SARS-CoV细胞空斑试验

目的建立适用于生物安全三级实验室操作的SARS．CoV空斑试验方法。方法SARS－CoVl0倍系列稀释接种Vero－E6细胞,用0．6％琼脂糖覆盖中性红着色（琼脂糖．中性红法）或覆盖1％甲基纤维素,4％甲醛固定,结晶紫染色（甲基纤维素－结晶紫法）,空斑计数。结果琼脂糖－中性红法病毒滴度为6．14Lg pfu／mL,甲基纤维素－结晶紫法病毒滴度为6．57Lg pfu／mL。结论二种空斑试验方法相比,病毒滴度无明显差异。甲基纤维素－结晶紫空斑试验法形成的空斑比琼脂糖－中性红法清晰、操作简单安全、结果可长期保存。     

Vero细胞培养流行性感冒病毒的研究

探索Vero细胞培养流感病毒和用于研制流感疫苗的可行性。确立Vero细胞培养流感病毒的最适条件,把流感病毒接种于Vero细胞上培养和传代,于不同时间收获病毒液,进行灭活和超滤浓缩实验,检测血凝素滴度(HA)。结果表明胰酶、pH值、残留牛血清是流感病毒在Vero细胞培养的影响因素,最佳收毒时间为72-96小时。Vero细胞上培养流感病毒的4～7代,HA滴度较高。病毒液用0．05％福尔马林4℃,7天即可灭活,用超滤技术能浓缩流感病毒液。Vero细胞可用于流感病毒的培养和疫苗的开发。     

无血清细胞培养在发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒生长中的应用

目的建立无血清培养基培养Vero细胞制备发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV)的工艺。方法分别采用含10%牛血清的MEM(10%MEM培养基)和无血清M2培养基(SF-M2培养基)在方瓶中培养Vero细胞制备SFTSV,比较无血清与含血清培养基培养Vero细胞制备SFTSV在病毒滴度及病毒繁殖曲线之间的差异。在生物反应器里用无血清培养的方式进行工艺放大,收获病毒原液并进行检定。结果无血清培养的Vero细胞能够满足SFTSV培养需求,与含血清细胞培养相比,单位细胞病毒产量没有降低,达到30~60个活病毒/细胞。可以实现在生物反应器的工艺放大,病毒高峰时病毒滴度均在7.0lg PFU/m L以上。结论无血清细胞培养可以应用于SFTSV的培养,有利于降低疫苗生产过程中的纯化难度,提高疫苗安全性。     

转瓶培养与生物反应器微载体培养乙脑病毒的比较

分别用15L转瓶与15L生物反应器微载体(2.5g/L CytodexⅢ)系统培养Vero细胞并接种乙型脑炎病毒(简称乙脑病毒)。转瓶培养Vero细胞7~8d,细胞数最高能达到8×108;当单层细胞长至3.0~4.5×108时接种乙脑病毒,病毒滴度能达到6.5~6.98 lg PFU/ml,并能够连续收获4~5次;采用微载体系统培养Vero细胞,细胞密度最高能达到170×108;当单层细胞长至60~70×108时接种乙脑病毒,病毒滴度能达到7~7.5 lg PFU/ml,并能够连续收获13~15次。两种方式培养的乙脑病毒收获液分别经灭活、浓缩、柱层析纯化后制备Vero细胞乙脑纯化疫苗,各项检定指标均符合《中国药典》的相关要求。     

发热伴血小板减少综合征病毒在不同环境条件下的稳定性研究

为评估发热伴血小板减少综合征病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus, SFTSV)在环境中的稳定性，本研究比较分析了实验室制备的SFTSV在不同介质表面的稳定性以及温度、自然通风干燥和常用酒精消毒剂等因素对其生存能力的影响。不同时间点收获的病毒样本，通过接种于Vero细胞中传代培养、空斑试验和实时荧光定量RT-PCR等方法测定病毒的感染性、滴度和复制培养过程中的动态变化。结果显示，在室温(约25℃)自然通风干燥条件下，不同介质表面的SFTSV感染性快速下降，在硬币、塑料等介质表面的病毒感染性可维持24 h，但病毒感染性滴度24 h内显著下降分别约10^4.46倍和10^4.6倍，在无纺布和纸张表面的病毒感染性滴度在6 h内就下降分别约10^3.82倍和10^4.12倍。如果将SFTSV置于密闭湿润环境中，病毒感染性可维持长时间的稳定性，24 h病毒感染性滴度下降不明显，1周内下降约10^1.49倍，在3周时仍可通过细胞培养...     

用蚀斑法进行麻疹疫苗的病毒滴定

按世界银行中国疫苗项目对麻疹疫苗检定的要求,建立了麻疹疫苗病毒滴定的蚀斑方法。以蚀斑法对Ｈｕ１９１株生产的冻干麻疹活疫苗样品进行了测定。结果发现,Ｈｕ１９１株生产的麻疹疫苗在琼脂和甲基纤维素覆盖下所形成的蚀斑大小及形状不同,但滴度无显著性差异;在室温和３７℃吸附的滴度无显著性差异,但细胞在３７℃生长较好;在本实验条件下,蚀斑滴定和ＣＣＩＤ５０测定的滴度呈正相关,蚀斑滴定相对较敏感;采用国产６孔聚苯乙稀培养板,Ｖｅｒｏ细胞单层,在３７℃吸附,用甲基纤维素覆盖,经结晶紫及甲醛固定染色后计数空斑,操作简便易行,结果特异敏感,重复性好,可用于麻疹疫苗病毒滴定     

肾综合征出血热双价纯化疫苗（Vero细胞）病毒株的筛选及其免疫原性研究

选用在Vero细胞上初步适应的LR1（Ⅰ型）、R22（Ⅱ型）株病毒,经乳鼠脑或腹腔接种,收剖感染鼠脑并在Vero细胞传代适应,此收获病毒与直接以Vero细胞传代的病毒比较表明：抗原效价、毒力滴度有明显提高。用LR1、LR22株病毒感染的Vero细胞培养物制备单价粗制疫苗和双价精制纯化疫苗免疫家兔,经空斑减少中和试验检测中和抗体,结果表明经乳鼠和Vero细胞交替传代适应后的LR1、R22株病毒具有良好的抗原性和免疫原性。     

SARS病毒NS-1株稳定性及培养条件的研究

用SARS病毒NS-1株接种Vero细胞,37℃培养,于培养1、2、3、4d收获病毒液,分别置-70℃冻融和4℃释放,于不同时期取样进行病毒滴定。结果显示,SARS病毒NS-1株各代次培养特性和形态学变化完全相同,有较好的抗原特异性,病毒滴度稳定,4℃保存125d,滴度下降2．25lgCCID50／ml,-70℃保存6个月,滴度未见明显下降。SARS病毒NS-1株未经冻融或释放,1d收获的病毒滴度比2、3、4d收获的病毒滴度低,经冻融或释放,1、2、3、4d收获的病毒滴度无明显区别,病毒收获时的病毒滴度与形态学变化成正相关。不同接种条件收获的病毒液,病毒滴度无明显区别。SARS NS-1株有较好的遗传稳定性和保存稳定性,培养2d,4℃释放收获病毒液,细胞悬液与病毒混合接种更简单,易操作,更适合疫苗规模生产。     

生物反应器培养轮状病毒基因重配株Ls条件的优化

目的轮状病毒基因重配株Ls(G3型)在生物反应器微载体培养Vero细胞条件的优化。方法采用3 L生物反应器微载体培养Vero细胞,观察Ls株在不同病毒感染复数(0.001、0.002、0.010、0.040 MOI)、不同温度(34.5℃和35.5℃)、不同病毒收获时间(24和48 h)对病毒增殖的影响。根据病毒滴度和收获量筛选出最适MOI、培养温度及病毒的收获时间。结果以0.002 MOI接种Vero细胞,温度为34.5℃培养病毒,滴度最高达7.50 lg CCID50/m L;48 h可连续收获4次病毒液,且收获总量及病毒滴度均高于24 h。结论通过对Ls株在生物反应器微载体Vero细胞培养条件的优化,获得的病毒液滴度高及连续培养多次收获量增加的有效方法,为进一步规模化培养奠定了基础。     

发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒规模化生产培养工艺的建立

目的通过对发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒（简称“新布尼亚病毒”）进行规模化生产培养工艺研究,为新布尼亚病毒规模化生产提供有力支持。方法采用细胞工厂培养Vero细胞,待其长成致密单层后,取工作种子批新布尼亚病毒毒种接种细胞,采用连续收获或细胞病变充分时收获培养液上清的方法收获病毒,并以病毒滴度、抗原含量作为评价指标选择基础培养基、培养基pH、人血白蛋白添加浓度、接种细胞日龄、接种病毒MOI以及病毒培养温度。结果按0．01-0．001MOI接种3-4日龄Vero细胞,病毒培养液选择含0．3％人血白蛋白pH7．6-7．8的DMEM溶液,35℃培养7d收获,病毒收获液病毒滴度7．87LgCCID50／mL、抗原含量170．1μ/mL。结论初步建立了新布尼亚病毒规模化生产培养工艺,为后续工业化生产提供了数据支持。     

六种藓类植物茎的比较解剖学研究

通过对6种藓类植物,即褶叶青藓(Brachythecium salebrosum(Web.et Mohr.)B.S.G.)、湿地匐灯藓(Plagiomnium acutum(Lindb.)Kop.)、侧枝匐灯藓(Plagiomnium maximoviczii(Lindb.)Kop.)、大凤尾藓(Fissidensnobilis Griff.)、大羽藓(Thuidium cymbifolium(Doz.et Molk.)B.S.G.)和大灰藓(Hypnum plumaeforme Wils.)嫩茎和老茎的石蜡切片和显微观察发现,同一藓类植株的嫩茎和老茎,茎结构稳定,不同种藓类植物茎横切面具有不同特征.植物体茎横切面形状、表层细胞的层数、细胞大小和细胞壁厚薄、皮层细胞大小和形状、中轴的有无以及比例等特征可以作为藓类植物的分科分类依据之一.     

Photoregulation of seed germination of wild-type and of an aurea-mutant of tomato

Seed germination of an aurea mutant of tomato ( Lycopersicon esculentum Mill.) is promoted by continuous irradiation with red, far-red or long-wavelength far-red (758 nm) light as well as by cyclic irradiations (5 min red or 5 min far-red/25 min darkness). Far-red light applied immediately after each red does not change the germination behaviour. Seed germination of the isogenic wild-type, cv. UC-105, is promoted by continuous and cyclic red light while it is inhibited by continuous and cyclic far-red light and by continious 758 nm irradiation. Far-red irradiation reverses almost completely the promoting effect of red light. The promoting effect (in the aurea mutant) and the inhibitory effect (in the wild-type) of continuous far-red light do not show photon fluence rate dependency above 20 nmol m⁻² s⁻¹. It is concluded that phytochrome controls tomato seed germination throgh low energy responses in both the wild type and the au mutant. The promoting effect of continuous and cyclic far-red light in the au mutant can be attributed to a greater sensitivity to P_fr.     

真菌类遗传学分析的知识结构教学

本文以认知结构理论为指导,讨论了真菌类遗传分析与高等动植物遗传分析的内在联系,认为利用这种内在联系进行教学可收到好的效果并说明了作者的具体教学过程。 Abstract:In the paper, the relationship between genetic analysis of Fungi and genetic analysis of high animal and plant was discussed.A good results were obtained when we adopted this method in the teaching.     

Cause of Senescence of Nine Sorts of Flowers

The levels of endogenous phytohormones and respiratory rate in nine sorts of flowers such as Cymbidium faberi Rolfe, Nopalxochia ackermannii Kunth and others were investigated both at full bloom and senescence and meanwhile the effect of exogenous phytohormones on prolonging the blossoms and promoting ethylene production were tested. There is a high content of endogenous ethylene in all the long-lived flowere, about 3–16 folds higer than the short-lived ones. There is a high level of ABA at full blooming flowers of short-lived flowers, in which there is no or only some cytokinins in it, but the ratio of CTK (6BA+zeatin)/ABA is smaller(l.7). The endogenous ABA reached a much higher level at senescence in all nine sorts of flowers, so it is reasonable to consider that it is ABA which plays an important role of regulation in controlling flower's senescence. There is a much higher level of GA3 and zeatin in the long-lived flowers which is not demonstrated in the shortlived ones. The respiratory rate is one of the factors controtling the longevity of flowers, but it does not play a decided role. Application of 6BA and zeatin prolongs distinctly orchid’s longevity, however exogenous IAA through the promotive action on ethylene production, evidently extends the longevity of the flowers of the Nopalxochia ackermannii Kunth.     

龙胆科药用植物化学成分的研究现状

龙胆科植物在我国的分布范围很广,且多数为药用植物,其多数种属的药用植物,至今其化学成分尚未被系统研究。综述了目前龙胆科药用植物的化学成分的研究现状及一般提取方法,对近年来发现的环烯醚萜及裂环烯醚萜类化合物进行了总结,为本科药用植物的更深入研究提供了参考。     

Interconnection of parameters of regulation system of lipid peroxidation and of morphophysiological parameters of mouse liver

A complex analysis of seasonal fluctuations of the mean group parameters of the system of regulation of lipid peroxidation has been performed in liver of Balb/c mice. Association of lipid characteristics and morphophysiological parameters is studied in the Balb/c mouse liver. An inter-connection is revealed between the liver index and the amount of lysoforms of phospholipids, the scale and character of the interconnection differing essentially depending on proportion of phos-phatidylcholine in mouse liver phospholipids.     

Time of detection of recessive genes: effects of system of mating and number of examined individuals

Summary Anthers were cultured from two sets of seven lines of hexaploid wheat (Triticum aestivum L.) with different cytoplasms, the euplasmic nucleus donors, Siete Cerros 66 and Penjamo 62, as well as their six alloplasmic lines derived from wild relative species of the genera Triticum and Aegilops. Significant cytoplasmic and nuclear effects but no cytoplasmic-nuclear interaction were found for embryogenic anther response, with the best performance of Penjamo 62 in Ae. kotschyi cytoplasm. Plant regeneration was not affected significantly by the cytoplasmic background of the lines cultured. The possible genetic implications of the observed cytoplasmic and nuclear influences on the in vitro haploid induction of wheat are discussed.