黄曲霉毒素B_1的免疫检测Ⅰ.抗原的制备

黄曲毒素B1（aflatoxinB1,简称AFB1）抗原的制备是AFB1免疫检测研究的第一步。研究了回流温度和时间对黄曲霉毒素B1肟（aflatoxinB1oxime,简称AFB1O）产生的影响,通过统计分析得到85℃,回流2hAFB1O的产率最高,为89％。在此基础上进一步研究了AFB1O与载体蛋白─-牛血清蛋白（BSA）反应的起始摩尔比对产物摩尔比的影响,随着反应起始摩尔比的增加,产物的摩尔比也稍有增加,但是增加幅度不显著,而AFB1O的利用率则随着起始摩尔比的增加而减少。选择20∶1为AFB1O与牛血清蛋白BSA的反应起始摩尔比,得到摩尔比为6．3∶1的AFB1O与BSA的连接物。     

黄曲霉毒素B1的免疫检测Ⅱ．抗体的产生及应用

将黄曲霉毒素B₁肟(AFB₁O)与牛血清白蛋白(BSA)的连接物,通过多点、多次免疫法注射免疫兔子。分析了抗体的产生进程、效价以及特异性。注射抗原后的第60天开始有较明显抗体产生,第120天达到高峰,维持15天左右后开始下降;抗体的ELISA效价高达1：30000;和黄曲霉毒素B₁(AFB₁)的结构类似物的竞争ELISA表明,抗体有很好的特异性。运用该抗体,以ELISA分析检测了几种农产品及饲料中污染AFB₁,的含量,并和薄层层析法的分析结构进行了比较,结果表明当AFB₁．的含量大于等于5ng／ml时。两者间有很好的相关性。     

黄曲霉素毒B1的免疫检测Ⅰ.抗原的制备

黄曲霉素Ｂ１抗原的制备是ＡＦＢ１免疫检测的第一步。研究了回流温度和时间对黄曲霉毒素Ｂ１肟产生的影响,通过统计分析得到８５℃,回流２ｈＡＦＢ１Ｏ的产率最高,为８９％,。在此基础上进一步研究了ＡＦＢ１Ｏ与载体蛋白－牛血清蛋白（ＢＳＡ）反应的起始摩尔比对产物摩尔比的影响,随着反应起始摩尔比的增加,产物的摩尔比也稍有增加,但是增中幅度不显著,而ＡＦＢ１Ｏ的利用率则随着起始摩尔比的增加而减少,选择２０：１为     

芽孢杆菌B1、B2对豌豆尖镰孢菌抗菌机理的研究*

同、异步培养结果表明:芽孢杆菌B₁、B₂对豌豆尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum Schl f.sp.pisi)有很强的抑菌作用。经B₁、B₂无菌液处理后的病原菌由灰白色变为白色,气生菌丝增多且纠结成团。抗菌显微特征是:导致病菌孢子和菌丝体膨大、畸形、原生质凝聚、孢子不萌发或萌发异常、菌丝生长点产生大量泡囊、生长受阻,后期菌丝体断裂、泡囊破裂、原生质外泄。B_{1相似文献}   

阴香叶精油化学成分及抗菌活性

研究阴香叶精油的化学成分及体外抗真菌活性,以期为开发绿色、安全、高效的抑菌剂提供参考。水蒸气蒸馏法提取阴香叶精油,气相色谱-质谱法（GC-MS）分析精油成分;熏蒸法研究阴香叶精油抗黄曲霉菌和黑曲霉菌的活性;超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）分析精油对黄曲霉毒素B₁（AFB₁）和赭曲霉毒素A（OTA）的抑制作用。从阴香叶精油中鉴定出38种化学成分,主要成分有龙脑、桉油精、α-水芹烯、p-伞花烃、α-萜品醇、乙酸龙脑酯等。阴香叶精油用量为40 μL时,对黄曲霉菌丝体的抑制率为92.59%,对AFB₁的抑制率为47.05%;精油用量为20 μL时,黑曲霉菌丝体的抑制率为67.18%,对OTA的抑制率为100%。阴香叶精油的化学成分丰富,具有显著抑制黄曲霉菌,黑曲霉菌及毒素产生的作用,具有开发为抑菌剂的应用价值。     

碱提水溶性安络小皮伞多糖的研究——B1与B2的分离纯化及结构研究

从曾用水提取过水溶性多糖的安络小皮伞残渣中用稀碱液提取了二种水溶多糖B₁和B₂。它们分别给Sepharoe 4B柱,2B柱层析,超离心分析,醋酸纤维薄膜电泳鉴定,表明B₁和B₂均为纯多糖。采用气相色谱,红外光谱,淀粉酶解,甲基化分析等方法确定了它的基本结构。     

激动剂引起的α1-肾上腺素受体下调及其部分机制

用仓鼠全长α_1B - 肾上腺素受体 (α_1B -AR)cDNA转染人胚胎肾细胞(HEK2 93)得到高效稳定表达α_1B - AR的细胞系 ,在此细胞上观察去甲肾上腺素 (NE)持续刺激该细胞对α_1B -AR表达的影响 .用放射配基结合分析测定受体数量 ,用RNA酶保护分析测定mRNA水平 .结果显示细胞与 1 0 μmol/LNE温育 2～ 2 4h时 ,α_1B -ARmRNA水平与对照组相比显著下降 . 4h时下降到最低点 ,约下降了70 % .温育 2 4h时 ,α_1B - AR数与对照组相比约下降了 6 6 % .用 0 .1 μmol/LCalphostinC预处理细胞 30min后再加NE 4h并未引起α_1B - ARmRNA水平下降 ,而 1 μmol/L佛波酯刺激细胞时也能产生与NE所引起的相似结果 .核失控转录分析显示 1 0 μmol/LNE处理细胞 4h后α_1B -AR的转录速度与对照组相比并无显著差异 .在用放射菌素D阻断新的RNA合成的条件下 ,NE并不能加速α_1B - AR的mRNA降解 .上述结果表明NE引起α_1B -AR下调的同时伴有其mRNA水平下降 ,这种作用是通过激活蛋白激酶C途径实现的 .NE并不改变α_1B -AR基因的转录速度 ,也不直接加速其mRNA降解 ,但可能通过诱导某些RNA及其相应蛋白质的合成而间接降低α_1B - ARmRNA的稳定性 .     

饲料中黄曲霉毒素B1、G1和棕曲霉毒紊A的薄层层析测定法

饲料样品25g,用100 ml乙睛:4%氯化钠溶液(9:1)抽提,吸取25 ml提取液,以石油醚脱脂二次,加0.1mol/L碳酸氢钠溶液12.5ml后,用氯仿提取二次,氯仿层放入蒸发皿中,于60℃水浴挥干,残渣以苯乙睛溶解定容为1ml,供测定黄曲霉毒素B₁、 G₁。碳酸氢钠水层中加1mol/L盐酸1ml左右调节pH值为4-5,再以氯仿提取二次,氯仿层放人蒸发皿中,于60℃水浴挥干,残渣以苯乙酸溶解定容至1ml,供测定棕曲霉毒素A。黄曲霉毒素B₁、 G₁的薄层板以乙醚横展、丙酮氯仿纵展。棕曲霉毒素A的薄层板以丙酮氯仿横展,甲苯乙酸乙醋90%甲酸纵展。展板后分别在波长为365nm和254nm的紫外光下观察。如为阳性样品,标记后用薄层扫描仪定量。棕曲霉毒素A阳性样品应先喷碳酸氢钠乙醇溶液后再扫描。本测定方法对三种毒素的最低检出量均为0.2ng/点,最低检出狠量均为3.2ppb。     

表达大肠杆菌K88ac-ST1-LTB融合蛋白基因工程菌株的构建

利用PCR技术,从大肠杆菌C83902质粒中扩增出K88ac基因、ST₁突变基因和LT_B基因,通过分离、纯化、内切酶酶切、连接和转化,构建了含K88ac-ST₁-LT_B融合基因表达载体的重组菌株BL21（DE3）（pXKST3LT5）。经酶切鉴定和DNA序列分析证实,构建的重组质粒pXKST3LT5中含有K88ac-ST₁-LT_B融合基因,且基因序列和阅读框架均正确。经ELISA检测,重组菌株表达的K88ac-ST₁-LT_B融合蛋白能够被ST₁单抗、LTB和K88ac抗体识别。经乳鼠灌胃试验证实,表达的融合蛋白已丧失天然ST₁肠毒素的活性。免疫实验结果表明,K88ac-ST₁-LT_B融合蛋白能够诱发小白鼠产生抗体,该抗体具有中和天然ST₁肠毒素的毒性作用,表明构建的重组菌株可以作为预防仔猪黄、白痢基因工程菌苗的候选菌株。     

具抗真菌活性的海洋霉菌的筛选和初步研究*

从中国南海海底沉积物与海水样品中分离出100多株海洋霉菌;以条件性致病真菌白色假丝酵母(Candidaalbicans),植物病原真菌镰刀菌(Fursariumsp.)等作为敏感测试菌株,初筛分离到30多株对上述测试真菌具有明显抑制作用的海洋霉菌;对其发酵液进行复筛,发现其中编号分别为B₄^#-6、B₄^#3-、1B₆-6、1B₆-10-5、1-B相似文献   

芽胞杆菌B13功能的初步研究

用选择性培养基从土壤中分离到芽胞杆菌B₁₃。结果表明:芽胞杆菌B₁₃能够同时溶解无机磷和分解有机磷,并且芽胞杆菌B₁₃活菌及其发酵液能够抑制烟草青枯病菌和黄曲霉的生长;共培试验证明芽胞杆菌B₁₃能够抑制烟草疫霉的生长;盆栽试验证明芽胞杆菌B₁₃对烟草青枯病具有一定的防治效果。可以进一步将其开发出集解养分与抗病于一体的微生物活体制剂。     

黄曲霉毒素解毒酶催化AFB1-抗体复合物中抗原变构解离初步研究

用免疫学的方法对AFB₁在黄曲霉毒素解毒酶催化前后抗原表位发生改变并从抗原抗体复合物中解离的可能性进行研究探讨。结果表明 :经黄曲霉毒素解毒酶处理后产物中有AFB1表位特征产物的量下降了 2 4 8%～ 72 8% ,而灭活酶组平均只下降203% ;活性酶组AFB1的解离率达到 88% ,灭活酶组AFB1的解离率为 8 7% ,两组比较有显著性差异 (P <0 0 1 ) ,而灭活酶组与质控组的比较无显著性差异 (P >0 0 5 )。分子的模拟计算也支持以上结果。为进一步建立特异性抗体—固定化酶催化体系提供了重要的参考数据 。     

脂肪酶合成聚乙二醇400油酸单酯和双酯的影响因素

研究了固定化假丝酵母(Candida sp.)-1619脂肪酶合成聚乙二醇400油酸单酯与双酯的影响因素。不同摩尔比的底物反应6h都有单酯和双酯生成。酸与醇的摩尔比为O.25：1到2：1时,生成单酯与双酯的比例在3.5：1到4:1的范围内;当酸与醇的摩尔比达到3：1至8:1时,单、双酯的生成量相仿。反应达平衡时(24h),不同摩尔比底物的反应产物都是双酯。在含己烷的反应体系中,反应平衡时有单酯存在,摩尔比为2：1时,反应物中单、双酯比达到l：3.2。     

黄土高原冬小麦地N2O排放

从2007年7月1日到2009年6月30日对黄土高原冬小麦地氧化亚氮(N₂O)排放采用静态箱气相色谱法进行了为期2a 的监测。设置2个处理,有小麦田(有小麦生长),无小麦田(出芽初期拔去麦苗)。研究结果表明有小麦田、无小麦田N₂O排放量年际变化不大。有小麦田年均的N₂O 排放量为2.05 kg · N₂O · hm^-2 · a^-1,无小麦田年均的N₂O 排放量为2.28 kg · N₂O · hm^-2 · a^-1 。在冻融交替期,施肥后、翻地后和降雨后无小麦田和有小麦田N₂O排放明显增加,N₂O的季节变化受到这些短期事件的显著影响;有小麦田N₂O排放与地温(P<0.01),气温(P<0.01)和WFPS(P<0.05)显著相关,而无小麦田N₂O排放与这些环境土壤因子都不相关;有小麦田和无小麦田两个处理土壤的WFPS通常都低于60%,可以推断在本地区,硝化反应是N₂O的重要生成源。     

LED光质对走马胎生长和生理及活性成分含量的影响

该研究以走马胎幼苗为材料,采用红光(R)、蓝光(B)、红∶蓝=2∶1(R₂B₁)、红∶蓝=4∶1(R₄B₁)、红∶蓝=6∶1(R₆B₁)、红∶蓝=8∶1(R₈B₁)、紫光(P)以及绿光(G)共8 种不同的光质处理,并以自然光作为对照(CK),探究走马胎生长发育对不同光质的响应特征,为提高走马胎苗木质量和药用成分含量,以及珍贵药用植物的培育及保护提供依据。结果表明：(1)走马胎苗高在R处理下最高,地径、鲜重和干重在R₂B₁处理下达到最大值。(2)走马胎幼苗叶片的叶绿素含量在B处理下最高,在G处理下最低;在红蓝复合光处理中,随着蓝光比例的增大,叶绿素和类胡萝卜素含量呈现逐渐增加的趋势。(3)走马胎幼苗叶片丙二醛(MDA)和游离脯氨酸含量在G处理下最高,超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活性在B处理及适宜比例的红蓝复合光处理下更有利于得到提升。(4)走马胎幼苗叶绿素荧光参数在不同光质处理下均受到显著影响,PSⅡ最大光化学效率(F_v/F_m)和有效光化学效率［Y(Ⅱ)］均以R₂B₁处理最高,光化学淬灭系数(qP)以B处理最高,但与R₂B₁处理差异不显著;非光化学淬灭系数(NPQ)以R₈B₁和G处理较高,但两者间无显著差异。(5)走马胎幼苗皂苷含量虽然在B处理下最高,但R₂B₁处理更有利于提升单株皂苷产量。(6)综合参考所有指标表现,R₂B₁、B和R₄B₁处理均优于CK,且R₂B₁处理最有利于提高走马胎苗木质量及活性成分含量,并缩短培育周期,实现其高效生产利用。     

盐胁迫对小麦PSⅡ反应中心异质性的影响

为了研究盐胁迫对PSII反应中心异质性的影响,采用微机接口使荧光仪信号数字化,用微机记录小麦完整叶片PSII的荧光诱导动力学曲线,通过分析荧光诱导的快相部分的参数(F_m,F_p1)和F_O)看到PSII Q_B非还原中心的比例首先降低,其次很快增加,且随时间和胁迫强度而增加,表明PSII反应中心Q_A到Q_B的电子传递是盐胁迫对光系统II光化学和光物理过程损伤的位点之一.     

脱氮假单胞菌生产维生素B12过程中粪卟啉Ⅲ的测定及发酵调控

脱氮假单胞菌发酵生产维生素B₁₂过程中,副产物粪卟啉Ⅲ的积累对产物的代谢合成和分离提取有很大的影响。建立了发酵液中粪卟啉Ⅲ的HPLC快速测定方法,发酵液处理后直接进样测定,检测线性范围为12~275 μg/ml,重复性好。研究了不同供氧水平、二氧化碳浓度和pH值对发酵过程中维生素B₁₂和粪卟啉Ⅲ代谢合成的影响,并在120吨发酵罐中进行了发酵过程优化控制。结果表明:在发酵过程产物的合成期控制适当的供氧水平、控制二氧化碳浓度在8.6±0.8%、维持pH值在7.0±0.12能明显抑制卟啉Ⅲ的生物合成,同时使维生素B₁₂产量提高15%。     

利用RNO脱色反应检测类囊体中的单线态氧

光敏剂RB在光照射下与O₂反应产生 ¹O₂, ¹O₂与组氨酸或咪唑反应的中间产物使RNO发生氧化,导致RNO在440 nm处吸光度减小,此即为RNO脱色反应.RNO脱色反应随着光照时间的增加而增大,表明RB受光照射后使 ¹O₂增加;随着组氨酸或咪唑浓度的增加,RNO脱色反应增大;咪唑在RNO脱色反应中的作用更明显. ¹O₂淬灭剂NaN₃或DABCO存在时,RNO脱色反应降低.利用RNO脱色反应检测到莴苣类囊体在强光照射下产生的 ¹O₂,随着光强和照射时间增加,类囊体中 ¹O₂的产生增加.     

NO和H2O2诱导大豆根尖和边缘细胞耐铝反应的作用

 NO和H₂O₂是参与植物抗非生物胁迫反应的重要信号分子, 为了确定NO和H₂O₂在大豆(Glycine max)根尖和根边缘细胞(root border cells, RBCs)耐铝反应中的作用及其相互关系, 以‘浙春3号’大豆为材料, 研究了铝毒胁迫下大豆根尖内源NO和H₂O₂的变化, 以及外源NO和H₂O₂诱导大豆根尖和RBCs的耐铝反应。结果表明, 50 μmol·L^–1 Al处理48 h显著抑制大豆根的伸长, 提高Al在根尖的积累, 同时显著增加根尖内源NO和H₂O₂含量。施加0.25 mmol·L^–1外源NO供体亚硝基铁氰化钠(Na₂[Fe(CN)₅NO]·2H₂O, sodium nitroprusside, SNP)和0.1 mmol·L^–1H₂O₂, 能有效地缓解Al对大豆根伸长的抑制、根尖Al积累和RBCs 的死亡, 该缓解作用可以被0.05 mmol·L^–1 NO清除剂2-(4- 羧基苯)-4,4,5,5- 四甲基咪唑-1- 氧-3- 氧化物, 钾盐(C₁₄H₁₆N₂O₄·K, carboxy-PTIO, cPTIO)和150 U·mL^–1 H₂O₂清除酶(catalase, CAT)逆转。并且外源NO能够显著促进根尖H₂O₂的积累, 而外源H₂O₂对根尖NO的含量无显著影响。这表明NO和H₂O₂是诱导大豆根尖及RBCs耐铝反应的两种信号分子, NO可能通过调控H₂O₂的形成, 进而诱导大豆根尖及RBCs的耐铝反应。     

喷施铜和硼肥对忍冬生理生化及其茎藤指标成分的影响

以4年生忍冬为试验材料，采用盆栽和叶面喷施方式，设置不同质量浓度的铜肥(10，30，50 mg/L Cu²⁺，分别表示为Cu₁₀、Cu₃₀、Cu₅₀)和硼肥(20，40，60 mg/L B₄O^2-₇，分别表示为B₂₀、B₄₀、B₆₀)及其配施组合处理，测定忍冬叶片的光合参数以及茎藤的营养物质、药效成分含量、矿质离子含量，探究施铜和硼肥对忍冬光合生理、营养物质、矿质离子及其茎藤品质的影响，为优化忍冬栽培技术和提高其药材品质提供理论参考。结果表明：(1)喷施一定质量浓度的铜硼肥有助于提高忍冬叶片的净光合速率，尤以B₄₀Cu₅₀配施处理最佳；适宜质量浓度的铜硼肥有利于增加总叶绿素含量，高质量浓度的铜硼肥则起抑制作用。(2)配施铜硼肥对忍冬藤中营养物质及药效成分含量的影响比单施铜、硼肥更显著，其中B₄₀Cu₅₀处理可显著提高忍冬藤中可溶性蛋白、淀粉、还原糖含量，B₂₀Cu₁₀处理可显著提高可溶性糖含量；有利于忍冬藤中绿原酸和马钱苷积累的最佳配施处理分别是B₆₀Cu₅₀和B20Cu₃₀。(3)喷施铜硼肥对忍冬藤矿质离子的含量也具有显著的影响，单施与配施铜硼肥处理忍冬藤矿质离子含量均有增加，且配施铜硼肥比单施铜硼肥增加效果显著，尤以B₂₀Cu₁₀、B₂₀Cu₃₀、B₂₀Cu₅₀处理最佳。综合考虑，B₄₀Cu₅₀配施处理可有效增加忍冬藤的营养与药用指标成分含量，是忍冬叶面喷施铜和硼肥的最佳比例。