴头多糖分离纯化的初步研究

目的：确定适合于猴头多糖分离纯化的方法。方法：以液体发酵生产的猴头菌丝为材料,提取猴头菌丝多糖进行分离纯化,以得到多糖纯品。结果：猴头菌丝粗多糖采用Sevag法除蛋白的次数应该控制在5-8次,而且Sevag法除蛋白所得的HMP,经DEAE-纤维素柱层析初步纯化,多糖主要分布在蒸馏水洗脱部分,命名为HMPⅠ,其含量为67.5%;HMPⅠ经Sephadex G-100凝胶柱层析纯化,得到两个组分：HMPⅠa、HMPⅠb;HMPⅠa为多糖主要组分,含量为71.8%;HMPⅠa经纯度鉴定为多糖纯品。结论：DEAE-纤维素柱层析结合Sephadex G-100凝胶柱层析的纯化方法,可以获得猴头多糖纯品。     

猪血小板外廓蛋白（profilin）的分离纯化和鉴定

本文合成了一种聚脯氨酸亲和层析凝胶,并用这种凝胶纯化了猪血小板外廓蛋白。纯化的外廓蛋白在ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈单一蛋白带,分子量１４ｋＤ;在体外能显著抑制肌动蛋白聚合。