活性氧所致超氧化物歧化酶肽链断裂的观察

探究活性氧所致铜锌超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）肽链断裂的情况。将过氧化氢或抗坏血酸－Ｆｅ（Ⅲ）分别作用于马来酰亚胺标记的ＳＯＤ,然后用高效液相反相色谱（ＲＰＨＰＬＣ）分析,经１ｍｍｏｌ／ＬＨ２Ｏ２处理后ＳＯＤ用ＲＰ－ＨＰＬＣ分离出二个肽段,用顺磁共振检测显示只有一个肽段具有马来酰亚胺信号,经５ｍｍｏｌ／ＬＨ２Ｏ２处理后ＳＯＤ有四个肽段生成,其中有一个肽段具有马来酰亚胺信号,用５ｍｍｏｌ／Ｌ抗坏血酸和０．０１ｍｍｏｌ／ＬＦｅＣｌ３处理后ＳＯＤ有三个肽段生成,用５０ｍｍｏｌ／Ｌ抗坏血酸及１．０ｍｍｏｌ／ＬＦｅＣｌ３处理后ＳＯＤ也产生相同的三个肽段,只是肽段的量多．结果提示Ｈ２Ｏ２所致ＳＯＤ肽链断裂无“定点”现象,而抗坏血酸－Ｆｅ（Ⅲ）所致ＳＯＤ肽链断裂呈“定点”断裂。     

硒对培养人胚肝细胞Ⅲ型前胶原,羟脯氨酸合成的影响

原代培养人胚肝细胞经１．１５６×１０￣(－７）ｍｏｌ／Ｌ硒预处理４ｈ,加入２０ｍｍｏｌ／Ｌ四氟化碳作用２０ｈ,观察硒对其Ⅲ型前胶原（ＰＣⅢ）和羟脯氨酸（Ｈｙｐ）生成的影响。结果培养液中ＰＣⅢ水平、细胞内Ｈｙｐ含量及细胞内外丙二醛（ＭＤＡ）水平均降低,与未加硒对照组比较差别有显著性（Ｐ＜０．０１）。而硒谷腕甘肽过氧化物酶（Ｓｅ－ＧＳＨ－ＰＸ）活性则较对照组显著增高（Ｐ＜０．００１）,且ＰＣⅢ水平与Ｓｅ－ＧＳＨ－Ｐ＿Ｘ／ＭＤＡ比值呈负相关（ｒ＝－０．９１５６,Ｐ＜０．０１）。提示硒可提高Ｓｅ－ＧＳＨ－Ｐ＿Ｘ／ＭＤＡ比值,抑制脂质过氧化激发的肝细胞胶原合成。     

H_2O_2－Fe~（3＋）所致人淋巴细胞DNA双链断裂损伤

采用脉冲电场凝胶电泳法检测Ｈ２Ｏ２－Ｆｅ（３＋）体系产生的ＯＨ对人淋巴细胞ＤＮＡ的双链断裂损伤．Ｈ２Ｏ２－Ｆｅ（３＋）浓度与ＤＮＡ双链断裂呈明显量效关系;随ＯＨ作用时间延长,细胞ＤＮＡ双链断裂加重;过氧化氢酶对ＯＨ损伤有明显抑制作用．脉冲电场凝胶电泳法可检测到的Ｈ２Ｏ２和ＦｅＣｌ３引起细胞ＤＮＡ双链断裂的最低浓度为０．３ｍｍｏｌ／Ｌ和６μｍｏｌ／Ｌ．     

LHRH—A2及无机离子促进草鱼脑垂体离体分泌GH的初步研究

用培养瓶（皿）培养法研究ＬＨＲＨ－Ａ２、Ｃａ＾２＋、Ｋ＾＋对草鱼脑垂体器官分泌ＧＨ的影响。结果表明，１ｎｍｏｌ／Ｌ、１０ｎｍｏｌ／Ｌ、１００ｎｍｏｌ／Ｌ和１０００ｎｍｏｌ／Ｌ的ＬＨＲＨ－Ａ２都能显著促进ＧＨ的分泌；随着Ｃａ＾２＋浓度（０．１、１、３ｍｍｏｌ／Ｌ）的增高ＧＨ的分泌增强，在１ｍｏｌ／Ｌ和３ｍｍｏｌ／Ｌ Ｃａ＾２＋条件下的ＧＨ分泌水平显著高于在０．１ｍｍｏｌ／Ｌ Ｃａ＾２＋条件下的ＧＨ分     

生长抑素对羟自由基损伤的人胃粘膜上皮细胞系GES—1的影响

目的和方法：采用人胃粘膜上皮细胞系ＧＥＳ１细胞传代培养技术,利用Ｆｅ２＋与Ｈ２Ｏ２反应生成的羟自由基（ｈｙｄｒｏｘｙｌｒａｄｉｃａｌ,ＯＨ·）建立细胞损伤模型,探讨ＯＨ·损伤人胃粘膜细胞的机制,观察生长抑素（ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎ,ＳＳ）对ＧＥＳ１细胞抗ＯＨ·损伤的影响。结果：（１）ＯＨ·可直接损伤ＧＥＳ１细胞,表现为细胞存活率下降而细胞乳酸脱氢酶（ｌａｃｔａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ,ＬＤＨ）漏出量增多;预先在细胞培养液中加入ＯＨ·特异性清除剂二甲基亚砜（５ｍｍｏｌ／Ｌ）,可预防该损伤。预先加入ＳＳ（０．０１ｍｇ／Ｌ,０．１ｍｇ／Ｌ,１．０ｍｇ／Ｌ,１０ｍｇ／Ｌ）对细胞存活率和细胞ＬＤＨ漏出量无影响;（２）加入ＯＨ·后,细胞丙二醛（ＭＤＡ）、氧化型谷胱甘肽（ＧＳＳＧ）含量上升而还原型谷胱甘肽（ＧＳＨ）含量下降。以ＳＳ０．１ｍｇ／Ｌ,１．０ｍｇ／Ｌ,１０ｍｇ／Ｌ预处理,可部分减轻上述改变。结论：ＯＨ·可直接损伤ＧＥＳ１细胞,其机制与破坏细胞的巯基稳态及加重细胞的脂质过氧化程度有关;ＳＳ可通过维持细胞的巯基稳态,部分减轻ＯＨ·所致的ＧＥＳ１细胞脂质过氧化程度。     

山豆根木葡聚糖的研究

研究了山豆根中一种木葡聚糖的结构．用１ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ提取,ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５离子交换柱层析,Ｆｅｈｌｉｎｇ试剂分级得到山豆根木葡聚糖组分ＳＳｂ－１ＦＡ,用完全酸水解,甲基化分析,部分酸水解,三氧化铬氧化和１Ｈ,１３ＣＮＭＲ等方法对其结构进行研究．结果表明：ＳＳｂ－１ＦＡ的分子量为２．６×１０４,比旋光度［α］２０Ｄ＝＋１０．９°（ｃ０．２２,Ｈ２Ｏ）,由Ｌ－Ｆｕｃ,Ｄ－Ｘｙｌ,Ｄ－Ｇａｌ和Ｄ－Ｇｌｃ组成,摩尔比为：２．９２９．９７．５５９．８．ＳＳｂ－１ＦＡ由１→４连接的β－Ｄ－Ｇｌｃ残基构成主链,分枝有α－Ｄ－Ｘｙｌ（１→,β－Ｄ－Ｇａｌ（１→２）α－Ｄ－Ｘｙｌ（１→等类型,部分非还原末端由Ｌ－Ｆｕｃ（１→构成．     

南方鲇碱性磷酸酶的分离纯化及部分性质的研究

用正丁醇抽提,硫酸铵分级沉淀,ＤＥＡＥ－纤维素和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００柱层析,从南方鲇（Ｓｉｌｕｒｕｓ　ｍｅｒｉｄｉｏｎａｌｉｓ　Ｃｈｅｎ）肠粘膜中提取出碱性磷酸酶（ＡＫＰ）。提纯倍数为３９．５０倍,比活为６８．３５μ／ｍｇ蛋白,提取酶液经ＰＡＧＥ和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ只呈现一条区带。该酶的分子量为１３２１４０,Ｎ末端氨基酸为门冬氨酸,最适ｐＨ为１０．１０,７．５＞ｐＨ＞１１．５时不稳定,最适温度为４０℃左右,对热不很稳定,以磷酸苯二钠为底物其Ｋ_ｍ值为１．７２×１０~（－３）ｍｏｌ／Ｌ。Ｍｇ~（２＋）、Ｍｎ~（２＋）为该酶的激活剂,ＫＨ_２ＰＯ_４、Ｌ－ＣｙＳ、ＭＥ、ＤＦＰ、ＥＤＴＡ－Ｎａ_２为抑制剂。选用ＫＨ_２ＰＯ_４和ＤＦＰ作抑制类型的判断,结果表明,ＫＨ_２ＰＯ_４属竞争性掏剂,其抑制常数为２．３ｍｍｏｌ／Ｌ;ＤＦＰ为非竞争性抑制剂,抑制常数为１．０５ｍｍｏｌ／Ｌ。     

箬叶多糖的分离纯化及其理化性质的研究

采用分步提取的方式从中药箬叶中分离得到８种多糖组分：酸性杂多糖ＦＳ、ＦＥ、ＦⅠ,β－Ｄ－葡萄糖醛酸聚糖ＦⅡ和四种半纤维素多糖α－Ｄ－木聚糖ＦⅢ－ａ、ＦⅢ－ｂ、ＦⅣ－ａ及ＦⅣ－ｂ．紫外光谱、红外光谱、凝胶色谱、元素分析等结果表明８种箬叶多糖为纯品．并采用纸层析,气相色谱分析确定其单糖组成．采用高效凝胶渗透色谱ＧＰＣ法测定了４种箬叶多糖ＦＥ、ＦⅠ、ＦⅢ－ａ及ＦⅣ－ａ的重均分子量Ｍｗ、数均分子量Ｍｎ,均为大分子,分子量分布较窄,纯度较高．     

活性氧所致超氧化物歧化酶肽链断裂的观察

探究活性氧所致铜锌超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）肽链断裂的情况,将过氧化氢或抗坏血酸－Ｆｅ（Ⅲ）分另竽马来酰亚胺标记的ＳＯＤ,然后用高效液相反应相色谱（ＲＰ－ＨＰＬＣ）分析,经１ｍｍｏｌ／ＬＨ２Ｏ２处理后ＳＯＤ用ＲＰ－ＨＰＬＣ分离出二个肽段,用顺磁共振检测显示只有一个肽段具有马来酰亚胺信号经５ｍｍｏｌ／ＬＨ２Ｏ２处理后ＳＯＤ有四个肽段生成,其中有一个肽段具有马来酰亚胺信号,用５ｍｍｏｌ／Ｌ抗坏血酸和０．     

玉米根细胞中对钒酸盐敏感的H~＋－泵的研究

用奎吖咽（ｑｕｉｎａｃｒｉｎｅ）作荧光指标剂,测定玉米（ＺｅａｍａｙｓＬ．）根尖微粒体（ＭＩＣ）膜囊泡的Ｈ~＋－泵活性,结果表明１ｍｍｏｌ／ＬＮａＮ_３仅抑制该泵活性约８％,而０．８ｍｍｏｌ／Ｌ钒酸盐（Ｖａｎ）则可抑制其活性达８０％,说明ＭＩＣ制剂中Ｈ~＋－泵活性主要由质膜（ＰＭ）Ｈ~＋－ＡＴＰａｓｅ产生。此泵活性严格需要Ｍｇ~（２＋）,二价阳离子作用大小的顺序为Ｍｇ~（２＋）＞Ｍｎ~（２＋）＞Ｚｎ~（２＋）＞Ｃａ~（２＋）＝０;阴离子作用大小的１顺序为Ｂｒ~－＞Ｃｌ~－＞ＮＯ_３~－＞ＳＯ_４~（２－）,并初步证实当质膜同侧发生电子传递时,没有跨膜Ｈ~＋梯度（△μＨ~＋）生成。     

豆壳过氧化物酶的分离纯化及其性质研究

从豆壳抽提液经硫酸铵分级沉淀,ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０离子交换层析,ＣｏｎＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲合层析和Ｂｉｏ－ＧｅｌＰ－６０凝胶过滤,纯化了豆壳过氧化物酶（ｓｏｙｂｅａｎｈｕｌｐｅｒ－ｏｘｉｄａｓｅ,ＳｈＰ）．纯化酶的比活力为７０７７Ｕ／ｍｇ,在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上显示出一条蛋白质带．ＳｈＰ分子量为３８０００,等电点为３．９;ＳｈＰ为一含血红素的糖蛋白,含糖量为１８．７％,光谱学分析揭示,在４０６ｎｍ处有一典型的Ｓｏｒｅｔ带,在５１０ｎｍ和６４０ｎｍ处有特征吸收峰．酶反应的最适ｐＨ在４．０附近,最适温度为４５℃;在ｐＨ２．５～１２．０之间较稳定,７５℃,保温６０ｍｉｎ,酶活力残余６８％,ＳｈＰ是一种良好的耐酸碱、耐热过氧化物酶．动力学分析求得ＳｈＰ的表观Ｋｍ（愈创木酚）为１．６２ｍｍｏｌ／Ｌ,表现Ｋｍ（Ｈ２Ｏ２）为０．３４ｍｍｏｌ／Ｌ．在所测定的化学试剂中,Ｎ－３、ＣＮ－、Ｆｅ３＋、Ｆｅ２＋和Ｓｎ２＋对酶有较强烈的抑制作用,而重金属离子Ａｇ＋、Ｈｇ２＋、Ｐｂ２＋、Ｃｕ２＋、Ｃｒ３＋以及ＳＤＳ和ＥＤＴＡ对酶活力无显著影响     

羟自由基对心肌线粒体膜的影响及硒的效应

由Ｈ２Ｏ２和ＦｅＳＯ４体系产生的羟自由基（ＯＨ·）作用于大鼠心肌线粒体后,其膜脂双层内产生了脂类自由基。在观测时间内,其脂类自由基与自旋捕捉剂形成的自旋加合物的电子自旋共振（ＥＳＲ）信号强度随着孵育时间的延长而加强。一定浓度的硒代蛋氨酸（Ｓｅ—Ｍｅｔ）或Ｎａ２ＳｅＯ３可明显清除ＯＨ·并抑制脂类自由基的产生。在ＯＨ·的影响下,荧光探针ＤＰＨ在心肌线体膜脂中的荧光寿命和膜脂流动性的测试结果发生了明显变化。与此同时,心肌线粒体膜的能量转换过程（氧化磷酸化效率和呼吸控制率）也发生了显著的改变。１．０μｍｏｌ／Ｌ的Ｓｅ—Ｍｅｔ或２．３μｍｏｌ／Ｌ的Ｎａ２ＳｅＯ３可明显拮抗ＯＨ·的上述影响。前者的作用更为显著。     

多胺对裸大麦离体叶片活性氧代谢的影响

裸大麦离体叶片分别在光照和暗诱导下,以腐胺、亚精胺和精胺等３种多胺,分别用２ｍｍｏｌ／Ｌ,０．５ｍｍｏｌ／Ｌ,和０．２ｍｍｏｌ／Ｌ３种浓度处理,均使丙二醛累积减少,延缓过氧化氢酶和ＳＯＤ活性的下降。以ＣａＣｌ２（５ｍｍｏｌ／Ｌ）＋Ｓｐｄ（０．５ｍｍｏｌ／Ｌ）处理,可降低Ｓｐｄ（０．５ｍｍｏｌ／Ｌ）的效应,因此多胺延缓离体叶片衰老与活性氧代谢有关,并且进入细胞时,与Ｃａ发生竞争。     

L-SOD发挥活性作用的可能机制

氧化剂、还原剂处理前后,Ｌ－ＳＯＤ的活性及紫外光谱发生变化,Ｈ２Ｏ２使Ｆｅ（Ⅲ）吸收增强,同时钝化Ｌ－ＳＯＤ的活性;加入保险粉后,Ｌ－ＳＯＤ重新活化,Ｆｅ（Ⅲ）吸收减弱．ＮＥＭ封闭Ｃｙｓ后,Ｌ－ＳＯＤ紫外吸收谱发生变化,且活性减弱．说明Ｆｅ辅基及Ｃｙｓ是活性发挥的必需基团．     

杜氏盐藻细胞质膜氧化还原系统

杜氏盐藻细胞质膜具的氧化ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ,还原Ｆｅ（ＣＮ）＾３－６和Ｏ２的氧化还原系统。当Ｆｅ（ＣＮ）＾３－６浓度为０．６ｍｍｏｌ／Ｌ,氧化ＮＡＤＨ的Ｋｍ为９６μｍｏｌ／Ｌ,Ｖｍａｘ为１５９ｎｍｏｌ１０＾－８ｃｅｌｌｓｍｉｎ＾－１,最适ｐＨ为８．５。ＴｒｉｔｏｎＸ－１００可促进ＮＡＤＨ和Ｆｅ（ＣＮ）＾３－６的氧化还原活性。ＮＡＤＨ能促进藻细胞的氧吸收,最适ｐＨ为８．５。在无外源电子供体存在时,细胞质     

树舌多糖CF2a溶液中构象行为的研究

根据刚果红实验,不同ＮａＣｌ浓度中分子量测定,不同ＮａＯＨ浓度,不同ｐＨ下［ａ］ｄ,ＣＤ谱及ηＳＤ／Ｃ的变化,推测ＣＦ２ａ在纯水中为三股螺旋,在稀盐溶液２中为单股螺旋,在ＤＭＳＯ－Ｈ２Ｏ体系中,体积分数φＨ２Ｏ降至０．２后三股螺旋解离为单股螺旋。在ＤＭＳＯ中单股螺旋随脲浓度增加转为无序结构,脲,酸,碱等影响氢键因素对ＣＦ２ａ水溶液之［ａ］Ｄ,ηＳＤ／Ｃ均有显著影响,表明维持ＣＦ２ａ在溶液中有序构象     

细胞松驰素B促微丝解聚对DNA合成的作用

利用微丝（ｍｉｃｒｏｆｉｌａｍｅｎｔ,ＭＦ）解聚药物细胞松驰素Ｂ（ｃｙｔｏｃｈａｌａｓｉｎＢ,ＣＢ）处理Ｇ_０期小鼠Ｃ_３Ｈ_（１０）Ｔ_（１／２）成纤维细胞,对Ｇ_０至Ｓ期ＤＮＡ合成,胸腺嘧啶核苷激酶（ｔｈｙｍｉｄｉｎｅｋｉｎａｓｅ,ＴＫ）活性、ＴＫ基因表达、钙调素（ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ,ＣａＭ）水平和一些细胞周期早期基因的表达进行了观察,Ｇ_０期细胞经３ｍｇ／ＬＣＢ处理２ｈ,促ＭＦ解聚增强了血清对Ｓ期细胞ＴＫ活性、ＴＫ基因表达和ＤＮＡ合成的刺激作用,并促进细胞提前进入Ｓ期．血清刺激Ｇ_０期细胞进入晚Ｇ_１期和Ｓ期时,ＣａＭ水平明显升高,而ＣＢ预处理则使ＣａＭ含量进一步增加,特别是ＣＢ处理促使Ｓ期ＣａＭ增加向核内转移．ＣＢ处理明显增强血清对ｃ－ｊｕｎ、ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ基因表达的刺激作用,而ＰＫＣ抑制剂Ｈ_７则抑制ＣＢ处理对这些基因转录的刺激作用,说明ＣＢ使Ｇ_０期细胞ＭＦ解聚刺激ｃ－ｊｕｎ、ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ的转录活性与ＰＫＣ的作用有关．结果表明Ｇ_０至Ｓ期早期ＭＦ的重组可促进细胞进入Ｓ期,增强ＤＮＡ合成．     

蚯蚓体内一种纤溶酶原激活剂(e-PA)对ATEE的降解

赤子爱胜蚓（Ｅｉｓｅｎｉａｆｅｔｉｄａ）体内的一种纤溶酶原激活剂（ｅ－ＰＡ）能够降解人工合成底物Ｎ－乙酰－Ｌ－酪氨酸乙酯（ＡＴＥＥ）,该降解反应的最适ｐＨ为８．５,而且在０．２ｍｏｌ／ＬＮａ２ＨＰＯ４中的活性要强于在０．０５ｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．５）中．分别测定了ｅ－ＰＡ的大小亚基及全酶在０．２ｍｏｌ／ＬＮａ２ＨＰＯ４与０．０５ｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．５）两种体系中的Ｋｍ和Ｋｃａｔ．结果表明,在０．２ｍｏｌ／ＬＮａ２ＨＰＯ４中,全酶的ＡＴＥＥ活性远远高于大小亚基单独的ＡＴＥＥ活性,而在０．０５ｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．５）中则没有这种现象．从蛋白质结构的角度对这一结果作了解释．用不同抑制剂和ｅ－ＰＡ作用,结果表明,ｐｅｐｓｔａｔｉｎ,Ｅ－６４和ＥＤＴＡ对ｅ－ＰＡ的ＡＴＥＥ活性都有不同程度的抑制,这一点与ｅ－ＰＡ的ＢＡＥＥ活性不同．     

斯达油脂酵母U9018产胞外多糖的适宜条件

研究了斯达油脂酵母Ｕ９０１８产胞外多糖的适宜条件：培养基组成（ｇ／Ｌ）：蔗糖１００,蛋白胨７,ＫＨ_２ＰＯ４３５,Ｋ_２ＨＰＯ_４·３Ｈ_２Ｏ_３．５,ＭｇＳＯ_４·７Ｈ_２Ｏ０．２,ＭｎＳＯ_４·Ｈ_２Ｏ０．０１,ＦｅＳＯ_４·７Ｈ_２Ｏ０．０１,ＮａＣｌ０．０１,初始ＰＨ６．５。装液量     

玉米花粉低分子量ATP酶部分性质研究

对纯化的玉米花粉低分子量ＡＴＰ酶－３８ｋＤ蛋白的部分理化及药理学性质进行了研究。该酶与植物细胞中现已发现的马达蛋白（动蛋白及ｄｙｎａｍｉｎ）存在较大差异。紫外吸收光谱在２７８ｎｍ处有最大吸收。圆二色谱分析表明该蛋白呈现典型球蛋白特征。最适ｐＨ为８．０,对ＡＴＰ的Ｋｍ为８×１０－４ｍｏｌ／Ｌ,Ｖｍａｘ为３．５μｍｏｌＰｉ每ｍｉｎ每ｍｇ蛋白质。对ＮＴＰ底物专一性为ＣＴＰ＞ＡＴＰ≥ＧＴＰ＞ＩＴＰ＞ＵＴＰ,药理学研究表明：该酶对０．１ｍｍｏｌ／ＬＮａ３ＶＯ４、２．４ｍｍｏｌ／ＬＮａＦ及０．１ｍｍｏｌ／ＬＮＥＭ均非常敏感。