P13K信号通路通过Skp2、p27调节肝癌细胞的增殖

探讨磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）信号通路调节肝癌细胞增殖的机制．用LY294002特异性阻断P13K信号通路后,人肝癌细胞（SMMC-7721）的增殖明显被抑制．RT-PCR及蛋白质印迹结果显示,LY294002增加了p27蛋白的表达,但不影响p27的mRNA表达．在LY294002处理的细胞中转入p27的RNAi质粒以干扰p27蛋白的表达后,肝癌细胞的增殖能力可部分恢复．放线菌酮（Chx）处理实验表明,阻断P13K信号通路使p27蛋白的半衰期延长,稳定性增加．进一步研究发现,LY294002可抑制介导p27蛋白降解的关键分子Skp2的rnRNA表达,还可缩短Skp2蛋白的半衰期,降低Skp2蛋白的稳定性．但在SMMC-7721中分别转染P13K下游重要靶分子Akt的持续激活和失活突变体,却并不影响p27蛋白的表达．这些结果表明,P13K信号通路在转录及翻译后水平调节Skp2的表达而影响p27蛋白的降解,从而调节肝癌细胞的增殖,但Akt并没有参与这种调节．     

RhoGDI2与PI3K/Akt/mTOR信号通路在肺癌细胞中的相关性研究

目的探讨肿瘤转移相关因子RhoGDI2与PI3K/Akt/mTOR信号通路在肺癌侵袭转移过程中的作用及相关机制。方法利用PI3K/Akt/mTOR信号通路上特异性的抑制剂,采用MTT法,伤口愈合实验及侵袭实验观察不同浓度药物对肺癌95D细胞生长侵袭转移能力的影响,通过Western Blot方法观察RhoGDI2蛋白水平的变化。结果PI3K抑制剂LY294002及mTOR抑制剂Rapamycin都能抑制肺癌细胞95D的侵袭转移能力,联合应用抑制作用更强。PI3K抑制剂LY294002处理组RhoGDI2蛋白的表达量增加,且随浓度增加RhoGDI2蛋白表达也增加。mTOR抑制剂Rapamycin组,在低浓度时增加RhoGDI2蛋白的表达,但增大Rapamycin的浓度,RhoGDI2蛋白的表达反而降低。低浓度LY294002组和Rapa-mycin组联合应用可以明显增加RhoGDI2蛋白的表达。结论PI3K/Akt/mTOR信号通路中Akt的活化与RhoGDI2密切相关,RhoGDI2可能直接或间接通过与Akt的相互作用参与调节肺癌的侵袭转移的过程。     

雷帕霉素对糖尿病肾病大鼠足细胞生物学行为及mTOR信号通路的影响

为了探究雷帕霉素对糖尿病肾病大鼠足细胞生物学行为及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）信号通路的影响,采用链脲霉素腹腔注射构建糖尿病肾病大鼠模型,将正常大鼠体内取出的足细胞设为对照组,模型大鼠体内取出的足细胞设为糖尿病肾病模型组（DN组）,取2 mg·kg^-1雷帕霉素干预DN组足细胞,并将其设为雷帕霉素组（RAPA组）。采用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐[3-（4,5-dimethylthiahiazo-z-y1）-2,5-diphenytetrazoliumromide,MTT]法检测足细胞增殖水平,Transwell检测细胞迁移和侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡水平,Western blot法检测上皮-间充质转化标志物[E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形纤维蛋白（vimentin）]、mTOR和核糖体S6激酶1（S6K1）蛋白表达水平。结果显示,与对照组相比,DN组细胞增殖水平显著被抑制,细胞迁移、侵袭水平显著升高,细胞凋亡率显著增加,上皮-间充转标志物E-cadherin表达显著下调,N-cadherin和Vimentin表达显著上调,mTOR/S6K1信号通路被显著活化（P<0.05）。与DN组相比,RAPA组细胞增殖水平显著升高,细胞迁移、侵袭水平显著降低,细胞凋亡率显著降低,E-cadherin表达显著上调,N-cadherin和Vimentin表达显著下调,mTOR和S6K1的蛋白表达显著被抑制（P<0.05）。结果表明,雷帕霉素通过抑制mTOR信号通路,促进足细胞体外增殖,抑制细胞迁移、侵袭、凋亡和上皮-间充质转化,发挥对糖尿病肾病大鼠足细胞的保护作用。     

PI3K信号通路通过Skp2、p27调节肝癌细胞的增殖

探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信号通路调节肝癌细胞增殖的机制.用LY294002特异性阻断PI3K信号通路后,人肝癌细胞(SMMC-7721)的增殖明显被抑制.RT-PCR及蛋白质印迹结果显示,LY294002增加了p27蛋白的表达,但不影响p27的mRNA表达.在LY294002处理的细胞中转入p27的RNAi质粒以干扰p27蛋白的表达后,肝癌细胞的增殖能力可部分恢复.放线菌酮(Chx)处理实验表明,阻断PI3K信号通路使p27蛋白的半衰期延长,稳定性增加.进一步研究发现,LY294002可抑制介导p27蛋白降解的关键分子Skp2的mRNA表达,还可缩短Skp2蛋白的半衰期,降低Skp2蛋白的稳定性.但在SMMC-7721中分别转染PI3K下游重要靶分子Akt的持续激活和失活突变体,却并不影响p27蛋白的表达.这些结果表明,PI3K信号通路在转录及翻译后水平调节Skp2的表达而影响p27蛋白的降解,从而调节肝癌细胞的增殖,但Akt并没有参与这种调节.     

PTEN通过抑制PI3K-AKT信号通路上调Rad51基因的表达

前期研究发现pten缺陷细胞的自发DNA双链断裂损伤水平显著增加.本研究探讨了抑癌基因pten对参与DNA同源重组修复的rad51基因表达的影响和机制．用实时定量PCR技术检测了PTEN野生型和缺陷型细胞rad51的表达水平.结果发现,PTEN缺失会导致rad51的表达降低．PI3K激酶为PTEN的下游负调节靶分子,使用PI3K激酶抑制剂LY294002处理缺陷型细胞后,其rad51表达升高．在PTEN野生型细胞中分别转染Flag-Akt WT（野生型）和Flag-Akt AC（组成型激活）,或在PTEN缺陷型细胞中分别转染野生型PTEN和Akt-DN（失去激酶活性的Akt）. 利用RT-PCR技术检测上述细胞rad51的表达水平,同时利用Western印迹检测上述细胞RAD51蛋白的表达水平.结果发现,转染Flag-Akt WT和Flag-Akt AC后,均能促使PTEN野生型细胞中rad51在mRNA和蛋白水平降低;在PTEN缺陷型细胞中转染野生型PTEN或Akt-DN后,rad51在mRNA和蛋白水平均升高．在PTEN缺陷型细胞中使用siRNA沉默akt后,同样导致RAD51表达升高．结果提示,PTEN可以正向调节RAD51基因表达,PI3K/Akt是其信号通路机制之一．     

胰岛素样生长因子1（IGF-I）通过PI-3K/Akt途径对结肠癌细胞凋亡的影响

目的：探讨胰岛素样生长因子-1（IGF-I）通过磷酯酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI-3K/Akt）信号通路对结肠癌细胞株SW480凋亡率的影响及其凋亡抑制蛋白survivin表达水平的变化。方法：培养结肠癌SW480细胞株,实验分成三组：未加IGF-I空白组、IGF-I刺激组、IGF-I＋LY294002阻断组,检测阻断剂LY294002是否阻断PI-3K/Akt通路（Western Blot检测三组P-Akt表达情况）;Western Blot及免疫荧光观察三组survivin蛋白表达变化;MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果：Western blot结果显示LY294002可抑制IGF-I诱导的p-Akt的表达（P〈0.05）;阻断IGF-I诱导的PI-3K/Akt通路后MTT显示结肠癌细胞SW480增殖抑制率升高（P〈0.05）,流式细胞术分析显示凋亡率明显上升（P〈0.05）;Western blot及免疫荧光结果显示LY294002可抑制IGF-I诱导的survivin的表达（P〈0.05）。结论：IGF-I可通过PI-3K/Akt通路诱导survivin表达,从而抑制结肠癌细胞SW480的凋亡。     

LY294002对CML急变期细胞中Wnt／β-catenin信号通路的影响及其效应

β-catening在慢性粒细胞白血病急变过程中发挥着重要作用,而其受BCR／ABLTL其下游信号通路调控的具体分子机制尚未完全阐明。该研究旨在探讨PI3K-AK聪号通路对慢粒急变期细胞的影响及其对Wnt／β-catenin信号通路的调控作用。采用P13K-AKT信号通路的靶向抑制剂LY294002作用于慢粒急变期K562细胞,MTT法检测其对细胞增殖的影响,甲基纤维素克隆形成实验检测细胞的克隆形成能力,Western blot检测pAKT（Thr308）的表达变化,RT-PCR和Western blot分别检测β-catenin及其下游靶基因c—myc、cyclinD1的mRNA和蛋白表达情况。结果显示,10,20,40μmol/L的LY294002作用细胞24h后,抑制了K562细胞的增殖以及克隆形成能力。该效应呈浓度依赖的方式。3种浓度的LY294002处理细胞后,PI3K—AKT信号通路明显被抑制,pAKT（Thr308）的蛋白表达明显减少;β-catenin的mRNA表达无明显改变,但其蛋白水平依次减少;β-catenin的下游靶基因c-myc、cyclin D1的mRNA和蛋白水平均明显降低。综上所述,抑制PI3K-AKT信号通路可抑制白血病K562细胞的增殖和克隆形成能力,其机制可能与抑制Wnt／β-catenin信号通路相关。     

PI3K/Akt/mTOR信号通路在脂多糖诱导的大鼠肝星状细胞自噬中的作用

该文探讨了磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路在脂多糖(LPS)诱导的大鼠肝星状细胞-T6(HSC-T6)自噬中的作用。体外培养HSCT6细胞,随机分为对照组、LPS组、雷帕霉素(Rapamycin, Rapa)组、LPS+Rapa组、LY294002组、LPS+LY294002组, SC79组、LPS+SC79组,各组经相应处理后,单丹磺酰尸胺(MDC)染色法观察自噬溶酶体变化;细胞免疫荧光法检测各组微管相关蛋白轻链Ⅱ(LC3 Ⅱ)表达; Western blot检测各组通路蛋白p-Akt、p-mTOR、Akt、mTOR及自噬相关蛋白LC3 Ⅱ、Beclin1的表达; qRT-PCR检测各组LC3 Ⅱ和Beclin1 mRNA的表达。结果显示,LPS+Rapa组、LPS+LY294002组较LPS组的自噬溶酶体、LC3 Ⅱ荧光亮点含量无明显差异(P0.05), LPS+SC79组较LPS组的自噬溶酶体、LC3 Ⅱ荧光亮点含量明显减少(P0.05); Western blot显示, LPS+Rapa组、LPS+LY294002组较LPS组LC3 Ⅱ、Beclin1、p-Akt、p-mTOR蛋白表达水平无明显差异(P0.05), LPS+SC79组较LPS组LC3 Ⅱ、Beclin1含量明显减少, p-Akt、p-mTOR蛋白表达水平明显增加(P0.05); qRT-PCR显示LPS+Rapa组、LPS+LY294002组较LPS组LC3 Ⅱ、Beclin1 mRNA含量无明显差异(P0.05), LPS+SC79组较LPS组LC3 Ⅱ、Beclin1 mRNA含量明显减少(P0.05)。该项研究结果表明,LPS可能通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路促进HSC-T6细胞自噬。     

PI3K激活NF-κB信号通路保护中子辐射致IEC-6细胞损伤

中子属于高传能线密度电离辐射,能产生比κ射线更为严重的放射损伤,肠上皮对中子辐射高度敏感,迄今未见有关中子辐射致肠上皮细胞损伤中PI3K对NF-κB信号通路调控的研究报道.本研究旨在探讨中子照射后肠上皮细胞中PI3K对NF-κB信号通路的调控及其在中子辐射致肠上皮细胞损伤中的作用.选取肠上皮细胞系-6（intestinal epithelial cell No.6,IEC-6）进行传代培养,随机分为对照组、4Gy中子照射组和4Gy中子照射＋LY294002处理组,照射组和LY294002处理组细胞采用4Gy中子均匀照射,LY294002处理组细胞在照前24h给予终浓度为10κmol/L的LY294002,各组于照射后6和24h采用MTT比色法、流式细胞术和免疫印迹（Western blot）方法检测IEC-6细胞增殖活力、凋亡与坏死率以及NF-κB信号通路相关分子NF-κB（p65）,IKKκ和IκBκ的表达变化.研究发现,4Gy中子照射后6和24h,IEC-6细胞增殖活力下降,凋亡和坏死率增加;应用LY294002后IEC-6细胞增殖活力较照射组明显下降,IEC-6细胞凋亡和坏死率较照射组增加.4Gy中子照射后6和24h,IEC-6细胞NF-κB（p65）和IKKκ表达升高,IκBκ表达降低;应用LY294002后NF-κB（p65）和IKKκ表达降低,IκBκ表达升高,表明4Gy中子照射可引起IEC-6细胞增殖活力下降,凋亡和坏死率增加;PI3K可激活NF-κB信号通路,对中子辐射IEC-6细胞损伤发挥保护作用.     

P13K／AKT信号转导通路与人舌鳞癌细胞TCA8113顺铂耐药的相关性研究

目的：探讨P13K特异性抑制剂LY294002逆转顺铂耐药口腔鳞癌细胞TCA8113／CDDP的可行性。方法：采用间歇性加药,逐步递增CDDP药量,体外连续诱导培养TCA8113／CDDP细胞;用不同浓度的LY294002和顺铂处理TCA8113和TCA8113／CDDP细胞;MTT法观察对细胞增殖的影响,Western印迹分析LY294002作用前后p-Akt、Akt、P13K蛋白的表达。结果：建立了舌鳞癌耐药细胞TCA8113／CDDP,耐药指数为7．7;MTT实验显示LY294002对TCA8113和TCA8113／CDDP细胞的抑制作用与浓度及作用时间呈正相关;LY294002联合顺铂对2种细胞的抑制作用比单用顺铂效果好;P13K、Akt、P—AKT蛋白表达明显降低,其中TCA8113／CDDP细胞中P13K、AKT、p-AKT蛋白的表达比TCA8113细胞明显增多（P〈0．05）。结论：LY294002能增加耐药口腔鳞癌顺铂化疗的敏感性。     

PPAR-α对心肌肥大的调控作用及与PI3K/Akt/mTOR通路的关系

目的:研究过氧化物酶体增殖物激活受体-α(PPAR-α)对心肌细胞肥大的调控作用及其与PI3K/Akt/m TOR通路的关系。方法:异丙肾上腺素(ISO)诱导心肌细胞肥大;Leica图像分析软件测量心肌细胞表面积;qRT-PCR方法检测心房钠尿肽(ANP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)、PPAR-αmRNA表达;Western blot检测Akt、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)、P70S6K蛋白表达;PPAR-αRNAi抑制PPAR-α的表达。结果:1心肌细胞肥大时,PPAR-α表达显著下降;非诺贝特(Feno)可上调PPAR-α表达,抑制心肌细胞肥大;Feno对心肌细胞肥大的抑制效应可被PPAR-αRNAi所逆转;2Feno能明显抑制ISO诱导的心肌细胞p-Akt、p-m TOR和p-p70S6K蛋白表达的增加;Feno的上述作用可被PPAR-αRNAi所逆转;3PI3K抑制剂LY294002(LY)或m TOR抑制剂雷帕霉素(RAPA)均能明显抑制心肌细胞肥大,LY或RAPA抑制心肌细胞肥大的效应均可被PPAR-αRNAi所取消。结论:PPAR-α通过负性调控抑制心肌细胞肥大。PPAR-α抑制心肌细胞肥大的作用可能与其抑制PI3K/Akt/m TOR信号通路有关。     

体外缺血缺氧条件下大鼠骨髓间充质干细胞凋亡发生的机制研究

目的：研究体外大鼠骨髓间充质干细胞（Bone marrow-derived mesenchymal stem cells, BMSCs）在缺血缺氧条件下发生凋亡的作用机制。方法：采取大鼠骨髓,以密度梯度离心分离出单个核细胞（MNCs）,于体外培养并由牛垂体提取物（PEX）诱导扩增传代培养出骨髓间充质干细胞（MSCs）。经形态学和流式细胞仪检测MSCs表面标志物鉴定后,骨髓间充质干细胞（BMSCs）在缺血缺氧条件下培养,通过Annexin V／PI双染细胞凋亡检测比较不同组别细胞的凋亡率和蛋白印迹法（western blot）来观察细胞中蛋白的变化。结果：①经形态学观察和流式细胞仪检测MSCs表面标志物鉴定,提示骨髓间充质干细胞培养成功。②对照组（无缺血缺氧）与缺血缺氧组比较,缺血缺氧组的凋亡率显著性增加,而通过磷酸化Akt的表达量显著性增加提示PI3K（Phosphoinositide-3kinase）／Akt（ProteinkinaseB,PKB）信号通路被激活（P〈0．05）;同时缺血缺氧组与缺血缺氧＋PI3K／Akt抑制剂（LY294002）组比较,缺血缺氧＋PI3K／Akt抑制剂（LY294002）组的凋亡率显著降低,而通过磷酸化Akt的表达量显著减少提示PI3K/Akt信号通路被抑制（P〈0．05）。结论：PI3K／Akt信号通路对体外缺血缺氧条件下培养的骨髓间充质干细胞凋亡发生有关键性作用。     

AKT途径在雌激素调控子宫内膜癌KLE细胞中乙二醛酶Ⅰ表达的作用

目的：探讨雌激素是否通过AKT途径调控子宫内膜癌KLE细胞中乙二醛酶Ⅰ（GlyoxalaseⅠ,GloⅠ）的表达。方法：采用RT—PCR和Western blotting检测雌激素（17-β雌二醇）处理或AKT途径抑制剂（LY294002）处理子宫内膜癌KLE细胞后GloⅠ的mRNA或蛋白的表达情况。实验分4组：Con组（对照组）;LY294002组（LY294002处理组）;E2组（17-β雌二醇处理组）;E2＋LY294002组（LY294002预处理1小时后再17-β雌二醇处理组）。结果：1、经不同浓度的17-β雌二醇（Con、10^-11、10^-10、10-9M）作用于KLE细胞24小时后,GloⅠmRNA的相对表达量分别为1,1．58±0．04,1．82±0．03,1．81±0．04,以10^-10M的浓度时最为显著（P〈0．05）。以10,lOM的17-13雌二醇作用于KLE细胞48小时后,GloⅠ蛋白的相对表达量为1．79±0．02,高于Con组。2、以LY294002抑制AKT途径后,KLE细胞中GloⅠmRNA的相对表达量为0．69±0．03,蛋白的相对表达量为0．16±0．02,均低于Con组.3、E2＋LY294002组GloⅠmRNA和蛋白的相对表达量分别为1．02±0．04、1．01±0．03,均低于E2组中GloⅠmRNA和蛋白的相对表达量,E2组分别为1．34±0．03、1．79±0．02。LY294002组GloⅠmRNA和蛋白的相对表达量分别为0．69±0．03,0．16±0．02,均低于Con组GloⅠmRNA和蛋白的相对表达量。结论：雌激素可上调子宫内膜癌KLE细胞中GloⅠmRNA和蛋白的表达。抑制AKT途径可下调子宫内膜癌KLE细胞中GloⅠmRNA和蛋白的表达。AKT途径在雌激素调控子宫内膜癌KLE细胞中GloⅠ的表达无明显作用．     

胰岛素样生长因子1（IGF-I）通过PI-3K/Akt 途径对结肠癌细胞 凋亡的影响

目的:探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-I)通过磷酯酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI-3K/Akt)信号通路对结肠癌细胞株SW480凋亡率的影响及其凋亡抑制蛋白survivin表达水平的变化。方法:培养结肠癌SW480细胞株,实验分成三组:未加IGF-I空白组、IGF-I刺激组、IGF-I+LY294002阻断组,检测阻断剂LY294002是否阻断PI-3K/Akt通路(Western Blot检测三组P-Akt表达情况);Western Blot及免疫荧光观察三组survivin蛋白表达变化;MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:Western blot结果显示LY294002可抑制IGF-I诱导的p-Akt的表达(P<0.05);阻断IGF-I诱导的PI-3K/Akt通路后MTT显示结肠癌细胞SW480增殖抑制率升高(P<0.05),流式细胞术分析显示凋亡率明显上升(P<0.05);Western blot及免疫荧光结果显示LY294002可抑制IGF-I诱导的survivin的表达(P<0.05)。结论:IGF-I可通过PI-3K/Akt通路诱导survivin表达,从而抑制结肠癌细胞SW480的凋亡。     

mTOR信号通路与癌症治疗

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)是一种非典型的丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶,在细胞的生长、分化、增殖、迁移和存活上扮演了重要的角色。由于mTOR信号转导通路在细胞周期进程中发挥了重要作用,而细胞周期进程调节异常与许多疾病尤其是癌症的发生、发展有关,因此mTOR信号通路的失调可引起多种癌症。mTOR的特异性抑制剂雷帕霉素及其衍生物CCI-779能抑制mTOR的功能,使细胞阻滞在G。期,并引起凋亡。CCI-779作为抗癌药物已分别进入Ⅱ期临床。通过临床实验CCI-779显示出较高的抗癌活性和相对较小的副作用。越来越多的实验证据显示,mTOR信号转导通路的抑制剂可开发成为潜在的肿瘤特异性治疗药物。     

hepaCAM通过下调p-FOXO1/PCNA调节人膀胱癌BIU-87细胞的增殖活力

探讨肝细胞粘附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,hepa CAM)对膀胱癌细胞BIU-87增殖活力的影响以及其调节机制。将BIU-87细胞分为对照组、空载组、hepa CAM组、LY294002组及hepa CAM与LY294002联用组,噻唑蓝法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测细胞的增殖抑制率;Real-time PCR检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达;Western blot法检测p-FOXO1的表达;同时用LY294002处理BIU-87细胞后Western Blot检测p-FOXO1、PCNA的表达。结果显示,单独运用hepa CAM过表达腺病毒或LY294002均能够明显抑制膀胱癌BIU-87细胞的增殖活力,hepa CAM过表达腺病毒与LY294002联用更加显著的增强了单独作用的抑制效果(p0.05);Western Blot显示,hepa CAM基因的过表达使p-FOXO1的表达量显著降低(p=0.001);hepa CAM过表达腺病毒与LY294002联用后,与hepa CAM或LY294002分别作用相比,p-FOXO1(p=0.014,p=0.047)和PCNA(p=0.002,p=0.004)的表达量降低明显;Realtime PCR结果显示,LY294002处理BIU-87细胞后,PCNA的表达明显减低(p=0.003),加入hepa CAM过表达腺病毒后更为显著地增强LY294002对PCNA的抑制作用(p=0.001)。本课题得出结论,hepa CAM基因过表达后通过下调p-FOXO1从而抑制膀胱癌BIU-87细胞的增殖活力,此作用与PCNA的表达量下调有关。     

PKC、PKA信号通路在调控体外培养人牙囊细胞VEGF表达中的作用

该文主要探讨PKC、PKA信号通路在调控体外培养人牙囊细胞VEGF表达中的作用。选取生长状态良好的第4代人牙囊细胞,采用Real-time PCR和Western blot分别检测PKC激动剂（PMA）、PKC非特异性抑制剂（G 6983）、PKC-α和γ特异性抑制剂（HBDDE）、PKC-β特异性抑制剂（LY333531）、PKA激动剂（dbcAMP）和抑制剂（KT5720）对体外培养人牙囊细胞VEGF mRNA和蛋白表达的影响。结果显示,PMA组和PMA＋HBDDE组VEGF mRNA和蛋白的表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）;而PMA＋G 6983组和PMA＋LY333531组VEGF mRNA和蛋白的表达水平与对照组之间无明显差异（P〉0.05）。dbcAMP组VEGF mRNA和蛋白的表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）;而dbcAMP＋KT5720组VEGF mRNA和蛋白的表达水平与对照组之间无明显差异（P〉0.05）。这表明,PKC、PKA信号通路均参与了体外培养人牙囊细胞VEGF表达的调控,其中PKC信号通路中参与调控的亚型是PKC-β。     

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在小鼠卵母细胞成熟过程中的表达及作用

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)是一种Ser/Thr激酶,属于PIKK超家族,对调节细胞周期、蛋白质合成等具有重要作用,是细胞生长、增殖、分化、凋亡的中心调控器,但在哺乳动物卵母细胞中的研究还未见报道．以小鼠卵母细胞为研究对象,采用免疫荧光为主要研究方法,对mTOR在小鼠卵母细胞中的表达进行研究,并通过mTOR的特异性抑制剂雷帕霉素( rapamycin,RAPA )对卵母细胞进行处理,对mTOR在卵母细胞成熟过程中的作用进行研究．结果显示：小鼠卵母细胞成熟过程中,生发泡( germinal vesicle,GV )期mTOR主要集中在核膜处表达,生发泡破裂 ( germinal vesicle breakdown,GVBD )后mTOR伴随染色体分布,第二次减数分裂中期( second metaphase,MⅡ期 ) mTOR伴随纺锤体分布;雷帕霉素处理后,小鼠卵母细胞的成熟受到抑制,且这种抑制作用具有浓度依赖性,同时其mTOR的表达部位和形态也发生变化．研究表明,在小鼠卵母细胞成熟过程中,mTOR在各个时期的表达及分布具有阶段特异性,并对小鼠卵母细胞GVBD的发生和第一极体的排放都具有重要作用．     

PI3K/AKT途径在大肠埃希菌诱导U937细胞凋亡中的作用

目的探讨PI3K/AKT信号转导通路在大肠埃希菌（Escherichia coli,E.coli）诱导的人巨噬细胞系U937细胞凋亡中的作用。方法利用Western blot分析检测E.coli感染不同时间后磷酸化及非磷酸化AKT的表达;预先用不同浓度的LY294002（PI3K途径抑制剂）处理U937细胞60min,观察E.coli感染30min后U937细胞的凋亡情况。结果随着感染时间的延长,磷酸化AKT的表达逐渐下降。加入PI3K的抑制剂LY294002后,U937细胞的凋亡率逐渐升高。结论PI3K/AKT信号转导通路参与了E. coli诱导的U937细胞凋亡过程。LY294002通过特异性地抑制PI3K/AKT活性增加E.coli诱导的U937细胞凋亡率。