芽胞杆菌B13功能的初步研究

用选择性培养基从土壤中分离到芽胞杆菌B13。结果表明：芽胞杆菌B13能够同时溶解无机磷和分解有机磷,并且芽胞杆菌B13活菌及其发酵液能够抑制烟草青枯病菌和黄曲霉的生长;共培试验证明芽胞杆菌B13能够抑制烟草疫霉的生长;盆栽试验证明芽胞杆菌B13对烟草青枯病具有一定的防治效果。可以进一步将其开发出集解养分与抗病于一体的微生物活体制剂。     

利用响应面分析法优化胶质类芽胞杆菌初级种子培养基

采用响应面分析法（RSM）对胶质类芽胞杆菌的初级种子培养基进行了优化,以提高其菌体密度和后续发酵效率。首先采用单因子试验筛选出提升菌体密度的适宜碳源和氮源,分别为麦芽糖和胰蛋白胨,在此基础上采用Plackett Burman(PB)试验设计法,对9种影响菌体生长繁殖的因素进行了评价,结果表明,麦芽糖和MgSO₄·7H₂O对菌体繁殖影响最为显著。用快速登高试验逼近关键因素的最大响应区域,通过中心组合试验和验证试验,获得胶质类芽胞杆菌优化培养基成分为麦芽糖 2.5 g/L,胰蛋白胨1.0 g/L,MgSO₄·7H₂O 0.73 g/L,K₂HPO₄·3H₂O 0.4 g/L,NaCl 0.06 g/L,FeCl₃ 0.6 mg/L,水杨酸10 mg/L,CaCO₃ 1.0 g/L。使用该优化培养基可将菌体密度较优化前提高了近10倍,含量达到4.12×10² cfu/mL。结果为提高胶质类芽胞杆菌的生产发酵水平和保证产品质量提供依据。     

芽孢杆菌B1、B2对豌豆尖镰孢菌抗菌机理的研究*

同、异步培养结果表明:芽孢杆菌B₁、B₂对豌豆尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum Schl f.sp.pisi)有很强的抑菌作用。经B₁、B₂无菌液处理后的病原菌由灰白色变为白色,气生菌丝增多且纠结成团。抗菌显微特征是:导致病菌孢子和菌丝体膨大、畸形、原生质凝聚、孢子不萌发或萌发异常、菌丝生长点产生大量泡囊、生长受阻,后期菌丝体断裂、泡囊破裂、原生质外泄。B_{1相似文献}   

水产源芽胞杆菌的分离鉴定及生物学功能分析

筛选具有较好生物学功能的芽胞杆菌(Bacillus),用以改善池塘养殖过程饲料等有机物降解、抑制水体中的病原菌,对从健康养殖鱼虾塘水体中分离的菌株,进行生化试验和16S rDNA序列分子鉴定;通过产酶、耐酸、耐高温试验,抑菌试验以及安全性试验研究分离菌株的生物学功能。试验共筛选出8株细菌,经生化试验及16S rDNA序列的分子鉴定,确定菌株ZHX17、ZHX18、ZHX31为贝莱斯芽胞杆菌（Bacillus velezensis）,菌株ZHX14、ZHX15为地衣芽胞杆菌（Bacillus licheniformis）、菌株NSX4、NSX7、NSX9为枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis）。试验结果表明,8株芽胞杆菌均具有较强的耐酸、耐高温特性,其中3株贝莱斯芽胞杆菌具有较强的分泌淀粉酶、纤维素酶、蛋白酶的能力,抑菌效果好于其他5株芽胞杆菌。安全性试验结果表明,8株芽胞杆菌对草鱼、罗非鱼相对安全。8株芽胞杆菌同时具备分泌淀粉酶、纤维素酶和蛋白酶3种胞外酶的能力,其中贝莱斯芽胞杆菌具有较强的病原菌抑菌能力,可以作为病原拮抗益生菌做进一步研究。     

谷氨酸发酵中二价阳离子对噬菌体抑制作用初步观察

本文报道适当浓度的Ca²⁺、Fe²⁺在发酵液中能抑制噬菌体530对谷氨酸生产菌株T₆^-13、B₄的裂解,谷氨酸发酵产量不低于对照菌株。     

表达大肠杆菌K88ac-ST1-LTB融合蛋白基因工程菌株的构建

利用PCR技术,从大肠杆菌C83902质粒中扩增出K88ac基因、ST₁突变基因和LT_B基因,通过分离、纯化、内切酶酶切、连接和转化,构建了含K88ac-ST₁-LT_B融合基因表达载体的重组菌株BL21（DE3）（pXKST3LT5）。经酶切鉴定和DNA序列分析证实,构建的重组质粒pXKST3LT5中含有K88ac-ST₁-LT_B融合基因,且基因序列和阅读框架均正确。经ELISA检测,重组菌株表达的K88ac-ST₁-LT_B融合蛋白能够被ST₁单抗、LTB和K88ac抗体识别。经乳鼠灌胃试验证实,表达的融合蛋白已丧失天然ST₁肠毒素的活性。免疫实验结果表明,K88ac-ST₁-LT_B融合蛋白能够诱发小白鼠产生抗体,该抗体具有中和天然ST₁肠毒素的毒性作用,表明构建的重组菌株可以作为预防仔猪黄、白痢基因工程菌苗的候选菌株。     

RNA沉默手段分析烟草悬浮细胞中线粒体分裂蛋白NtFIS1A/1B功能

为了解烟草悬浮细胞中的线粒体分裂蛋白的功能,将拟南芥(Arabidopsis thaliana)的线粒体分裂复合体成员FIS1A和FIS1B在烟草(Nicotiana tabacum)表达序列数据库中进行序列比对,鉴定到烟草中的同源基因NtFIS1A 和NtFIS1B (NtFIS1A/1B).以烟草悬浮细胞为材料,通过RNA 干扰和人工microRNA 干扰技术抑制NtFIS1A/1B 的表达, RT-PCR 分析结果表明,RNA 沉默细胞系中NtFIS1A/1B 的转录受到抑制.观察RNA 沉默细胞系中的线粒体形态可见,当NtFIS1A/1B 的表达被抑制后,单个线粒体的平均面积显著增加.这些表明NtFIS1A/1B 参与了烟草悬浮细胞中线粒体分裂的调控,有助于了解烟草中线粒体的形态调控.     

外源H2O2对盐胁迫下小白菜种子萌发和幼苗生理特性的影响

以小白菜"甜脆青"为试材,研究不同浓度（5、10、25、50和100 mmol/L）过氧化氢（H₂O₂）浸种处理对100 mmol/L NaCl胁迫下小白菜（Brassica chinensis L.）种子萌发、幼苗生长及生理特性的影响。结果表明：100 mmol/L NaCl胁迫明显抑制小白菜种子的萌发状况和幼苗生长,发芽势、发芽指数、活力指数及幼苗根和芽长度和鲜重均明显降低,根和芽中CAT的活性及K⁺含量明显受到抑制,渗透调节物质、活性氧和MDA含量显著增加。不同浓度H₂O₂浸种处理提高了NaCl胁迫下小白菜种子发芽势、发芽指数和活力指数,促进小白菜根和芽的生长,增强了NaCl胁迫下根和芽中SOD、CAT和APX的活性及K⁺含量,降低O₂^-·产生速率及H₂O₂和MDA含量,进一步促进脯氨酸和可溶性糖含量的增加,降低体内Na⁺含量。其中以10 mmol/L H₂O₂处理缓解盐胁迫效果最好,明显缓解NaCl胁迫对小白菜种子萌发和幼苗生长的抑制。     

不同品系小鼠对炭疽芽胞杆菌弱毒株芽胞的敏感性研究

通过比较四种品系小鼠对炭疽芽胞杆菌（Bacillus anthracis）（简称炭疽杆菌）弱毒株芽胞的敏感性，确定炭疽杆菌弱毒株芽胞攻毒合适的动物模型。采用炭疽杆菌弱毒株A16Q1（pXO1-、pXO2+）和A16PI2（pXO1+、pXO2-）的芽胞对四种品系小鼠（DBA/2、KM、ICR和BALB/c）进行腹腔攻毒，记录小鼠死亡时间，计算LD₅₀、绘制存活曲线并统计分析。运用较敏感的KM小鼠研究不同canSNP基因型毒素缺陷株（含pXO2拷贝数不同）芽胞的毒力差异。利用更为敏感的DBA/2小鼠评价S-层蛋白BA3338对荚膜缺陷株芽胞毒力的影响。结果表明，在四种品系小鼠中，毒素缺陷株芽胞的毒力均高于荚膜缺陷株芽胞的毒力。DBA/2小鼠对炭疽杆菌弱毒株芽胞的剂量依赖关系最好，最为敏感，其次是KM小鼠，而ICR小鼠和BALB/c小鼠对炭疽杆菌弱毒株芽胞不敏感。确定了DBA/2小鼠和KM小鼠在炭疽杆菌弱毒株芽胞研究中的适用性。使用KM小鼠评价了不同canSNP基因型炭疽杆菌芽胞的毒力差异，结果表明，不同canSNP基因型炭疽杆菌由于所含pXO2质粒拷贝数的差异导致芽胞的毒力不同。使用DBA/2小鼠评价了S-层蛋白BA3338缺失对炭疽杆菌芽胞毒力的影响，表明BA3338基因的缺失导致炭疽杆菌芽胞毒力降低。     

喷施铜和硼肥对忍冬生理生化及其茎藤指标成分的影响

以4年生忍冬为试验材料，采用盆栽和叶面喷施方式，设置不同质量浓度的铜肥(10，30，50 mg/L Cu²⁺，分别表示为Cu₁₀、Cu₃₀、Cu₅₀)和硼肥(20，40，60 mg/L B₄O^2-₇，分别表示为B₂₀、B₄₀、B₆₀)及其配施组合处理，测定忍冬叶片的光合参数以及茎藤的营养物质、药效成分含量、矿质离子含量，探究施铜和硼肥对忍冬光合生理、营养物质、矿质离子及其茎藤品质的影响，为优化忍冬栽培技术和提高其药材品质提供理论参考。结果表明：(1)喷施一定质量浓度的铜硼肥有助于提高忍冬叶片的净光合速率，尤以B₄₀Cu₅₀配施处理最佳；适宜质量浓度的铜硼肥有利于增加总叶绿素含量，高质量浓度的铜硼肥则起抑制作用。(2)配施铜硼肥对忍冬藤中营养物质及药效成分含量的影响比单施铜、硼肥更显著，其中B₄₀Cu₅₀处理可显著提高忍冬藤中可溶性蛋白、淀粉、还原糖含量，B₂₀Cu₁₀处理可显著提高可溶性糖含量；有利于忍冬藤中绿原酸和马钱苷积累的最佳配施处理分别是B₆₀Cu₅₀和B20Cu₃₀。(3)喷施铜硼肥对忍冬藤矿质离子的含量也具有显著的影响，单施与配施铜硼肥处理忍冬藤矿质离子含量均有增加，且配施铜硼肥比单施铜硼肥增加效果显著，尤以B₂₀Cu₁₀、B₂₀Cu₃₀、B₂₀Cu₅₀处理最佳。综合考虑，B₄₀Cu₅₀配施处理可有效增加忍冬藤的营养与药用指标成分含量，是忍冬叶面喷施铜和硼肥的最佳比例。     

金针菇生料袋栽及营养基质的研究

呼吸是代谢的中心,呼吸强度在一般情况下可作为生理活性的指标。本文通过对金针菇、平菇,香菇各生长阶段呼吸强度的测定,为金针菇生料袋栽的可行性提供了生理依据;从栽培技术上证明生料袋栽的成败关键是温度和把握栽种时间;生料袋栽不会引起霉菌污染;金针菇培养料中添加适量的维生素B₁、B₂可明显提高经济效益。     

土地类芽胞杆菌(Paenibacillus terrae)NK3-4 EsxA结构与系统发育分析

前期研究在植物根际促生菌土地类芽胞杆菌(Paenibacillus terrae )NK3-4中发现一个EsxA编码基因,为明确该基因编码的蛋白的性质、结构及系统发生关系,对该基因进行了生物信息学分析。分析表明,该EsxA含有91个氨基酸,分子质量10 276.53 Da,理论pI 5.29,分子式为C₄₄₅H₇₁₁N₁₂₅O₁₄₆S₄,弱酸性,亲水,具有WEG保守基序,属于WXG超级家族成员;建模预测表明,自然状态下EsxA 形成不对称的同源二聚体,其中每个亚基都由一个β折叠连接两个α螺旋组成,两个α螺旋反向平行排列;二聚体中两个亚基的肽链呈反向排列,所有N末端和C末端均暴露在外,形成棒状表面形态,其中一个亚基的N端的不规则卷曲形成与棒状二聚体垂直的短柱形凸起;系统发育分析显示,EsxA在种内及种间进化关系虽是不保守的,但类芽胞杆菌源的EsxA与病原细菌的EsxA同源性较低,暗示类芽胞杆菌源EsxA可能与病原微生物的EsxA具有截然不同的功能。结果为包括NK3-4菌株在内的类芽胞杆菌属EsxA外源分泌表达条件,活性保持及功能的深入研究提供了理论依据。     

独行菜冷上调基因LaNHR2B的低温耐受性研究

新疆北部早春短命植物独行菜幼苗期能够在早春的低温条件下生长,具有良好的耐受低温胁迫的能力。前期研究获得了独行菜幼苗冷诱导上调表达基因片段,通过同源克隆获得该基因的全长cDNA序列（LaNHR2B）,运用生物信息学软件预测分析该基因编码蛋白的性质及其构象,采用荧光定量RT PCR技术分析其表达量与幼苗生长阶段、冷诱导处理以及外源ABA处理间的关系,通过转化拟南芥研究过表达该基因对植物幼苗低温耐受性的影响。结果表明：（1）LaNHR2B基因全长1 035 bp,编码344个氨基酸,蛋白质分子质量为85 791.16 kD,理论等电点为5.06,分子式为C₃₁₂₉H₅₂₂₅N₁₀₃₅O₁₃₀₇S₂₃₅;其蛋白主要由丙氨酸、苏氨酸、甘氨酸及半胱氨酸组成,具有3个跨膜结构,功能未知;在十字花科植物中保守性强,其他科的植物中未见同源基因。（2）LaNHR2B受4 ℃低温诱导显著上调表达,但随幼苗生长受低温诱导上调表达有所降低,与幼苗随发育耐受低温能力下降变化一致。（3）外源ABA可诱导LaNHR2B表达上调;过表达拟南芥幼苗低温耐受性明显增强。该研究初步证明,LaNHR2B表达量与独行菜幼苗耐受低温密切相关,可能是独行菜幼苗经过冷驯化后能够增强植株抗寒能力的功能性基因。这为进一步开发利用该基因进行油菜等作物抗寒育种提供理论依据。     

脱氮假单胞菌生产维生素B12过程中粪卟啉Ⅲ的测定及发酵调控

脱氮假单胞菌发酵生产维生素B₁₂过程中,副产物粪卟啉Ⅲ的积累对产物的代谢合成和分离提取有很大的影响。建立了发酵液中粪卟啉Ⅲ的HPLC快速测定方法,发酵液处理后直接进样测定,检测线性范围为12~275 μg/ml,重复性好。研究了不同供氧水平、二氧化碳浓度和pH值对发酵过程中维生素B₁₂和粪卟啉Ⅲ代谢合成的影响,并在120吨发酵罐中进行了发酵过程优化控制。结果表明:在发酵过程产物的合成期控制适当的供氧水平、控制二氧化碳浓度在8.6±0.8%、维持pH值在7.0±0.12能明显抑制卟啉Ⅲ的生物合成,同时使维生素B₁₂产量提高15%。     

转OvDREB2B基因陆地棉鉴定及其对水分渗透胁迫的分析

通过花粉管通道技术,以该实验室自育陆地棉品系TH₁和TH₂为材料,将诸葛菜(Orychophragmus vidaceus)抗逆转录因子OvDREB2B基因构建到植物表达载体后,导入棉花基因组,经卡那霉素筛选和分子鉴定表明目的基因已整合到棉花基因组中并表达。将T₁代转基因植株和受体对照在温室中栽培,待植株生长至四叶一心时,用不同渗透势的PEG-6000水溶液进行渗透胁迫处理,分析探讨转基因植株的抗旱效果及其抗旱机理。结果显示:当渗透势为0和0.5 MPa处理时,转基因植株和对照无明显差异;当渗透势为0.8 MPa和1.1 MPa处理时转基因植株较对照抗旱性明显提高。当渗透势为1.1 MPa处理96 h时,对照植株F_v/F_m降至0.2左右,而转基因植株仍正常生长,F_v/F_m值约为0.51,而且初始荧光（F₀）值、净光合速率（P_n）、胞间CO₂浓度（C_i）、蒸腾速率（T_r）等一系列参数转基因植株都明显优于对照,表明DREB2B基因能够提高棉花对水分胁迫的耐受性。     

抗人重组肿瘤坏死因子(rHTNFα)单克隆抗体的研制

肿瘤坏死因子(TNF)对许多肿瘤细胞具有细胞毒和抑制生长的作用。为进一步研究TNFα的结构和功能,并为临床研究提供rHTNFα纯品。本实验应用杂交瘤技术制备了一组抗rHTNFct单克隆抗体3、H₂、B₃,B₅、E₆、Zl₂、Z₈和Z₂₀)。ELISA结果证实它们鼻rlL－1、rlL-2、rlFNγ、rlFNα₁及E．Coli菌裂解液(MM₂₉₄)无均交叉反应,仅与rHTNFα有反应。Western blot结果进一步证实这组抗体对rHTNFα的特异性。这组抗体具有不同程度中和rHTNFα细胞毒能力。用抗rHTNFα抗体制备的亲和层析柱纯化rHTNFα,可以得到在SDS-PEAG上分子量为17000道尔顿的rHTNFα纯品。     

LED光质对走马胎生长和生理及活性成分含量的影响

该研究以走马胎幼苗为材料,采用红光(R)、蓝光(B)、红∶蓝=2∶1(R₂B₁)、红∶蓝=4∶1(R₄B₁)、红∶蓝=6∶1(R₆B₁)、红∶蓝=8∶1(R₈B₁)、紫光(P)以及绿光(G)共8 种不同的光质处理,并以自然光作为对照(CK),探究走马胎生长发育对不同光质的响应特征,为提高走马胎苗木质量和药用成分含量,以及珍贵药用植物的培育及保护提供依据。结果表明：(1)走马胎苗高在R处理下最高,地径、鲜重和干重在R₂B₁处理下达到最大值。(2)走马胎幼苗叶片的叶绿素含量在B处理下最高,在G处理下最低;在红蓝复合光处理中,随着蓝光比例的增大,叶绿素和类胡萝卜素含量呈现逐渐增加的趋势。(3)走马胎幼苗叶片丙二醛(MDA)和游离脯氨酸含量在G处理下最高,超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活性在B处理及适宜比例的红蓝复合光处理下更有利于得到提升。(4)走马胎幼苗叶绿素荧光参数在不同光质处理下均受到显著影响,PSⅡ最大光化学效率(F_v/F_m)和有效光化学效率［Y(Ⅱ)］均以R₂B₁处理最高,光化学淬灭系数(qP)以B处理最高,但与R₂B₁处理差异不显著;非光化学淬灭系数(NPQ)以R₈B₁和G处理较高,但两者间无显著差异。(5)走马胎幼苗皂苷含量虽然在B处理下最高,但R₂B₁处理更有利于提升单株皂苷产量。(6)综合参考所有指标表现,R₂B₁、B和R₄B₁处理均优于CK,且R₂B₁处理最有利于提高走马胎苗木质量及活性成分含量,并缩短培育周期,实现其高效生产利用。     

地衣芽孢杆菌产生碱性蛋白酶的动力学研究

应用自动控制发酵设备,首先进行分批发酵试验摸索了地衣芽孢杆菌2709生长与代谢的基本规律。然后采用补料分批发酵方法限制生长基质浓度,测定了一系列(S_I,μ_I)、(μ_j,q_pj)数据,获得K_S、μ_max、α、β等参数的值,并且推导出了细胞生长与产物合成的动力学公式,从而证明了用Monod方程描述地衣芽孢杆菌2709生长速率与基质浓度关系的合理性和合成碱性蛋白酶的发酵属于生长部分关联型。     

八株芽孢杆菌菌株的分类及固氮活性的测定

从8个省市的不同土壤分离了200个菌株,筛选出8株（JR₁,JR₂,JR₅,ZZ₃,ZZ₁₂,ZZ₁₆,M₁,K₄）能在无氮培养基上生长良好的典型的芽抱杆菌,其中6株（JR₁,JR₂,JR₄和ZZ₃,ZZ₁₂,ZZ     

碱提水溶性安络小皮伞多糖的研究——B1与B2的分离纯化及结构研究

从曾用水提取过水溶性多糖的安络小皮伞残渣中用稀碱液提取了二种水溶多糖B₁和B₂。它们分别给Sepharoe 4B柱,2B柱层析,超离心分析,醋酸纤维薄膜电泳鉴定,表明B₁和B₂均为纯多糖。采用气相色谱,红外光谱,淀粉酶解,甲基化分析等方法确定了它的基本结构。