大肠杆菌(Escherichia coli A S 1.357)L-天门冬酰胺酶的研究I. L-天门冬酰胺酶高产菌株的筛选

从87株细菌中筛选取得L-天门冬酰胺酶的高产菌株大肠杆菌(Escherichia coli AS 1.357)。采用7.5—10％玉米浆培养基(pH7.0一7.5),于37℃振荡培养8小时,可获得高活力的L一天门冬酰胺酶(4．6单位／毫升)。在我们的实验条件下,葡萄糖不利于L-天门酰胺酶的形成．     

EDTA对Cu在水生微宇宙中的毒性和分布的影响

利用实验室人工合成培养微宇宙,研究不同浓度ＥＤＴＡ（０．０、１．０、８．０ｍｇ·Ｌ－１）对微宇宙中Ｃｕ（２．０ｍｇ·Ｌ－１）的毒性及Ｃｕ的分布．结果表明,在微宇宙运行过程中,投加２．０ｍｇ·Ｌ－１Ｃｕ后,ＥＤＴＡ浓度为０．０ｍｇ·Ｌ－１试验组中大型种群大小、叶绿素ａ浓度及总初级生产力与总呼吸的比值（Ｐ／Ｒ）随时间变动曲线,明显低于其它试验组的曲线,ＥＤＴＡ的存在削弱了Ｃｕ对大型和藻类的毒性作用,并缓解了Ｃｕ对生态系统代谢功能的干扰;同时改变了微宇宙中Ｃｕ在不同隔室中的分布,水体中Ｃｕ相对增加（０．１％～６．７％）,沉积物中相对减少（０．８％～６．５％）;ＥＤＴＡ的存在影响了藻类和大型对Ｃｕ的积累系数（ｐ＜０．０５）．     

人脑及红细胞膜乙酰胆碱酯酶的芳基酰胺酶活性

采用联合亲和层析法从人小脑及红细胞膜中纯化了ＡＣｈＥ,纯化的人脑及红细胞ＡＣｈＥ在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上呈一主带,分子量约为６６０００。人脑ＡＣｈＥ制备酯酶与酰胺酶比活性分别为１２９９与１４３Ｕ／ｍｇ,人红细胞ＡＣｈＥ制备分别为４５８４与７４７Ｕ／ｍｇ。人脑及红细胞ＡＣｈＥ制备的酯酶与酰胺酶活性最适ｐＨ较接近,在ｐＨ７．５－８．０之间,酯酶活性底物ＡＴＣｈ对其芳基酰胺酶活性有抑制作用。ＩＣ_（５０）分别为１０．２×１０~（－３）及３×１０~（－３）ｍｏｌ／Ｌ。梭曼对其酯酶及酰胺酶活性均有明显抑制作用,说明二者均需活性中心丝氨酸参与。     

野花生豆凝集素的化学修饰与荧光光谱研究

野花生豆凝集素（ＣＭＬ）经Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２００测得分子量为１０３．Ｏ ｋＤ。用对二甲基氨基苯甲醛（ＤＡＢ）为显色剂,测得每个ＣＭＬ分子含有５．９个色氨酸残基。在ｐＨ５．１,含８ｍｏｌ／Ｌ脲的醋酸缓冲中,Ｎ－溴代丁二酰亚胺（ＮＢＳ）可修饰ＣＭＬ分子中的５．６个色氨酸（Ｔｒｐ）残基,同时使ＣＭＬ的凝血活性完全丧失。用焦碳酸二乙酯（ＤＥＰＣ）和Ｎ－乙酰顺丁烯酰胺（ＮＥＭ）分别修饰ＣＭＬ的组氨酸残     

盐生杜氏藻甘油-3-磷酸脱氢酶的分离纯化及其特性的研究

利用ＰＥＧ分级,ＤＥＡＥ离子交换层析,ＢｌｕｅＳｅｐｈａｒｏｓｅ拟亲和层析,ＭｏｎｏＱ离子交换层析等手段,分离纯化盐生杜氏藻（Ｄｕｎａｌｉｅｌａｓａｌｉｎａ（Ｄｕｎａｌ）Ｔｅｏｄ．）甘油三磷酸（Ｇ３Ｐ）脱氢酶（ＥＣ１．１．１．８）,得到比活为１２．６Ｕ／ｍｇ的电泳纯的酶,并对此酶的生化特性进行了研究。４％～２０％非变性聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳测得全酶分子量约为２７０ｋＤ,ＳＤＳＰＡＧＥ表明该酶只有一种分子量约为６５ｋＤ的亚基,据此推测该酶应为同四聚体。酶催化磷酸二羟丙酮（ＤＨＡＰ）还原的最适ｐＨ值为７．５,催化Ｇ３Ｐ脱氢的最适ｐＨ值为１０。该酶对４个底物还原型辅酶Ⅰ（ＮＡＤＨ）,二磷酸吡啶核苷酸（ＤＨＡＰ）,辅酶Ⅰ（ＮＡＤ）,Ｇ３Ｐ的表观Ｋｍ值分别为６３μｍｏｌ／Ｌ,２７２μｍｏｌ／Ｌ,１．５３ｍｍｏｌ／Ｌ,６．５２ｍｍｏｌ／Ｌ。该酶在保存过程中易失活。ＮＡＤＨ能降低酶失活的速度,而ＮＡＤ则不然。低浓度ＮａＣｌ对酶略有保护作用,但高浓度ＮａＣｌ加快酶的失活,且浓度越高效应越明显。     

用T-A载体克隆技术构建丙肝病毒C+E1区真核表达质粒pSVL-HCV/C+E1

用ＢａｍＨＩ和ＨｉｎｄＩＩ将丙肝病毒Ｃ＋Ｅ１ＤＮＡ片段从其克隆载体ｐＧＥＭ３ｚｆ－ＨＣＶ／Ｃ＋Ｅ１上切下,经Ｔａｑ酶补齐３’末端后插入到载体ｐＳＶＬ－Ｔ中,构建成丙肝病毒Ｃ＋Ｅ１真核表达载体ｐＳＶＬ－ＨＣＶ／Ｃ＋Ｅ１。本实验中重组效率达６４．７％（１１／１７）,正向插入为５０％（２／４）。     

野花生豆凝集素的化学修饰与荧光光谱研究

野花生豆凝集素（ＣＭＬ）经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００测得分子量为１０３．ＯｋＤ．用对二甲基氨基苯甲醛（ＤＡＢ）为显色剂,测得每个ＣＭＬ分子含有５．９个色氨酸残基．在ｐＨ５．１,含８ｍｏｌ／Ｌ脲的醋酸缓冲液中,Ｎ－溴代丁二酰亚胺（ＮＢＳ）可修饰ＣＭＬ分子中的５．６个色氨酸（Ｔｒｐ）残基,同时使ＣＭＬ的凝血活性完全丧失．用焦碳酸二乙酯（ＤＥＰＣ）和Ｎ－乙酰顺丁烯酰胺（ＮＥＭ）分别修饰ＣＭＬ的组氨酸残基和半胱氨酸巯基后,ＣＭＬ的活性均无变化．ＣＭＬ在天然状态下荧光发射峰位于３３６ｎｍ处,用ＣＭＬ的专一性抑制糖Ｎ－乙酰半乳糖胺研究色氨酸的微环境,发现Ｎ－乙酰半乳糖胺可以淬灭ＣＭＬ中８８％的色氨酸残基萤光,Ｓｔｅｒｎ－Ｖｏｌｍｅｒ常数Ｋ＝１．７３Ｌ／ｍｏｌ．同时发现Ｎ－乙酰半乳糖胺能够保护ＣＭＬ,避免ＮＢＳ对ＣＭＬ的修饰作用,表明色氨酸可能是ＣＭＬ维待活性所必需,并直接参与和专一性抑制糖的结合,其微环境较为疏水．     

苯丙氨酸脱氨酶cDNA在大肠杆菌中的克隆与表达及酶法合成L—苯丙 …

利用基因重组技术,在大肠杆菌中克隆并表达苯丙氨酸脱氨酸（ＰＡＬ）（ＥＣ４．３．１．５）,并应用此酶转化肉桂酸生成Ｌ－苯丙氨酸。方法是将欧芹苯丙氨酸脱氨酶ｃＤＮＡ亚克隆到组成型表达载体ｐＭＧ３６ｅ启动子Ｐ３２下游,以菌落ＰＣＲ法鉴定插一段的大小和方向都正确的克隆,进而以ＨＰＬＣ检测肉桂酸浓度的方法鉴别重组质粒有催化肉桂酸生成Ｌ－苯丙氨酸的酶活力。结果获得能表达ＰＡＬ酶活性的阳性克隆,在ＰＨ１０,含１     

HDL受体和肝性脂酶在肝选择性摄取HDL_2－CE中的协同作用

体外重组３Ｈ－ＣＥ－无ＡｐｏＥ－ＨＤＬ２（ｒＨＤＬ２）保持天然ＨＤＬ２生物活性。大鼠肝窦状隙细胞与ｒＨＤＬ２３７℃培养３ｈ（正常组）;细胞内吞ｃｐｍ为９９５±１４７（ｘ±Ｓ．Ｄ．,ｎ＝２）。细胞进一步９７℃培养２ｈ．释放三氯醋酸（ＴＣＡ）沉淀和ＴＣＡ上清液中ｃｐｍ为７８±３２和１２±９。Ｎ－乙酰咪唑修饰组为３３９±６２、１９±１１和９±５。肝素处理组为５４２±７８、３４±１４和９±８。实验结果提示：（１）肝窦状隙细胞通过ＨＤＬ受体内吞ＨＤＬ２摄取ＨＤＬ２－ＣＥ,并通过逆向胞饮将ＨＤＬ３排出体外．（２）肝性脂酶（ＨＬ）直接介导细胞选择性摄取ＨＤＬ２－ＣＥ,导致ＨＤＬ３生成．（３）ＨＬ和ＨＤＬ受体在介导细胞选择性摄取ＨＤＬ２－ＣＥ中具有协同作用。     

R质粒对大肠杆菌L-天门冬酰胺酶活力的影响

对含有不同R质粒的6株大肠杆菌J53和不含质粒的大肠杆菌J53所产生的L-天门冬酰教酶的活力进行了比较,前者的L-天门冬酰胺酶活力比后者的降低了约1/2—3/4。消除大肠杆菌J53细胞中的R质粒后,L-天门冬酰胺酶活力明显增加并与不含质粒的大肠杆菌J53的相近。结果表明,在大肠杆菌内存在的R质粒对寄主的L-天门冬酰胺酶活力具有明显的抑制作用。     

荧光指示剂法测定植物细胞胞质游离Ca^2＋浓度

利用钙离子荧光指示剂Ｉｎｄｏ－１ ＡＭ 建立了测定植物细胞胞质游离Ｃａ２＋ 浓度的技术。应用此技术测出,ＢＭＳ（ｂｌａｃｋ Ｍｅｘｉｃｏ ｓｗ ｅａｔ）玉米悬浮细胞原生质体静息水平下的胞质游离Ｃａ２＋ 浓度是１２７±５６ ｎｍ ｏｌ·Ｌ－ １;Ｃａ２＋ 螯合剂ＥＧＴＡ 可使胞质游离Ｃａ２＋ 浓度由７８ ｎｍ ｏｌ·Ｌ－ １降至１２．５ ｎｍ ｏｌ·Ｌ－ １,而Ｃａ２＋ 载体Ａ２３１８７ 则可使胞质游离Ｃａ２＋ 浓度升至接近介质Ｃａ２＋ 水平。同时,证明ＡＢＡ 处理可使ＢＭＳ玉米悬浮细胞原生质体Ｃａ２＋ 浓度在１—１．５ 分钟内迅速升高,由７５ ｎｍ ｏｌ·Ｌ－ １升至７９０ ｎｍ ｏｌ·Ｌ－ １     

无花果曲霉原生质体形成与再生条件的探讨

根据正交试验得出无花果曲霉原生质体形成的最佳条件,用１％的混合酶液（０．５％纤维素酶＋０．２５％蜗牛酶＋０．２５％溶菌酶）作用无花果曲霉菌体细胞,原生质体产量达３．２×１０７个·ｍｌ－１,渗透压稳定剂为０．６ｍｏｌ·Ｌ－１ＫＣｌ于０．２ｍｏｌ·Ｌ－１ＰＯ３＋４（ｐＨ５．８）中,酶解时间和酶解温度分别为３．０ｈ、３０℃．比较不同酶解时间、再生稳定剂和碳源等因素对原生质体再生的影响,可确定最佳再生条件,再生率达３０％以上．     

提高CO2浓度对两种亚热带树苗光合作用的影响

鼎湖山季风常绿阔叶林的主要优势乔木树种裂壳锥（Ｃａｓｔａｎｏｐｓｉｓｆｉｓｓａ （Ｃｈａｍ ｐ．ｅｘ Ｂｅｎｔｈ．） Ｒｅｈｄ．ｅｔＷｉｌｓ．）和荷木（Ｓｃｈｉｍ ａ ｓｕｐｅｒｂａ Ｇａｒｄｎ．ｅｔＣｈａｍ ｐ．）幼苗,盆栽于自然条件（ＣＯ２ 浓度３５０ μＬ·Ｌ－ １）或高ＣＯ２ 浓度为５００ μＬ·Ｌ－ １和空气ＣＯ２（３５０ μＬ·Ｌ－ １）的半开顶式气罩中。在生长最旺盛的６～９ 月份,高浓度ＣＯ２ 条件下生长的叶片,其光合速率比在自然条件下生长的提高７９％ ～９５％ 。当叶片在３５０ μＬ·Ｌ－ １和５００ μＬ·Ｌ－ １的ＣＯ２ 浓度下测定时,其光合速率无明显差异。高浓度ＣＯ２ 下生长的叶片其光合速率－ＣＯ２ 浓度响应曲线比对照（３５０ μＬ·Ｌ－ １）高,叶绿素和类胡萝卜素含量低,但叶绿素ａ 和ｂ 的比值及类胡萝卜素和叶绿素的比值不变。高浓度ＣＯ２ 下生长的叶片气孔导度明显降低。两种植物在８５ ｄ 的高浓度ＣＯ２ 的生长过程中,并未出现光合速率下调现象     

C-末端酰胺化酶的研究进展

Ｃ－末端酰胺化酶的研究进展王翔林（沈阳药学院沈阳１１００１５）Ｃ－末端酰胺化酶（Ｃａｒｂｏｘｙｌ－ｔｅｒｍｉｎａｌα－ＡｍｉｄａｔｉｎｇＥｎｚｙｍｅ,ｃ－ＡＥ）,又称甘氨肽酰化单氧酶（Ｐｅｐｔｉｄｙｌｇｌｙｃｉｎｅα－Ａｍｉｄａｔｉｎｇｍｏｎｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ,ＰＡＭ,ＥＣ１．１４．１７．１３）是动物体内普遍存在的一种酶。     

国产凤仙花属六新种

１中州凤仙花新种图１ＩｍｐａｔｉｅｎｓｈｅｎａｎｅｎｓｉｓＹ．Ｌ．Ｃｈｅｎ,ｓｐ．ｎｏｖ．ＴＹＰＥ：Ｃｈｉｎａ．Ｈｅｎａｎ（河南）,Ｙｕｄｏｎｇ（豫东）,１９５９０９,ＨｅｎａｎＰｌ．Ｅｘｐｅｄ．（河南植物普查队）３１９４（ｈｏｌｏｔｙｐｕｓ,ＰＥ...     

内皮素和bFGF对MC的促增殖作用及胰岛素的协同效应

采用３Ｈ－ＴｄＲ参入法,测定碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）、胰岛素和内皮素－１（ＥＴ－１）对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞（ＭＣ）增殖的影响,以及胰岛素与ｂＦＧＦ或ＥＴ－１促ＭＣ增殖的协同作用。结果表明,不同浓度的ｂＦＧＦ（５－２００ｎｇ／ｍｌ）和胰岛素（０．１－２．４Ｕ／ｍｌ）均显著升高ＭＣ的３Ｈ－ＴｄＲ参入值（ｃｐｍ值）（Ｐ＜０．０１）。ＥＴ－１对ＭＣ的ｃｐｍ值的影响依剂量不同呈现两种不同的效应,在１０－９－１０－７ｍｏｌ／Ｌ时,随着浓度的升高,ＭＣ的ｃｐｍ值明显升高（Ｐ＜０．０１）,并以１０－８ｍｏｌ／Ｌ作用最强;当升高到１０－６ｍｏｌ／Ｌ时,ＭＣ的ｃｐｍ值出现降低趋势。胰岛素与ｂＦＧＦ或低浓度ＥＴ－１（≤１０－８ｍｏｌ／Ｌ）共同作用于ＭＣ时,ＭＣ的ｃｐｍ值明显高于二者单独作用之和（Ｐ＜０．０１）,与高浓度ＥＴ－１（＞１０－７ｍｏｌ／Ｌ）共同作用于ＭＣ时,ＭＣ的ｃｐｍ值小于二者单独作用之和（Ｐ＞０．０５）。上述结果说明,胰岛素、ｂＦＧＦ和ＥＴ－１均能显著促进ＭＣ增殖;胰岛素与ｂＦＧＦ或低浓度的ＥＴ－１促ＭＣ增殖具有正协同作用,与高浓度ＥＴ－１呈现负协同作用。     

丙型肝炎病毒核酸疫苗的免疫效果观察

将丙型肝炎病毒Ｃ＋Ｅ１区基因克隆到不同的真核细胞表达载体ｐＣＤＮＡ３．１（＋）和ｐＳＶＬ中,通过肌肉注射和皮下注射免疫ＢＡＬＢ／Ｃ及Ｆ１小鼠后,产生了抗ＨＣＶ／Ｃ区抗体。其中核酸疫苗ｐｃＤＮＡ３．１－ＨＣＶ／Ｃ＋Ｅ１的免疫高峰的出现早于ｐＳＶＬ－ＨＣＶ／Ｃ＋Ｅ１,Ｆ１小鼠的抗体应答强于ＢＡＬＢ／小鼠。肌肉注射优于皮下注射。     

铝对玉米生长和硝酸还原酶活性的影响

测定了生长在Ａｌ２（ＳＯ４）３１００μｍｏｌ／Ｌ氮素营养液中的两个玉米品种（ＳＣ７０４和ＶＡ３５的根系和叶片）的ＮＡＤＨ－硝酸还原酶（ＥＣ１．６．６．１）和ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ－硝酸还原酶（ＥＣ１．６．６．２）活性。     

β—环糊精对苯丙氨酸解氨酶反应影响的研究

在含有较高浓度底物反式肉桂酸（ｔｒａｎｓ－ｃｉｎｎａｍｉｃ ａｃｉｄ,ＣＡ）和氨反应介质中,研究了β－环糊精（β－ＣＤ）对红醇母苯丙氨酸解氨酶（Ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ ａｍｍｏｎｉａ－ｌｙａｓｅ,ＰＡＬ,ＥＣ４．３．１．５）催化反应的影响。加入适量β－ＣＤ可以克服高浓度ＣＡ对ＰＡＬ活性的抑制作用,显著增加产物Ｌ－苯丙氨酸（Ｌ－ｐｈｅ）的产量,β－ＣＤ最适用量随ＣＡ浓度升高而增加,其摩尔数量约为     

无花果蛋白酶在胍溶液中的分子折叠与活力变化研究

本文研究无花果蛋白酶（ＥＣ．３．４．４．１２）在不同浓度盐酸胍溶液中分子构象与活力变化关系。酶的内源荧光光谱,圆二色光谱与酶活力的变化表明：荧光光谱呈现二个明显的变化区域,低浓度胍（低于２ｍｏｌ／Ｌ）中,荧光发射峰基本不变,但荧光强度随胍浓度上升,随胍浓度断续增大（高于２ｍｏｌ／Ｌ）,酶的最大发射波长明显红移。当胍浓度低于１ｍｏｌ／Ｌ时,不仅不会使酶失活,反而使酶激活,当胍浓度高于１ｍｏｌ／Ｌ以上