两种新型培养细胞数量检测技术的探索

将SRB比色法和结晶紫比色法与MTT比色法与MTT比色法在96孔板培养HeLa细胞的数量及活力测量精确度和操作方法上进行了对比。试验结果显示：SRB比色法和结晶紫比色法的最佳检测波长均为490nm。最佳染液浓度分别为0.4%和0.25%。SRB比色法的检测精确度略逊于MTT法，结晶紫比色法与MTT法无显著差异。另外，此两种检测方法的操作过程更为简便，所需时间也较短，可在一定范围内取代MTT比色法。     

禾本红酵母Y－5对结晶紫、孔雀石绿的吸附

研究了培养时间、初始pH、温度对禾本红酵母Y-5吸附结晶紫、孔雀石绿的影响,并对吸附剂的解吸和循环利用等进行考察.结果表明： 在染料浓度为50 mg·L^-1、pH 7.0、摇床转速150 r·min^-1、30 ℃、吸附10 h时,红酵母对结晶紫、孔雀石绿的吸附率分别达峰值,为93.8%和87.7%;解吸后的菌体对结晶紫、孔雀石绿的吸附率分别为85.5%和78.5%,说明菌体对染料的吸附是可逆的,循环利用效果良好,菌体可再生和循环利用;禾本红酵母Y-5对结晶紫、孔雀石绿的脱色机理为吸附作用,染料多被吸附在红酵母表面的羟基（-OH）上,其吸附染料快速、高效、可逆,在染料废水处理上具有潜在的应用价值.     

Barr小体标本快速制备及鉴别法

国内外介绍了许多有关Barr小体标本的制备及染色方法,但操作过程都较繁杂.我认为作为学校实验课应以操作时间短,方法简便、标本清晰,保证学生有充足观察时间为原则.下面推荐一种结晶紫法,基本满足上述原则,且效果满意,具体操作如下:     

结晶紫溶液鞭毛染色法 郭恒彬

细菌的鞭毛是细菌的一种特殊结构,鞭毛染色常用硷性复红乙醇饱和液或结晶紫乙醇饱和液染色。对后者反复试验未能使鞭毛着色,分析染料的溶解度及配制时各染液混合后出现大量结晶紫沉淀物,考虑染液配制过程中损耗大量媒染剂使鞭毛     

SARS-CoV细胞空斑试验

目的建立适用于生物安全三级实验室操作的SARS．CoV空斑试验方法。方法SARS－CoVl0倍系列稀释接种Vero－E6细胞,用0．6％琼脂糖覆盖中性红着色（琼脂糖．中性红法）或覆盖1％甲基纤维素,4％甲醛固定,结晶紫染色（甲基纤维素－结晶紫法）,空斑计数。结果琼脂糖－中性红法病毒滴度为6．14Lg pfu／mL,甲基纤维素－结晶紫法病毒滴度为6．57Lg pfu／mL。结论二种空斑试验方法相比,病毒滴度无明显差异。甲基纤维素－结晶紫空斑试验法形成的空斑比琼脂糖－中性红法清晰、操作简单安全、结果可长期保存。     

温度对菌紫质结构转变的影响

测量了不同温度下菌紫质的紫外—可见及红外吸收光谱,比较天然与变性菌紫质的吸附等温线。证明菌紫质在80℃前的可逆结构转变表现为结晶晶格协同效应降低,部分芳香族氨基酸显露,蛋白质构象的微小变化使视黄醛微环境改变。100℃引起的结构改变为不可逆,此时菌紫质三、四级结构解体,分子链展开并重聚,二级结构也发生变化,出现β结构,同时还保留部出α-螺旋,视黄醛全部游离。并就菌紫质的高热稳定性能做了讨论。     

细菌脱色酶TpmD对三苯基甲烷类染料脱色的酶学特性研究

从嗜水气单胞菌DN322中分离纯化出能够对三苯基甲烷类染料结晶紫、碱性品红、灿烂绿及孔雀绿进行有效脱色的脱色酶,命名为TpmD。该酶的亚基分子量为29.4kDa,等电点为5.6。该酶催化上述4种三苯基甲烷类染料脱色反应的适合温度为40~60℃,适合pH范围为5.5~9.0。动力学参数测定结果显示TpmD对结晶紫、碱性品红、灿烂绿及孔雀绿的Km值分别为24.3、40.65、4.2、68.5μmol-1.L-1,Vmax值分别为19.6、74.1、82.8、115.6μmol.L-1.s-1。结晶紫为该酶的最适反应底物。TpmD催化的脱色反应依懒于NADH/NADPH及分子氧的存在,显示该酶属于NADH/NADPH依赖型的氧化酶类。这是国内外首次关于细菌中三苯基甲烷类染料脱色酶酶学性质的描述。     

胶红酵母JB401降解脱色三苯甲烷类染料

从烟梗中分离筛选得到1株能够对三苯甲烷类染料高效脱色的微生物,经ITS-5.8S rDNA分析鉴定为胶红酵母,命名为Rhodotorula mucilaginosa JB401。全波长扫描实验结果证实染料的脱色由胶红酵母降解结晶紫引起。为了提高R.mucilaginosa JB401脱色结晶紫的能力,通过单因素试验对R.mucilaginosa JB401的培养条件进行了优化,得出菌体生长24 h后以2%接种量接入初始pH为5的脱色培养基并在37℃摇床培养,可以取得最优脱色效果,此时脱色50、100和200 mg/L的结晶紫达到90%去除率分别需要3、6和14 h。此外,胶红酵母对温度和pH良好的适应性使其具有应用于工业废水处理的潜力。     

再力花残体活性炭的制备及对结晶紫的吸附

以多年生水生植物再力花残体为原料,磷酸为活化剂制备活性炭,其BET比表面积达1174.13 m2·g-1,微孔面积为426.99 m2·g-1,平均孔径为3.23 nm.考察了不同pH、结晶紫初始浓度、吸附时间和吸附温度下,活性炭对结晶紫的吸附性能.结果表明:吸附量基本不随pH变化;吸附过程主要分为快速吸附和慢速吸附2个阶段,符合伪二级动力学方程;在温度为293、303、313 K条件下,吸附过程更符合Langmuir等温吸附方程,最大吸附量分别为409.83、425.53和438.59 mg.g-1,且吸附是一个熵增的自发吸热过程.     

关于甘氨酸含量测定方法的研究

<正> 本文比较了目前国内外所报导的测定甘氨酸含量的三种方法即1.非水滴定法2.甲醛法3.凯氏定氮法实验结果表明: 1) 非水滴定法有着准确、迅速、操作简单等优点,只要掌握好正确观察终点颜色这一关键因素,就可以得到理想的结果。目前,我国结晶紫指示剂比α-萘酚苯甲醇指示剂较易得到,同时在非水滴定中大都是用结晶紫指示剂,因此,选用该指示剂比较合适。     

金溶胶基底的 SERS 增强效果的实验研究

本文以结晶紫作为探针分子,研究了以金溶胶膜、pH ＝6以及 pH ＝13的金溶胶溶液为活性基底的表面增强拉曼光谱的增强效果。采用化学还原法制备金溶胶,加入氢氧化钠改变其 pH 值,并以自组装法制备金溶胶膜。通过比较金溶胶膜、pH ＝6及 pH ＝13时金溶胶溶液的增强因子以及在这三种金溶胶基底上结晶紫的检测限,分析不同活性基底增强效果的差异。三种活性基底的增强因子分别可达到5．9×103、1．5×105、2．3×107,pH ＝13的金溶胶溶液有最佳的增强效果。以这三种金溶胶为基底对结晶紫进行表面增强拉曼光谱探测,可得到检测限为70．7 nmol／L、9．6 nmol／L、1．8 nmol／L。结果表明,金溶胶溶液的增强效果明显优于金溶胶膜,而通过改变金溶胶体系的 pH 值可以改变金纳米颗粒的聚合程度及对探测物的吸附特性从而获得更高灵敏度的活性基底。     

超低温含水生物样品电子显微镜技术

现代电子显微镜的分辨力已达到0.2nm,但用它观察生物结构,其分辨力几乎要低一个数量级。目前电镜观察生物结构的最好记录是对紫膜结构的研究,能显示1nm的规则结构,表明紫膜具有二维结晶性质。对无规则生物结构的观察,以核糖体为例,其分辨力只及3—5nm。因此,目前生物样品电子显微镜分析     

五种染色剂对台湾乳白蚁的染色效果

对于白蚁种群动态的研究可以利用多种不同颜色的染料作为标记物.为了寻找适用于台湾乳白蚁Coptotermes formosanus的标记物及其使用浓度,本文选取中性红、苏丹红Ⅳ、结晶紫、孔雀石绿以及天青Ⅱ五种染色剂作为标记物,分析测定了它们对台湾乳白蚁的染色效果.结果表明,浓度为0.2%中性红适用于估计种群数量;浓度分别为0.1%、0.2%和0.5%中性红,0.5%苏丹红,0.2%结晶紫,0.5%孔雀石绿以及0.1%天青Ⅱ均适合作为监测群体活动范围的标记物.     

茶多酚对大肠杆菌抑菌机理的研究

茶多酚(tea polyphenols,TP)是一种具有广谱抗菌作用的活性质,以大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)为研究对象,采用牛津杯实验研究茶多酚的最小抑菌浓度,并采用结晶紫实验、电导率测定、离子泄漏测定来分析TP对E.coli细胞膜通透性的影响。通过琼脂糖凝胶电泳分析TP对E.coli DNA的影响。结果显示,TP对E.coli的最小抑菌浓度为40μg/m L;结晶紫实验中,随着浓度的增大,OD590也随之增大;随着处理时间的增长,电导率随之增大,离子泄漏随之增多,说明TP可以作用于E.coli的细胞膜,能够改变其通透性。通过琼脂糖凝胶电泳分析可知TP处理后和空白对照组相比较,DNA条带出现变暗、拖尾现象,说明TP能够作用于E.coli的遗传物质DNA。     

东方栓孔菌在染料脱色中的应用及其脱色条件的优化

本研究利用东方栓孔菌(Trametes orientalis)菌株Cui 6300发酵所得的粗酶液,对刚果红、结晶紫、铬天青、亚甲基蓝和中性红5种染料进行了催化脱色试验,并对其中脱色效果较好的染料进行了脱色条件优化.结果表明:东方栓孔菌漆酶粗酶液对结晶紫有相对较好的脱色效果.添加2,2'-连氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸) (ABTS)的粗酶液对结晶紫的降解效果没有明显促进作用,因此后续试验中直接采用粗酶液.脱色条件优化结果为:最佳初始pH值6.0,最佳培养温度55℃,最佳接种量2.0%,最佳转速160 r/min,最佳底物浓度160 mg/L.在此条件下反应96 h,脱色率可达98.45%.本试验说明东方栓孔菌在印染废水治理方面具有较好的应用前景,可以作为一种新型菌株应用于染料脱色.     

严重发热伴血小板减少综合征病毒培养以及病毒滴度检测方法的建立

目的:建立严重发热伴血小板综合征病毒(SFTSV)培养和病毒滴度检测的方法,为其致病机制研究奠定基础。方法:选取生长良好的Vero细胞铺六孔板接种SFTSV,每隔24 h收集培养病毒上清检测SFTSV病毒复制拷贝数,从而选取最佳时间点收获病毒液并用浓缩离心管浓缩病毒液,保存备用。将SFTSV病毒液进行10倍比稀释,每梯度200μL接种生长良好的单层Vero细胞,用3 m L高压灭菌的甲基纤维素-DMEM覆盖物覆盖每孔Vero细胞,约9 d后温和去除甲基纤维素-DMEM覆盖物,经预冷的4%甲醛固定细胞后,用结晶紫染色,PBS洗脱3次,计算空斑数。结果:根据病毒繁殖生长情况,病毒在第4 d后达复制高峰并随后进入平台期,第8天病毒复制开始下降。参照甲基纤维素-结晶紫空斑法实验结果,病毒滴度为6×106PFU/m L。结论:SFTSV病毒培养以及滴度检测方法成功建立,选取4天后收获病毒上清最佳,甲基纤维素-结晶紫空斑法形成的空斑清晰可数。     

东方栓孔菌菌丝体生物吸附剂对染料的脱色作用及其吸附机制研究

利用东方栓孔菌Trametes orientalis菌丝体制得的生物吸附剂,对刚果红、结晶紫、铬天青、亚甲基蓝和中性红5种染料进行了脱色试验,对脱色效果较好的染料进行了影响因子优化,并通过红外光谱分析、化学修饰等方法研究其吸附作用的机制。结果显示：东方栓孔菌菌丝体生物吸附剂对结晶紫有相对较好的脱色效果;在优化的影响因子中,0%–3.0%（m/v）浓度范围内,盐度对染料脱色有促进作用;表面活性剂促使脱色率增加,吐温60浓度为1.5%（v/v）时脱色率可达83.84%;温度为43℃、初始pH为3.0、振荡培养10d后吸附率最高达91.54%。红外光谱分析及化学修饰结果表明菌丝体对染料的吸附作用主要是由它们之间的静电作用力所致。     

关于抗瘤免疫RNA诱生IL—2,细胞毒因子活性的研究

应用抗瘤免疫RNA致敏诱生家兔产生IL-2及细胞毒因子。通过MTT比色法和结晶紫染色法测其IL-2活性和细胞毒因子对靶细胞的杀伤作用,结果是免疫RNA能提高家兔IL-2水平,并且诱生杀伤作用较强的细胞毒因子。     

华南紫萁和粗齿紫萁的配子体发育研究

以腐叶土为基质 ,对华南紫萁和粗齿紫萁进行了孢子繁殖 ;利用Olympus显微镜观察和记录了它们的孢子萌发和配子体发育过程。结果表明 ,两者的孢子及配子体性状极为相似 :孢子同型 ,三裂缝 ,壁厚 ,含叶绿体 ,萌发快 ;在常温下 ,孢子的存活期短 ;孢子萌发需要光 ,萌发类型为紫萁型 ;丝状体阶段不发达 ,仅 2～ 3个细胞 ;原叶体无毛状体 ,中脉厚 ,精子器和颈卵器较大 ;由原叶体发育成幼孢子体所需时间极长。不同之处 :粗齿紫萁的孢子和精子器大些、颈卵器成对着生、成熟配子体多数为雌雄异株、受精率极低。华南紫萁和粗齿紫萁的孢子及配子体发育特点与紫萁、分株紫萁、绒紫萁、桂皮紫萁的极为相似 ,它们既具有大量的原始性状 ,也具有少数进化性状 ,支持把紫萁科列入原始薄囊蕨纲的观点。此外 ,也从孢子和配子体性状方面说明了紫萁属是一个自然的分类群     

3种方法检测体外神经细胞存活的技术探讨

为了准确、客观、快速、高效地反映体外培养细胞存活的情况,将PC12细胞以不同密度接种于96孔板中,培养48h后,然后采用结晶紫比色法,中性红比色法,MTT比色法来检测细胞的存活情况,再将所得结果进行比较,比较3种方法的优缺点,寻求最佳检测细胞存活方案．结果发现,不同方法检测细胞存活的范围各不相同．其中结晶紫比色法细胞存活数与比色光吸收值（absorbance value,A值）呈正相关程度较其它两种好,而且检测细胞存活范围最为宽广．