连续注射抗菌i-RNA诱生内源性细胞毒因子的研究

应用抗菌免疫核糖核酸(i-RNA)对家兔进行连续致敏注射和诱生注射,结果证明在家兔血清中有抑制和杀伤靶细胞(L929)作用较强的细胞毒因子出现。实验对i-RNA诱生内源性细胞毒因子的动态、不同i-RNA的诱生效果,对人和鼠的某些瘤细胞毒作用等做了初步研究,对内源性细胞毒因子的作用主要来自TNF的活性也做了讨论。     

关于细胞毒因子抗肿瘤活性的研究

用抗肿瘤免疫RNA诱生家兔,用体外细胞毒实验证明.i—RNA致敏血清对人和鼠的肿瘤细胞株有不同程度的杀伤作用,从血清中的细胞毒活性粗提液经局部和静脉注入实体瘤鼠体内,见肿瘤组织有出血、坏死、细胞核溶解,消失等现象。     

抗呼吸道合胞病毒免疫核糖核酸免疫活性的研究

本文在小鼠模型系统中,应用ELISA和~(125)IUdR释放试验分别研究抗呼吸道合胞病毒免疫核糖核酸(RSV—i—RNA)诱生血清特异性抗体活性和以细胞毒活性为指标检测其增强细胞免疫的作用。实验结果表明:RSV-i-RNA能诱生血清特异性抗体和提高鼠脾细胞对靶细胞的杀伤作用,且明显高于正常核糖核酸对照组。 RSV-i-RNA的上述作用可被RNase所阻断,但不受DNase和Pronase的影响。     

抗腺病毒免疫核糖核酸活性的实验研究

腺病毒(7型)经培养和纯化后免疫绵羊,从免疫羊肝脾抽提抗腺病毒免疫核糖核酸(AdV—i—RNA)。应用ELISA和细胞毒试验研究AdV—i—RNA的免疫活性,实验结果证明:AdV—i—RNA可以在小鼠体内诱生抗腺病毒抗体及增强小鼠脾细胞的细胞毒活性。     

Th1类细胞因子对pHCV—C重组体诱生免疫应答的增强作用

为了探索Th1类细胞因子IL 2和IL 12对含丙型肝炎病毒 (HCV)核心 (C)基因重组体诱生的免疫应答的增强作用 ,本文构建了包含HCVC基因片段的重组质粒pHCV C ,将其单独或与Th1类细胞因子表达质粒 pIL 2或pIL 12共免疫BALB/c小鼠 ,ELISA法检测免疫小鼠血清中的HCVC特异性抗体滴度 ;以pHCV C转染SP2 / 0细胞 ,经筛选稳定表达HCVC抗原者 (SP2 / 0 HCV C)为靶细胞 ,51Cr释放试验检测细胞毒T淋巴细胞 (CTLs)的体外特异性杀伤功能。结果发现 ,pIL 2能够增加 pHCV C诱导的抗体产生 ,对CTLs的杀伤作用增强却不明显 ;而 pIL 12对 pHCV C诱导的抗体和细胞免疫应答均有增强作用 (p <0 .0 5 )。由此推断 ,佐以Th1类细胞因子 ,不仅可以增强基因疫苗诱生的免疫应答强度 ,而且可能使机体对基因疫苗的免疫应答朝着有利于优先诱导CTLs免疫应答清除病原体的方向发展。     

抗金葡萄球菌免疫核酸诱生细胞毒因子的研究

用抗金黄色葡萄球菌免疫核酸致敏家兔,发现兔血清中含有直接杀伤L929细胞的细胞毒因子。就其成分进行了探讨,推测其中主要成分为肿瘤坏死因子(TNF)。并可有淋巴毒素及起协同作用的少量干扰素等其他一些成分。分别用体外细胞毒实验即结晶紫染色法及地~125I—UDR掺入法,计算细胞毒指数,评估结果,对两种检测手段进行了比较,染色法虽不如同位素法灵敏度高,但无放射性污染、不易保存等缺点。应用放线菌酮可以使细胞毒作用放大,便于检测到较微弱的细胞毒活性,而且实验条件易于控制,结果也较稳定。     

白细胞介素18

白细胞介素-18(IL-18)是新发现的细胞因子,具有多种生物学功能.IL-18能促进外周血单个核细胞产生干扰素-γ(IFN-γ)、IL-2、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)等细胞因子,增强天然杀伤细胞(NK细胞)的细胞毒作用.IL-18结构上与IL-1相似,而功能更接近IL-12,IL-18与IL-12均能诱导Th1细胞产生IFN-γ,存在协同效应,但它们的作用途径不同.IL-18在抗感染抗肿瘤等方面有着潜在的应用前景,并与自身免疫性疾病的发病密切相关.     

口服幽门螺杆菌疫苗对小鼠胃粘膜固有层淋巴细胞免疫激活作用的研究

经口给予小鼠门螺杆菌（ＨＰ）抗原疫苗２周后,提取脾淋巴细胞和胃粘膜固有层Ｔ淋巴细胞（ＬＰＬ）,检测细胞毒活性和ＩＬ－２诱生能力的改变。结果显示ＨＰ抗原疫苗能增强吸ＬＰＬ细胞毒活性和ＩＬ－２的分泌量。对脾淋巴细胞的细胞毒活性影响不大,ＩＬ－２诱生能力稍有下降。证实ＨＰ抗原疫苗对胃粘膜固有层Ｔ淋巴细胞有免疫激活作用。     

细胞因子与抗肿瘤药物体外协同抑制宫颈癌细胞的敏感性试验

目的探讨3种细胞因子单一、协同以及与化疗药物顺铂(DDP)的联合作用杀伤宫颈癌Hela细胞株的影响。方法应用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT比色法)、检测与化疗药物DDP单独或联合应用组及药物作用的12 h与24 h的吸光度值(A),计算杀伤率。台盼蓝拒染计算杀伤率对照。结果单独应用3种细胞因子时,IFN-α(干扰素-α)、TNF-α(肿瘤坏死因子)对宫颈癌Hela有细胞毒作用,IL-2对宫颈癌Hela细胞株则细胞毒作用不明显。IFN-α、IL-2、TNF-α可以增强DDP的抑瘤作用,与DDP单独作用差异具有显著性(P<0.01)。IFN-α、IL-2(白细胞介素-2)、TNF-α联合作用具有协同作用,均与单一应用差异具有显著性(P<0.01)。细胞因子均可以增强DDP的抑瘤作用并与其作用的先后及时间具有依赖关系。结论MTT比色法为临床肿瘤化疗的药物敏感性检测提供了简便、快速的方法[1]。不同类型的肿瘤有着不同的药敏谱。IFN-α、TNF-α、IL-2与DDP联合具有协同作用,为宫颈癌患者化疗提供了理想的参考方案。     

LAK细胞

一、LAK细胞的概念 1980年Rosenberg等首先观察到荷有甲基胆蒽纤维肉瘤的C57BL/6小鼠脾细胞经含有IL-2的培液培养后,可获得较强的抗自身甲基胆蒽纤维肉瘤的细胞毒作用,而对自身正常细胞无杀伤作用,未经IL-2培养的脾细胞或NK细胞对纤维肉瘤无杀伤活性。1982年Grimm等首次提出将这种由IL-2激活的能够杀伤NK抵抗性肿瘤细胞的杀伤细胞称为淋巴因子激活的杀伤细胞(Lymphokine-activated killer cells)简称LAK细胞。脾脏细胞、淋巴结细胞、外周血淋巴细胞(PBL)均可经IL-2诱导出显著的     

以白细胞介素15拮抗剂为载体的融合毒素IL15M-PE△293的研制

IL-15及IL-15受体(IL-15R)阳性细胞在成人T淋巴细胞性白血病(ATL)、多发性骨髓瘤及炎症性自身免疫性疾病病理过程中起着重要作用.为研制特异的可消除IL-15受体阳性异常细胞的新型导向药物,将人IL-15拮抗剂(IL-15M)基因片段与人工改造的绿脓杆菌外毒素(PE)变异体(PE△293)基因按正确的阅读框架融合,定向克隆在pET16b表达载体T7启动子的下游,得到质粒pET-IL15M-PE△293.从大肠杆菌相应重组菌株中通过Ni2+-NTA亲和层析纯化出融合蛋白IL5M-PE△293.IL15M-PE△293对IL-15R阳性红白血病细胞系K562及其多药耐药细胞系K562/AO2均具有杀伤作用,对IL-15R阴性细胞系Jurkat则没有明显的杀伤作用,而且过量的重组IL-15可以完全阻断融合蛋白对K562的细胞毒效应,说明融合蛋白的细胞毒作用具有靶向性.这些结果提示本文构建的融合蛋白在与IL-15/IL-15R异常表达相关的疾病甚至耐药性肿瘤的治疗中具有潜在的应用价值.     

以白细胞介素15拮抗剂为载体的融合毒素IL15M-PEΔ293的研制

IL-15及IL-15受体 (IL-15R)阳性细胞在成人T淋巴细胞性白血病 (ATL)、多发性骨髓瘤及炎症性自身免疫性疾病病理过程中起着重要作用。为研制特异的可消除IL-15受体阳性异常细胞的新型导向药物 ,将人IL-15拮抗剂 (IL-15M)基因片段与人工改造的绿脓杆菌外毒素 (PE)变异体 (PEΔ293)基因按正确的阅读框架融合 ,定向克隆在pET16b表达载体T7启动子的下游 ,得到质粒pET-IL15M-PEΔ293。从大肠杆菌相应重组菌株中通过Ni²⁺ NTA亲和层析纯化出融合蛋白IL15M-PEΔ293。IL15M-PEΔ293对IL-15R阳性红白血病细胞系K562及其多药耐药细胞系K562 AO₂ 均具有杀伤作用 ,对IL-15R阴性细胞系Jur kat则没有明显的杀伤作用 ,而且过量的重组IL-15可以完全阻断融合蛋白对K562的细胞毒效应 ,说明融合蛋白的细胞毒作用具有靶向性。这些结果提示本文构建的融合蛋白在与IL-15IL-15R异常表达相关的疾病甚至耐药性肿瘤的治疗中具有潜在的应用价值。     

颗粒酶B：有力的细胞免疫杀伤因子

丝氨酸蛋白酶家族成员颗粒酶B是细胞毒淋巴细胞介导的颗粒胞吐免疫效应中有力的杀伤因子。近年来,颗粒酶B与穿孔素协同作用的靶细胞摄取机制受到质疑,“受体内化”及“静电交换”等新模型被相继提出。颗粒酶B在靶细胞内能够诱导caspase依赖及非依赖性的凋亡,还能直接作用于死亡底物发挥细胞毒作用,同时具有基质重塑等重要的细胞外功能。颗粒酶B与自身免疫疾病及抗病毒感染密切相关,在恶性肿瘤细胞杀伤方面的应用价值正日益受到关注。     

口服短小双歧杆菌活菌制剂对机体免疫功能的增强效应

探讨短小双歧杆菌（Bifidobacteriumbreve）对正常机体免疫功能的影响及对免疫低功机体的免疫功能调整作用。以环磷酰胺制备免疫低功模型,检测活菌制剂应用后,小鼠巨噬细胞吞噬功能,自然杀伤（NK）细胞杀伤活性,特异性抗体产生能力及IL—2诱生活性等指标的变化。结果表明短小双歧杆菌活菌制剂口服后可显著提高小鼠巨噬细胞吞噬功能,NK细胞杀伤活性,特异性抗体产生能力3项指标,IL—2诱生活性与对照组相比有一定提高,但差异无显著性。结果提示短小双歧杆菌对提高正常机体的免疫功能,对免疫低功机体有明显的调整作用。     

Th1类细胞因子对pHCV-C重组体诱生免疫应答的增强作用

为了探索Th1类细胞因子IL-2和IL-12对含丙型肝炎病毒(HCV)核心(C)基因重组体诱生的免疫应答的增强作用,本文构建了包含HCVC基因片段的重组质粒pHCV-C,将其单独或与Th1类细胞因子表达质粒pIL-2或pIL-12共免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测免疫小鼠血清中的HCVC特异性抗体滴度;以pHCV-C转染SP2/0细胞,经筛选稳定表达HCVC抗原者(SP2/0-HCV-C)为靶细胞,     

流感裂解疫苗H3N2-抗H3N2免疫原性复合物滴鼻诱导小鼠黏膜免疫应答的研究

目的研究流感裂解病毒疫苗抗原抗体复合物滴鼻诱生小鼠黏膜免疫应答.方法分别以15μg H3N2、H3N2-CpG、H3N2-鼠抗H3N2及H3N2-PEG滴鼻免疫小鼠,检测肺泡灌洗液抗H3N2 IgA、血清抗H3N2 IgG效价.取免疫小鼠脾细胞,体外抗原刺激,用定量酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清液IFN-γ及IL-4分泌水平.结果H3N2-抗H3N2免疫原性复合物诱生的抗H3N2 IgA效价明显高于H3N2单独免疫组(P＜0.01),而与H3N2-CpG组无显著性差异.此外,复合物诱生的血清抗H3N2也高于H3N2单独免疫组(P＜0.05).H3N2-CpG组诱生的IFN-γ水平明显升高,而其他组之间无明显差异.结论流感病毒血凝素抗原抗体复合物、血凝素抗原加CpG佐剂可以诱生较强的局部黏膜免疫和体液免疫.这两组诱生的IgA效价均明显高于H3N2单独免疫组.另外,H3N2-CpG组小鼠的脾脏细胞经特异性抗原诱导后培养上清液中的IFN-γ水平明显升高.     

高压静电场对雏鸡细胞免疫功能及其调节的影响

应用细胞培养技术和四甲基偶氮唑盐（MTT）测定法对高压静电场照射雏鸡血液和免疫器官的T细胞对刀豆蛋白（ConA）的增殖反应及其白细胞介素-2（IL-2）诱生活性的动态变化进行了较全面系统的研究.结果发现,高压正静电场照射雏鸡血液和免疫器官的T细胞增殖功能及其IL-2诱生活性均明显高于高压负静电场照射雏鸡和对照雏鸡;而高压负静电场照射雏鸡血液和免疫器官的上述各项被检指标均不同程度的低于对照雏鸡.表明高压正静电场照射对雏鸡血液和免疫器官的细胞免疫功能及其调节具有促进作用,而高压负静电场照射可使雏鸡血液和免疫器官的细胞免疫功能及其调节减弱或降低.     

一氧化氮的抗感染免疫作用及其机制

一氧化氮在机体抗感染免疫防御体系中的重要作用被发现之后,各国学者进行了大量的相关研究。这些研究证明：一氧化氮作为活化巨噬细胞的一种细胞毒效分子,在抑制和杀伤病毒,细菌,寄生虫等的免疫应答中起重要作用。一氧化氮抗感染的作用机制十分复杂,它通过调节Th1/Th2的平衡来促进机体的免疫应答,并可直接与含铁酶的Fe-S基团结合,破坏酶的活性,进而杀伤病原体及其宿主细胞。     

抗菌免疫核糖核酸组份的分离及其活性测定

<正> 抗菌免疫核糖核酸(iRNA)已用于条件致病菌感染的临床治疗,并对其免疫活性做了全面的研究。现已证实iRNA能够诱导特异性抗体的产生和传递特异性的细胞免疫,并能诱生干扰素和白细胞间素Ⅰ、Ⅱ等淋巴因子和单核因子。但制备的iRNA是含有多种RNA种类的混合物,为明确各组份的免疫学功能,我们对iRNA进行了分离,并测定不同组份的免疫活性。     

淋巴因子激活的杀伤细胞和肿瘤继承免疫治疗的新进展

小鼠脾脏细胞和人外周血淋巴细胞与IL-2温育,可诱导产生抗各种新鲜实体瘤细胞的杀伤细胞。LAK细胞是一种不同于NK细胞和CTL的细胞毒系统。IL-2是激活LAK细胞的淋巴因子。LAK细胞和IL-2继承免疫治疗小鼠恶性肿瘤转移已取得成功。初步的临床试验结果表明,应用LAK细胞和IL-2治疗人类肿瘤也大有希望。