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牛免疫缺陷病毒长末端重复序列(BIV—LTR)在大肠杆菌中的启动子功能 总被引:3,自引:1,他引:2
牛免疫缺陷病毒的长末端重复序列含有病毒的启动子,调控病毒在真核细胞中的表达。我们将BIV LTR与萤火虫荧光素酶基因连接构建成重组质粒pBIV=Luc,该质粒能在E.coli中有效地表达出荧光素酶的活性,从而证明了BIV LTR在大肠杆菌中也具有启动子功能。 相似文献
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牛疱疹病毒I型前早期基因BICPO的表达对牛免疫缺陷病毒LTR的反式激活… 总被引:2,自引:0,他引:2
由含有BHV-1(Bovine Herpes Virus-1)前早期基因的基因组片段亚克隆ICPO(BHV-1Infected Cell Protein O)的DNA序列至表达载体pSVD3,构建质粒pSV2.9。将该质粒与PBLTR-Luc共转染小牛肺细胞,检测转染细胞裂解物的荧光素酶活性,BICPO的表达产物可以显著地激活BIV LTR启动子控制下的荧光素酶基因的表达。根据PSV2.9与含有B 相似文献
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由含有BHBV-1(BovineHerpesVirus-1)前早期基因的基因组片段亚克隆BICPO(BHV-1InfectedCellProteinO)的DNA序列至表达载体pSVK3,构建质粒pSV2.9。将该质粒与pBLTR-Luc共转染小牛肺细胞,检测转染细胞裂解物的荧光素酶活性,BICPO的表达产物可以显著地激活BIVLTR启动子控制下的荧光素酶基因的表达。根据pSV2.9与含有BIVLTR不同区段缺失的质粒pD-319-Luc、pD-115-Luc、pD-52-Luc共转染小牛肺细胞的实验结果,推测BIVLTR-319位上游区的DNA序列影响BICPO基因产物对BIVLTR表达的激活作用。 相似文献
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牛免疫缺陷病毒 (Bovineimmunodeficiencyvirus,BIV )与人免疫缺陷病毒 (Humanim munodeficiencyvirus,HIV)同属反转录病毒科慢病毒属[1] 。BIV基因组 5′端的长末端重复序列 (LTR)起始病毒结构基因和非结构基因的转录[2 ] ,因而许多细胞因子和病毒编码的调节蛋白作用于LTR ,以调节BIV的基因表达。其中Tat蛋白是BIV的反式激活因子 ,可大大提高LTR的转录水平 ,在BIV的基因表达及基因组复制的调节中起重要作用[3 ] 。HIV、马传染性贫血病毒 (Equi… 相似文献
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将系列缺失的HIV1长末端重复序列(LTR)和全长的gagORF置于痘苗病毒载体中,经同源重组和血球吸附试验,成功地构建了6株重组痘苗病毒。免疫印迹和免疫酶试验检测均表明,6株重组病毒的Gag蛋白表达量因LTR不同而有明显差异,表明HIV1的LTR及其下游基因置于痘病毒启动子控制下,在痘苗病毒中表达时有下述特点:(1)不同的痘苗病毒启动子与全长LTR相互作用,对gag基因表达有显著不同的调控效果;(2)NR序列对Gag蛋白表达没有明显影响;(3)EN序列不能被重组痘苗病毒表达系统识别;(4)TAR序列可提高Gag蛋白的表达量;(5)U5区及下游非翻译序列不影响Gag蛋白的表达。 相似文献
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牛病毒性腹泻病毒基因组cDNA文库的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
以牛病毒性腹泻病毒(BVDV)┥nL株的基因组RNA为模板,经逆向转录酶作用,合成第一链cDNA,再以RNadse/H与DNA聚合酶I联合作用合成dscDNA,并以dC同聚物尾化。pUC8DNA在Pst I酶解后,以dG同聚物尾化,两者退火构成重组质粒,转化到E.coli JM101受体菌中,另以γ-^32P-ATP标记BVDV RNA制备探针,通过菌落原位杂交筛选重组子。酶切分配表明重组质粒插入 相似文献
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牛病毒性腹泻病毒(BVDV)对牛免疫缺陷病毒(BIV)的激活作用 总被引:6,自引:0,他引:6
通过合胞体分析和反转录酶活力测定,首次证明牛病毒性腹泻病毒能激活牛免疫缺陷病毒的复制与表达,并进一步通过转染实验和凝胶电泳漂移分析证明,当BIV LTR的NF-k B区缺失时,BVDV则不能实现其激活作用,BVDV直接或间接诱导牛NF-kB因子作用于BIV LTR的NF-kB区实现其激活作用。 相似文献
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高产稳产聚羟基烷酸的重组大肠杆菌的构建 总被引:7,自引:0,他引:7
重组大肠杆菌Escherichia coliHMS174(pTZ18UPHB) 含有携带聚羟基烷酸(PHA) 合成基因( phaCAB)** 的质粒pTZ18UPHB,是很有潜力的PHA 生产菌,但存在着质粒不稳定和不能合成3羟基丁酸(3HB) 与3羟基戊酸(3HV) 共聚物[P(3HBco3HV)] 的缺陷。将RK2 质粒上的par DE 基因引入pTZ18UPHB 构成质粒pJMC2 ,该质粒可以在宿主E.ColiHMS174 中稳定遗传。将培养基中的磷酸盐浓度降至18 m mol/L,发现E.Coli HMS174(pJMC2) 能够以丙酸为前体合成P(3HBco3HV) ,其中3HV 在共聚物中的含量为5 % ~8 % 。在5L自动发酵罐中分批补料培养E.Coli HMS174(pJMC2) ,培养基初始磷酸盐浓度为15 m mol/L,30 h 后每升培养液中干菌体可达42-5 g,P(3HBco3HV) 占干重的70 % ,其中3HV 在共聚物中的含量为4-9 % 。 相似文献
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从一名国内感染的艾滋病人采血,分离其外周血单核细胞(PMCs)。首先与正常的PMCs共培养,4周后检测其HIV-1p24抗原(ELISA)达到峰值。用此时的细胞及其上清分别感染Jurkat-tat、CEM、MT4细胞,可很快地在这三株细胞中检测到HIV生长,HIV在Jurkat-tat细胞中生长情况最好,同时用病人血清直接感染Jurkat-tat和MT4细胞,4周后检测其细胞上清HIV-1p24抗原(ELISA法)为阳性,但OD值很低(约为PMC共培养组的一半)。用病人的少量全血与正常PMCs共培养,得到的结果与分离病人PMCs法相近。应用间接免疫荧光法(IFA)、免疫酶法(IEA)、蛋白印迹法及HIV-1POl基因和Env基因特异引物的聚合酶链反应(PCR)等证实为HIV-1病毒。分离的HIV在Jurkat-tat细胞中连续传代,细胞被感染后2-3天即出现以大量融合细胞为主的细胞病变,感染后7-10天细胞几乎全部死亡。病毒在连续传代过程中的生长特征及致细胞病变特征不变。此病毒命名为CA-2毒株。 相似文献
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Epstein-Barr病毒膜抗原基因免疫的研究 总被引:4,自引:0,他引:4
将Epstein-Bar病毒(EBV)膜抗原(MA)BLLF1基因,插入含有CMV启动子的真核表达载体pcDNA3下游BamHI位点,构建成真核表达质粒pcDNA3-MA。将纯化的DNA注射Balb/c小鼠股四头肌。经免疫的动物产生抗EB病毒MA特异性的抗体和中和抗体,依赖抗体细胞介导的细胞毒作用(ADCC),特异性T淋巴细胞增生性反应及细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤作用。基因免疫与基因-蛋白联合免疫效果相似。不同启动子控制下的MA基因,诱发小鼠免疫应答无明显差异。 相似文献
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汉滩病毒核壳蛋白(NP)在杆状病毒系统的表达及其免疫原性研究 总被引:11,自引:0,他引:11
应用杆状病毒表达载体成功地表达了汉滩病毒76-118株(HTNV)核壳蛋白,将HTNVS基因插入杆状病毒转染质粒pAcYMIB的多角体基因启动子下游附近,与经Bsu361酶切线性化的杆状病毒(AcVEPA)DNA共同转染S19细胞,经空斑筛选获得了高效表达NP的重组杆状病毒(AcVHanS)。经SDS-PAGE和Western blot证实,表达产物与HTNV毒粒NP分子量均为50KD左右,紫外扫 相似文献
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含有Epstein-Barr病毒膜抗原的重组表达质粒及其基因免疫 总被引:1,自引:0,他引:1
将Epstein-Bar(EB)病毒主要的膜抗原(MA)BLLF1基因片段插入pHD101-3质粒的CMV启动子下游,构建了真核表达质粒pHD-gp350,并转染293细胞进行瞬间表达。用免疫荧光法从细胞膜检测到表达的抗原能与其单克隆抗体发生特异性结合,Western-blot法证实,表达的抗原分子量为350kD.用能在真核细胞表达的重组质粒pHD-gp350的DNA,经Sepharose2B柱纯化后,注射经普鲁卡因预处理的Balb/C小鼠的四头肌,观察到EBV-IgA/MA抗体水平比EBV-IgG/MA低,而EBV-IgA/MA的持续时间比EBV-IgG/MA长。采用表达EBVMA的质粒DNA与CHO细胞表达的MA蛋白免疫小鼠,均获得抗EBVMA的抗体。 相似文献
15.
将Epstein-Barr(EB)病毒主要的膜抗原(MA)BLLF1基因片段插入pHD101-3质粒的CMV启动子下游,构建了真核表达质粒pHD-gp350,并转染293细胞进行瞬间表达。用免疫荧光法从细胞膜检测到表达的抗原能与其单克隆抗体发生特异性结合。Westem-blot法证实,表达的抗原分子量为350kD。用能在真核细胞表达的重组质粒pHD-gp350的DNA,经Sepharose 2B柱 相似文献
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将Epstein-Barr病毒(EBV)膜抗原(MA)BLLF1基因,插入含有CMV启动子的真核表达载体pcDNA3下游BamHI位点,构建成真核表达质粒pcDNA3-MA。将纯化的DNA注射Balb/c小鼠股四头肌。经免疫的动物产生抗EB病毒MA特异性的抗体和中和抗体,依赖抗体细胞介导的细胞毒作用(ADCC),特异性T淋巴细胞增生性反应及细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤作用。基因免疫与基因-蛋白 相似文献
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以甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)内蒙分离物的总RNA为模板,通过反转录-PCR扩增获得BNYVVRNA3全长cDNA。将其克隆到pGEM-7Zf(+)上,得到重组质粒pGBY56。序列分析结果表明,内蒙分离物RNA3基因组全长为1775nt,其中包含3个开放阅读框架,分别编码25kD蛋白、4.6kD蛋白和一种由59个氨基酸组成的N蛋白。与法国F2分离物、德国G1分离物和日本S分离物相比,其核苷酸序列的同源性分别为96.4%、96.8%和97.3%。将25kD蛋白编码基因克隆到pJW2上,构建了该基因的原核表达载体。SDS-PAGE和Westernbloting分析结果表明,25kD蛋白基因在E.coliBL21(DE3)中经温度(42℃)诱导后,可特异地表达25kD蛋白 相似文献
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用瞬时表达分析等方法,证明牛泡沫病毒( B S V)3026 中国毒株能在体外激活牛免疫缺陷病毒( B I V) 基因表达, B S V3026 编码的反式激活因子 Borf1 行使这种激活作用。缺失突变分析表明, Borf1 在 B I V L T R 上靶序列位于- 410/ - 115( + 1 为转录起始位点) 区域,但其中的 N Fκ B 位点( - 367/ - 319) 与这种激活作用无关,包括转录起点下游( R U5 区) 在内的- 115/ + 204 区域也与这种激活作用无关。该结果对研究 B I V 致病机理及防治 A I D S 有重要意义。 相似文献
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Epstein—Barr病毒膜抗原在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中的表达 总被引:9,自引:3,他引:6
将切去3'端穿膜序列的EB病毒膜抗原(MA)基因,插入pSV2-dhfr质粒的SV40早期启动子下游,构建了真核表达载体pSV2-dhfrGPTR,使两个SV40早期启动子分别调控MA和二氢叶酸还原酶(dhfr)基因。将该重组质粒转化CHO-dhfr细胞。在选择培养基中筛选阳性克隆,用氨甲喋呤加压扩增,建立了表达EBV-MA的克隆细胞系。Western bolt分析证明,所表达的蛋白的分子量大约为 相似文献
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牛泡沫病毒(BSV)3026毒株的分离及分子生物学鉴定 总被引:12,自引:3,他引:9
从一头牛免疫缺陷病毒(BIV)检测阳性3026号牛外周血中,分离到一株病毒,即3026病毒株。体外细胞增减和反转录分析证明,此病毒是一反转录病毒。可胎牛肺细胞中引起典型的泡沫样病变,形成合胞体,PCR扩增和Southem杂交显示,此病毒的CDNA和PCR产的均可与牛泡沫病毒(BSV)阳性对照的HirtDNA杂交。3‘LTR上游一段330bp的PCR产物序理分析表明,3026毒株与BSV阳性对照相比 相似文献