乙型肝炎病毒X基因准种特点的研究

以乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）Ｘ基因序列的异质性表现来探讨ＨＢＶ准种在　慢性感染者中的存在状态。以中国株ＨＢＶ基因序列为依据,设计特异性多聚酶链反应引物,　自９例慢性ＨＢＶ感染患者血清中扩增ＨＢＶ　Ｘ基因,克隆入ｐＧＥＭ　Ｔｅａｓｙ质粒,随机挑选克隆进行Ｄ　ＮＡ测序以确定病毒的变异程度。３７例测序结果提示来源于不同患者ＨＢＶ　Ｘ基因序列高度保守　,但每个序列均不一致。Ｘ区除了存在广泛的碱基点替换突变外,序列的缺失突变占测序克　隆总数的５１．４％（１９／３７）;氨基酸缺失及移框突变多发生于１２３位氨基酸残基之后,可导致Ｘ蛋　白多种羧基端形式。结果提示ＨＢＶ长期携带者体内有ＨＢＶ准种共存,Ｘ区内存在热点缺失突变区,该区突变结果可能影响Ｘ蛋白反式激活功能。     

乙型肝炎病毒X基因研究的新进展

本文对近３年有关乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）Ｘ基因研究的国内外主要文献进行了综述,重点介绍了Ｘ蛋白的结构对其反式激活作用的影响、Ｘ蛋白与信号传导的关系、Ｘ蛋白对抑癌基因Ｐ５３和转化生长因子ＴＧＦ－β１功能的影响,以及Ｘ基因转基因小鼠模型的建立和反义核酸对该模型发展演进的阻抑作用。对Ｘ蛋白的组织、血清中的检测和相应单克隆抗体核素导向治疗也作了简要介绍。     

乙型肝炎病毒与肿瘤抑制基因p53相互作用的生物学功能及意义

以前的研究发现：ＨＢＶ Ｘ蛋白能与肿瘤抑制基因ｐ５３蛋白结合,在原发性肝癌的发生中具有重要意义。为进一步探讨二者之间的关系,经过计算机比较分析发现,在ＨＢＶ基因组中存在与经典的ｐ５３ＤＮＡ－蛋白质结合位点类似的序列（ＴＧＣＣＴ）,用含有此序列的ＨＢＶ基因片段作探针,与肝癌细胞核蛋白作用,通过凝胶电泳迁移率移位实验、凝胶电泳迁移率超移位实验和原位紫外线交联实验,确定其ＨＢＶ ＤＮＡ与ｐ５３蛋白的特异     

HBVX蛋白与基因调控和肿瘤形成的关系

乙型肝炎病毒Ｘ蛋白是乙型肝炎病毒基因组的四个开读框架之一,Ｘ－ＯＲＦ编码一分子量约为１７ｋＤ,约含有１５４个氨基酸的蛋白质。实验证实ＰＸ是一种反式作用因子,能与细胞内多种与转录、基因调节有关的因子结合,广泛激活病毒和细胞的启动子,参与基因调控,与ＨＢＶ慢性感染后所形成的肝细胞肿瘤密切相关。ＰＸ本身不具有直接结合双链ＤＮＡ的能力,它主要是通过蛋白与蛋白间的相互作用来行使功能,其中包括直接与一般转录因     

HCV/HBV复合抗原基因的克隆、表达及免疫应答研究

为探讨ＨＣＶ／ＨＢＶ 复合疫苗的可行性,将合成的丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）复合多表位抗原基因ＰＣＸ与ＨＢｓＡｇ 基因连接成ＰＣＸＳ基因,与β－半乳糖苷酶（ＧＺ）基因融合后在大肠杆菌及减毒鼠伤寒沙门氏菌中获得表达．目的蛋白ＧＺ－ＰＣＸＳ可被抗－ＨＢｓ 及抗－ＨＣＶ 抗体所特异识别．ＧＺ－ＰＣＸＳ抗原皮下注射免疫ＩＣＲ小鼠后,诱发了较高水平的抗－ＧＺ－ＰＣＸＳＩｇＧ反应．构建的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌ＳＬ３２６１（ｐＷＲ／ＰＣＸＳ）口服免疫小鼠后,诱发了高水平的ＣＤ８＋ Ｔ细胞增殖反应及抗ＧＺ－ＰＣＸＳＩｇＧ反应．所有免疫小鼠均未见明显的毒副作用．该研究揭示,ＨＣＶ／ＨＢＶ 复合抗原可诱发特异性体液免疫及细胞免疫应答,而活菌苗口服可能是理想的免疫途径,为ＨＣＶ／ＨＢＶ 双价疫苗研究提供了一定的理论及实验依据．     

家蚕病毒的表面增强拉曼光谱研究

得到并分析了家蚕核型多角体病毒（ＢｏｍｂｙｘｍｏｒｉＮｏｃｌｅａｒＰｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓＶｉｒｕｓ缩写为ＢｍＮＰＶ）和质型多角体病毒（ＢｏｍｂｙｘｍｏｒｉｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃＰｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓＶｉｒｕｓ缩写为ＢｍＣＰＶ）包涵体（即核型多角体ＢｍＮＰＢ和质型多角体ＢｍＣＰＢ）在银胶溶液中的表面增强拉曼散射（ＳＥＲＳ）光谱。ＢｍＮＰＢ和ＢｍＣＰＢ通过氨基酸残基侧链的Ｓ原子、ＣＯＯ－（ＣＯＯＨ）和ＮＨ２（ＮＨ）基团以及蛋白质分子的Ｎ－末端与银表面相作用。Ｔｒｐ残基金部或大部处于疏水环境中。ＢｍＮＰＢ中蛋氨酸残基侧链的Ｓ－ＣＨ２和ＣＨ２－ＣＨ２链分别为扭曲和扭曲式构型。ＢｍＣＰＢ中的Ｓ－ＣＨ２和ＣＨ２－ＣＨ２链则分别属于反式和扭曲构型;Ｃ－Ｃ－Ｓ－Ｓ－Ｃ－Ｃ链为反式－扭曲－反式结构。     

牛泡沫病毒（BSV）对牛免疫缺陷病毒（BIV）的激活作用

用瞬时表达分析等方法,证明牛泡沫病毒（ Ｂ Ｓ Ｖ）３０２６ 中国毒株能在体外激活牛免疫缺陷病毒（ Ｂ Ｉ Ｖ） 基因表达, Ｂ Ｓ Ｖ３０２６ 编码的反式激活因子 Ｂｏｒｆ１ 行使这种激活作用。缺失突变分析表明, Ｂｏｒｆ１ 在 Ｂ Ｉ Ｖ Ｌ Ｔ Ｒ 上靶序列位于－ ４１０／ － １１５（ ＋ １ 为转录起始位点） 区域,但其中的 Ｎ Ｆκ Ｂ 位点（ － ３６７／ － ３１９） 与这种激活作用无关,包括转录起点下游（ Ｒ Ｕ５ 区） 在内的－ １１５／ ＋ ２０４ 区域也与这种激活作用无关。该结果对研究 Ｂ Ｉ Ｖ 致病机理及防治 Ａ Ｉ Ｄ Ｓ 有重要意义。     

人类嗜T细胞白血病Ⅰ型病毒TAX蛋白对NF—kB转录因子的作用

人类嗜Ｔ细胞白血病Ⅰ型病毒（ＨＴＬＶ－Ⅰ）是成人Ｔ细胞白血病（ＡＴＬ）的致病因子,其编码的ＴＡＸ蛋白的反式激活在白血病形成中有重要作用。ＮＦ－ｋＢ是细胞活化和产生细胞因子的重要转录调控因子。正常情况下,ＮＦ－ｋＢ因子与抑制性蛋白ＩＫＢ结合,形成复合物存在于胞质中。ＴＡＸ蛋白可与ＩＫＢ激酶γ（ＩＫＫγ）直接结合,而后启动ＴＡＸ对ＩＫＫα和ＩＫＫβ的结合,并使之发生磷酸化。后者使ＩＫＢ蛋白降解,ＮＦ－     

牛泡沫病毒反式激活因子在内部启动子上应答元件的研究

泡沫病毒的基因转录依赖至少两个不同的启动子：ＬＴＲ调节病毒结构蛋白的表达,而内部启动子（ＩＰ）则起始调节蛋白ｍＲＮＡ的转录。牛泡沫病毒（ＢＦＶ）在ｅｎｖ与３’ＬＴＲ之间有两个重叠的开放阅读框架ｏｒｆ－１和ｏｒｆ－２,分别编码ＢＦＶ ＯＲＦ－１、ＯＲＦ－２等多种调节蛋白。这此蛋白中ＢＦＶ ＯＲＦ－１为转录激活因子,称为Ｔａｓｏ Ｔａｓ对ＬＴＲ及ＩＰ均有反式激活作用。ＢＦＶ中第二类启动子ＩＰ的存在反映     

乙型肝炎病毒adr亚型X蛋白在大肠杆菌中的高效表达

将ａｄｒ亚型ＨＢＶ的完整Ｘ基因克隆到表达质粒ｐＰｒｏＥＸＨＴｂ中,实现了Ｘ蛋白在大肠杆菌中的高效融合表达。表达产物全长１７９个氨基酸残基（其中Ｘ蛋白部分１５４个氨基酸残基）,分子量约１９．７ｋＤ,约占细菌总蛋白的３４％。其氨基端融合部分含有６组氨酸肽段,经ＨｉｓＴｒａｐＴＭ亲和层析纯化,一步可达纯度９３％。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析表明,该表达产物可与ＨＢＶ感染患者体内的抗Ｘ抗体特异性结合。     

牛免疫缺陷病毒长末端重复序列(BIV一LTR)在大肠杆菌中的启动子功能

牛免疫缺陷病毒（ＢＩＶ）的长末端重复序列（ＬＴＲ）含有病毒的启动子,调控病毒在真核细胞中的表达。我们将ＢＩＶＬＴＲ与萤火虫荧光素酶基因连接构建成重组质粒ｐＢＩＶ一Ｌｕｃ,该质粒能在Ｅｃｏｌｉ中有效地表达出荧光素酶的活性,从而证明ＢＩＶＬＴＲ在大肠杆菌中也具有启动子功能。Ｍｕｎｇｂｅａｎ核酸酶作图分析发现,ＢＩＶＬＴＲ在Ｅｃｏｌｉ中的转录起始位点位于Ｕ_３区,而不是在真核细胞中的Ｕ＿３一Ｒ交界处。同时我们也证实了ＢＩＶＬＴＲ在Ｅ,ｃｏｌｉ中仍可被ＢＩＶｔａｔ蛋白特异性地反式激活,为研究ｔａｔ蛋白的作用机制提供了一条新的途径。     

牛疱疹病毒Ⅰ型前早期基因BICPO的表达对牛免疫缺陷病毒LTR的反式激活作用

由含有ＢＨＢＶ－１（ＢｏｖｉｎｅＨｅｒｐｅｓＶｉｒｕｓ－１）前早期基因的基因组片段亚克隆ＢＩＣＰＯ（ＢＨＶ－１ＩｎｆｅｃｔｅｄＣｅｌｌＰｒｏｔｅｉｎＯ）的ＤＮＡ序列至表达载体ｐＳＶＫ３,构建质粒ｐＳＶ２．９。将该质粒与ｐＢＬＴＲ－Ｌｕｃ共转染小牛肺细胞,检测转染细胞裂解物的荧光素酶活性,ＢＩＣＰＯ的表达产物可以显著地激活ＢＩＶＬＴＲ启动子控制下的荧光素酶基因的表达。根据ｐＳＶ２．９与含有ＢＩＶＬＴＲ不同区段缺失的质粒ｐＤ－３１９－Ｌｕｃ、ｐＤ－１１５－Ｌｕｃ、ｐＤ－５２－Ｌｕｃ共转染小牛肺细胞的实验结果,推测ＢＩＶＬＴＲ－３１９位上游区的ＤＮＡ序列影响ＢＩＣＰＯ基因产物对ＢＩＶＬＴＲ表达的激活作用。     

SmithKline Beecham生物制品公司甲型肝炎灭活疫苗的研制及其临床考核结果

本文概述了ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ　Ｂｅｅｃｈａｍ（ＳＫＢ）生物制品公司研制的甲型肝炎灭活疫苗（商品名为ＨＡＶＲＩＸ）的毒株、细胞基质、疫苗制备与检定、疫苗的反应原性、免疫原性、免疫保护性和抗体持久性,许多临床试验表明,ＨＡＶＲＩＸ的安全性、免疫原性和保护效果令人鼓舞,可用于有效控制甲型肝炎的流行。     

胸苷激酶基因治疗胃癌的体外实验

将单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（ＨＳＶ－ｔｋ）导入恶性肿瘤细胞,随后可应用药物丙氧鸟苷（ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ, ＧＣＶ）选择性杀死肿瘤细胞．构建了含胸苷激酶与潮霉素磷酸转移酶（ｈｐｈ）融和基因（ＨｙｔＫ）的真核表达载体ＬＸｐｓｐ－ＨｙｔＫ．以脂质体（ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ）为介导,将这种质粒与仅含潮霉素Ｂ基因的质粒ＬＸＳＨ 分别转染胃癌细胞系ＢＧＣ－８２３,用６０ Ｕ／ｍ ｌ潮霉素Ｂ进行筛选,得到了可稳定传代的阳性克隆,分别命名为ＢＧＣ－ＨｙｔＫ 和ＢＧＣ－Ｈｙ．三种细胞的生长曲线无明显差别．用不同浓度的ＧＣＶ 分别作用于ＢＧＣ－ＨｙｔＫ, ＢＧＣ－Ｈｙ 及ＢＧＣ－８２３,０．０２～２００ μｇ／ｍ ｌ 的ＧＣＶ 对ＢＧＣ－ＨｙｔＫ 细胞有明显的杀伤作用（ＩＣ５０＝ ０．０２ μｇ／ｍ ｌ）,而对另外两种细胞几乎无毒性作用（ＩＣ５０＞ ２００μｇ／ｍ ｌ）．２０ μｇ／ｍ ｌＧＣＶ 作用９６ ｈ 后,仅存在２０％ 的ＢＧＣ－ＨｙｔＫ 就可使周围的大部分ＨＳＶ－ｔｋ－ 的肿瘤细胞死亡,说明存在较显著的“旁观者效应”     

牛疱疹病毒I型前早期基因BICPO的表达对牛免疫缺陷病毒LTR的反式激活…

由含有ＢＨＶ－１（Ｂｏｖｉｎｅ Ｈｅｒｐｅｓ Ｖｉｒｕｓ－１）前早期基因的基因组片段亚克隆ＩＣＰＯ（ＢＨＶ－１Ｉｎｆｅｃｔｅｄ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｏ）的ＤＮＡ序列至表达载体ｐＳＶＤ３,构建质粒ｐＳＶ２．９。将该质粒与ＰＢＬＴＲ－Ｌｕｃ共转染小牛肺细胞,检测转染细胞裂解物的荧光素酶活性,ＢＩＣＰＯ的表达产物可以显著地激活ＢＩＶ ＬＴＲ启动子控制下的荧光素酶基因的表达。根据ＰＳＶ２．９与含有Ｂ     

病毒性肝炎HAV，HBV，HCV，HDV和HEV重叠感染的研究

采用ＥＬＩＳＡ法检测了１０８例乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染者血清中的五种肝炎病毒──甲型（ＨＡＶ）、乙型（ＨＢＶ）、丙型（ＨＣＶ）、丁型（ＨＤＶ）和成型（ＨＥＶ）肝炎病毒的标志物,并采用ＰＣＲ技术检测了患者血清ＨＢＶＤＮＡ、ＨＣＶＲＮＡ及ＨＤＶＲＮＡ。结果五种肝炎病毒重叠感染者３５例（３２．４％）,单纯ＨＢＶ感染者７３例（６７．６％）。ＨＢＶ、ＨＡＶＭ重感染率为４．６％,ＨＢＶ、ＨＣＶ二重感染率为９．２％,ＨＢＶ、ＨＤＶＭ重感染率为１４．８％,ＨＢＶ、ＨＥＶ二重感染率为１．９％,ＨＢＶ、ＨＣＶ和ＨＤＶ三重感     

多聚TAR-CoreRNA诱饵对人免疫缺陷病毒1型Tat蛋白活性的抑制作用

为了抑制Ｔａｔ蛋白的反式激活作用,在细胞内大量表达外源ＴＡＲＲＮＡ使其与Ｔａｔ蛋白结合,从而竞争性抑制其与ＨＩＶ－１ＬＴＲ的ＴＡＲＲＮＡ元件结合．构建了以ＨＩＶ－１ＬＴＲＹＬ１５８（－１５８～＋１８０）为启动子,分别含有４,８和１５个拷贝的ＴＡＲ－ＣｏｒｅＲＮＡ诱饵（ｄｅｃｏｙ）表达质粒;以荧光酶基因为报告基因,检测了瞬时共转染体系中含不同拷贝数的ＴＡＲ－ＣｏｒｅＤＮＡ转录产物对Ｔａｔ蛋白反式激活作用的影响．结果证明,ＴＡＲ－ＣｏｒｅＲＮＡ诱饵对Ｔａｔ蛋白活性具有很强的抑制作用,其抑制程度与ＴＡＲ－ＣｏｒｅＤＮＡ串联体的拷贝数有关．     

乙型肝炎、肝硬变和肝癌中HBxAg的表达及其在肝癌发生中的作用

对３７９例良、恶性肝组织进行的免疫组织化学研究显示,３３％的慢性迁延性肝炎（６／１８）、７６％的慢性活动性肝炎（２６／３４）、９２％的肝硬变（５７／６２）和９７％的肝细胞性肝癌（ＨＣＣ）（５８／６０）中有ＨＢｘＡｇ表达,阳性率高于ＨＢｓＡｇ或ＨＢｃＡｇ。癌周肝中的ＨＢｘＡｇ阳性率显著高于非癌周肝。与其它２种ＨＢＶ抗原不同,ＨＢｘＡｇ表达在细胞类型上有较明显的选择性,在肝小多角细胞（ＳＰＬＣ）、小细胞性不典型增生（ＳＣＤ）及ＨＣＣ中较强。与ＩＧＦⅡ、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ｃ－ｍｙｃ和ＥＧＦ－Ｒ表达进行的对照研究表明ＨＢｘＡｇ与ＩＧＦⅡ和ｃ－ｅｒｂＢ－２这２种ＨＣＣ发生相关基因的表达关系密切。ＰＣＮＡ染色结果显示ＨＢｘＡｇ阳性组织的细胞增殖活性显著高于ＨＢｘＡｇ阴性组织。我们的结果还表明ＨＢｘＡｇ表达与肝细胞不典型增生的发生和进展有关、提出ＨＢＶＸ基因可能通过其表达产物（ＨＢｘＡｇ）首先激活ＩＧＦⅡ、ｃ－ｅｒｂＢ－２基因,继而引起显著的ＳＰＬＣ增生和ＳＣＤ而参与ＨＣＣ发生的．     

中国棉铃虫核型多角体病毒几丁质酶基因的定位与克隆

以α３２ＰｄＡＴＰ标记含ＣｆＭＮＰＶ几丁质酶基因的重组质粒为探针,在６８℃条件下对棉铃虫单粒包埋核型多角体病毒（ＨａＳＮＰＶ）进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交,将ＨａＳＮＰＶ的几丁质酶基因分别定位在ＢａｍＨＩＥ、ＢｇｌⅡＥ、ＥｃｏＲＩＧ、ＨｉｎｄⅢＦ、ＸｂａＩＨ、ＢａｍＨＩ＋ＨｉｎｄＩＩＭ和ＢａｍＨＩ＋ＸｂａＩＨ,并以ｐＴＺ１９Ｒ为载体获得了ＸｂａＩＨ片段克隆。     

乙型肝炎病毒表面抗原aa126 Ile→Ser变异株HBsAg的暂时表达和抗原性鉴定

曾在一个儿童患者体内,发现一个新的乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）变异株,其ＨＢｓＡｇ主蛋白ａａ１２６发生Ｉｌｅ（ＡＴＴ）到Ｓｅｒ（ＡＧＴ）的取代。已知ａｄｒ／ａｙｒ亚型ＨＢｓＡｇ１２６位为Ｉｌｅ,而ａｄｗ／ａｙｗ亚型ＨＢｓＡｇ１２６位为Ｔｈｒ,表明ＨＢｓＡｇ１２６Ｓｅｒ是一个新的变异株。用计算机做结构分析的结果表明,突变体ＨＢｓＡｇ１２６Ｓｅｒ主蛋白ａａ１２０－ａａ１３０区段的二级结构与野生型ａｄｒＨＢＶＨＢｓＡｇ１２６Ｉｌｅ相比发生明显的改变。这种构象的变化可能会影响ａ抗原决定簇（ａ１２４－ａａ１４７）的抗原性。为了证实这一点,构建了突变Ｓ基因表达质粒,在ＳＶ４０早期启动子的控制下进行抗原表达。利用ＨＢｓＡｇ９肽（Ｔｈｒ－Ｉｌｅ１２６－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ）抗ｉ单克隆抗体和９肽（Ｔｈｒ－Ｔｈｒ１２６－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ）抗ｔ单克隆抗体进行放射免疫测定,结果表明,这种Ｓｅｒ１２６突变蛋白对抗ｉ单克隆抗体的反应性比野生蛋白减弱,对抗ｔ单克隆抗体的反应性则与ＨＢｓＡｇ１２６Ｔｈｒ接近。但用三种抗－ａ单克隆抗体的检测结果揭示,突变蛋白ＨＢｓＡｇ１２６