Hippo信号通路在颈动脉结扎所致大鼠动脉血管重构中的表达及其意义

目的:在建立大鼠血管重构模型基础上探讨Hippo信号通路在该模型中的表达及意义。方法:模型组(n=40)经颈部正中切口游离出左侧颈总动脉,用6-0不可吸收线在尽量靠近近心端处结扎,完全阻断血流。对照组(n=20)仅将手术线穿过颈总动脉而不结扎,闭合切合。14 d后处死所有动物,经原手术路径分离颈总动脉,收集结扎处至远心端的动脉。用HE以及MASSON染色观察血管形态以及纤维化,免疫组织化学染色法检测颈动脉中α-肌动蛋白(α-MSA)和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,Western blot检测yes相关蛋白(YAP),PDZ结合基序的转录辅激活子(TAZ),TEAD1,Bax,Bcl-2的表达。结果:与对照组相比,造模组HE染色提示血管重构明显,新生内膜/中膜比例明显增加,MASSON染色提示纤维化明显增加;免疫组织化学染色法提示造模组血管α-MSA及PCNA表达明显增加; Western blot提示造模组血管YAP,TAZ,TEAD1,Bcl-2表达增加,而Bax表达降低,Bax/Bcl-2蛋白比例明显降低。结论:本研究成功建立颈动脉结扎介导的大鼠血管重构模型,另外证明Hippo信号通路在颈动脉结扎介导的大鼠血管重构模型中明显激活,以及可能介导增殖、凋亡相关的Bax/Bcl-2比值的改变,进而参与平滑肌细胞增殖促进血管重构。     

重组人促红细胞生成素纯化工艺的优化

采用堆积床生物反应器,用无血清培养基培养分泌重组人促红细胞生成素（rhEPO）的工程细胞株ZK9703.所收集的上清,采用阴离子交换层析－反相层析－分子筛层析三步纯化工艺路线,分别用Q－Sepharose XL-C4-S-200（方法Ⅰ）和DEAE Sepharose FF-Source-S-200(方法Ⅱ）纯化3批产品,所得EPO纯度达98％以上,体外比活性大于1.3^10^5IU/mg。方法Ⅰ、方法Ⅱ纯化过程的EPO体外活性回收率分别为23.56%和28.57%。本纯化方法Ⅱ工艺纯化日程短,分离效果好,EPO体内、体外活性回收率较高,更适合于大规模生产重组人促红细胞生成素。     

耐高盐枯草芽孢杆菌XP合成球形纳米硒及其抑制草莓病原真菌生物活性

生物方法合成纳米材料具有低能耗、高安全性以及环境友好等优良特点,因而备受人们关注。利用细菌将硒酸盐或亚硒酸盐还原为单质硒,不仅可以降低硒毒性,而且还能获得价值更高的生物纳米材料。文中选用可耐受高盐环境胁迫的枯草芽孢杆菌亚种Bacillus subtilis subspecies stercoris strain XP构建生物模型,分别以LB液体培养基和亚硒酸钠为介质和底物 (电子受体),解析菌株XP合成纳米硒的基本规律。通过扫描电镜 (Scanning electron microscope,SEM) 观察、X射线能谱分析 (X-ray energy dispersive spectral analysis,EDAX)、X射线衍射 (X-ray diffraction,XRD) 分析、傅里叶红外变换光谱 (Fourier transform infrared spectroscopy,FTIR) 技术对合成的纳米硒进行物理化学表征分析,同时选用草莓枯萎、红叶、紫斑病病原真菌对其抗菌活性进行分析。结果表明,菌株XP介导合成的单质硒为球形纳米颗粒 (Selenium nanoparticles,SeNPs),其生成量与反应时间呈正相关 (0–48 h),且细胞形态未发生褶皱或破损等变化 (耐受力强);SeNPs为非晶态,粒径范围在135–165 nm,表面元素组成以Se为主,同时存在C、O、N、S等有机元素;颗粒表面包裹生物大分子物质,-OH、C=O、N-H、C-H等官能团与SeNPs稳定性和生物活性密切相关;高浓度纳米硒对枯萎、红叶、紫斑病病原真菌均有显著抑制活性 (P<0.05),其中对草莓红叶病与枯萎病病原真菌的抑制活性明显优于对紫斑病病原真菌的抑制活性。总而言之,菌株XP不仅耐受高盐胁迫能力强,同时还可介导合成生物SeNPs,其合成的纳米硒颗粒具有良好的稳定性和生物活性,在草莓病害防治以及绿色富硒草莓种植等领域具有潜在的应用价值。     

内感受对成瘾行为的诱导及其岛叶的调控机制

内感受是机体对自身生理状态的感觉.近年来,越来越多的研究证据表明,内感受可以调控成瘾行为,岛叶是其发挥作用的重要神经基础之一.目前,对岛叶作用机制的研究正受到高度重视.本文从岛叶的基本结构和功能出发,结合近几年来岛叶调控成瘾行为、行为抑制以及情感决策的重要发现,讨论岛叶在成瘾发生及发展过程中的可能作用及其机制,并根据已有的实验证据,试图提出较为合理的研究展望,以推动相关神经环路和神经化学机制研究的深入.     

亚热带沟叶结缕草草坪土壤呼吸

随城市化进程加速,城市草坪生态系统释放CO2将对区域碳循环产生重要影响。采用LI-8100开路式土壤碳通量测量系统对亚热带沟叶结缕草草坪（Zoysia matrella）土壤呼吸进行为期1a的定位研究,结果表明：草坪土壤呼吸季节动态呈现为单峰曲线,全年土壤呼吸速率的变化范围在38.99—368.50 mg C?m-2?h-1之间,年通量为1684 g C?m-2?a-1。土壤温度、总生物量、以及二者的交互作用对土壤呼吸季节变化的解释程度接近,分别为89%、88%和90%,但仅二者的交互作用进入土壤呼吸的逐步回归方程,表明草坪土壤呼吸的季节变化主要受土壤温度与总生物量共同驱动。春末修剪草坪对土壤呼吸速率没有显著影响。在秋末无雨时期,浇水后1—2d土壤湿度对土壤呼吸的促进作用可掩盖同期降温的影响,使土壤呼吸速率显著升高。     

大鼠肺细小动脉平滑肌细胞培养新方法的建立及血小板衍生因子对其增殖迁移的影响

目的：建立一种操作简单、实验仪器要求低的大鼠肺细小动脉平滑肌细胞（PASMCs）分离和培养的方法,并且探索血小板衍生因子（PDGF）介导的增殖、迁移的情况。方法：向右心注射铁及琼脂糖,利用琼脂糖能同时粘附血管内皮细胞、平滑肌细胞及铁粉,再结合胶原酶I的消化,通过磁力架吸引铁,特异性地分选出带血管的肺组织,经过3~4周左右的培养及纯化,得到肺细小动脉平滑肌细胞。用倒置相差显微镜观察细胞形态,免疫细胞化学法和免疫荧光染色法进行α-平滑肌肌动蛋白鉴定。MTT实验和划痕实验检测PDGF诱导的肺动脉细小平滑肌细胞的增殖和迁移。结果：分离后第14天、第21天及传代后进行鉴定,均表明分离培养的细胞为PASMCs。MTT结果表明,与不加PDGF组相比,PDGF增殖明显增加（P<0.05）。划痕实验结果显示PDGF刺激组比不刺激组迁移显著增多。结论：本方法分离培养大鼠的PASMCs,操作方便,实验仪器要求低。PDGF能够促进肺细小动脉平滑肌细胞的增殖、迁移。     

GAP-43，Netrin-1，Collapsin-1和Neuropilin-1在出生后小鼠小脑中的动态表达

GAP-43,netrin-1,collapsin-1和neuropilin-1被认为在成网络分布的神经联系中发挥重要的作用．在年幼的啮齿类动物中,小脑包含5种不同的集中分布层：白质、内颗粒细胞层(IGL)、浦肯野氏细胞层(PCL)、分子层(ML)和外颗粒细胞层(EGL)．与浦肯野氏神经元在出生前产生这一点不同的是,EGL中的细胞在出生后产生,它们接受从前脑olivary核团发出的攀援纤维的主要神经投射,以及从内颗粒细胞发出的平行纤维的神经投射．这些神经投射主要在出生后的前3个星期内建立,同时还有浦肯野氏细胞的发育和成熟．而GAP-43,netrin-1,collapsin-1和neuropilin-1在出生后小脑发育的潜在作用仍然不清楚．为了更加清楚地探讨上述问题,检验了GAP-43,netrin-1,collapsin-1和neuropilin-1的mRNA与蛋白质在出生后5,10,20天和成年小鼠小脑中的表达情况．研究结果显示,这4种分子在小鼠出生后的小脑中有不同的时间和空间表达形式,这些结果与出生后发育和成年期间的轴突发生、延伸以及突触形成都有关联．通过免疫组织化学双标染色,发现小鼠出生后10天的小脑中,GAP-43阳性的浦肯野氏细胞也显示netrin-1或collapsin-1阳性,并且collapsin-1阳性的细胞也对 netrin-1 阳性．上述研究结果证明这4种分子可能参与了小脑的出生后发育．     

一种用作阴性对照的siRNA可诱导人K562细胞向红系分化

我们发现,一种在RNA干扰实验中用作阴性对照的商业化siRNA具有明显的诱 导人慢性髓性白血病K562细胞系向红系方向分化的作用.它表现为K562细胞瞬时转 染该siRNA后,红系分化的特异表面标志CD235及ε 、γ 和β 珠蛋白的表达升高,GATA-2的表达降低,细胞增殖速度减慢,软琼脂克隆形成率降低,并且此 过程不伴随细胞凋亡. 而生物信息学分析显示,该siRNA序列与目前所有已知人类 基因均无明显同源性.研究结果提示,该siRNA不适于用作红系分化实验中的阴性 对照. siRNA的作用远比人们目前所知的要复杂得多,siRNA的脱靶效应应当引起 研究者的足够重视,在RNA干扰实验中阴性对照siRNA的选择会极大地影响对实验 结果的判读.     

两种对云斑天牛有林间诱捕效果的植物源物质

【目的】为了探明对云斑天牛Batocera horsfieldi(Hope)有效的引诱物质。【方法】研究了云斑天牛对白蜡树、山核桃、黄山栾树和野蔷薇4种寄主植物的室内取食偏好性,采用动态顶空吸附法结合气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)分析了植物挥发物成分,然后利用触角电位-气相色谱联用技术(GC-EAD)测定植物挥发物对云斑天牛触角的反应,最后对相关化合物进行了野外诱捕试验。【结果】结果表明:云斑天牛最喜欢取食的寄主植物是白蜡树,其次是黄山栾树和山核桃,野蔷薇没有取食;寄主植物挥发物成分中,萜烯类和烷烃类等物质占主要成分,不同寄主植物的挥发物中多种成分存在显著性差异;壬醛引起了云斑天牛显著的GC-EAD反应;最后,林间诱捕试验结果显示,顺-3-己烯醇和壬醛分别在林间诱捕到了一定量的云斑天牛,并且都是雄虫,同时顺-3-己烯醇还诱捕到了星天牛Anoplophora chinensis(Forster)。【结论】试验结果说明,顺-3-己烯醇和壬醛是两种对云斑天牛具有林间引诱效果的植物源物质,同时,顺-3-己烯醇是云斑天牛和星天牛共享的植物源引诱物质。     

子宫切除对绝经前妇女卵巢功能的影响

目的:通过比较行子宫切除保留卵巢与未进行子宫切除绝经前妇女的卵巢功能,评估子宫切除后卵巢功能早衰风险.方法:选取解放军总医院妇产科2004～2007年收治的120例因患女性生殖系统良性疾病接收全子宫切除保留双侧卵巢的妇女为手术组,及135例未行子宫切除的绝经前妇女为对照组,每年对纳入对象进行血清检测以及问卷调查,详细记录数据4年.以血清FSH＞40 U/L为发生卵巢功能衰退,以危险率描述发生卵巢功能早衰的风险,利用COX比例风险模型进行统计学分析.结果:接受全子宫切除保留双侧卵巢的妇女中有20例(16.67％)发生卵巢功能早衰,对照组有15例(11.11％)发生卵巢功能早衰,具有统计学差异.与对照组相比,手术组发生卵巢衰竭的HR值1.92 (95％ CI 1.29～2.86,P＜0.01),其中单纯子宫切除的患者发生卵巢衰竭的HR值1.74 (95％ CI 1.14～2.65,P＜0.05),全子宫并附带单侧卵巢切除的妇女发生卵巢早衰的HR值2.93 (95％ CI 1.57～5.49,P＜0.01).结论:绝经前子宫切除可能增加发生卵巢功能早衰的风险,但其导致卵巢功能早衰的原因尚不明确,手术或子宫基础疾病均可能参与了卵巢功能早衰的发生.