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1.
参照Miller等人的大鼠离体肝脏灌流方法,我们设计制作了一套灌流装置,此装置由三部分组成:超级恒温器(维持灌流系统恒温用)、气体交换系统及灌流仪(用有机玻璃制作:上部有加热弯管,肝门静脉插管,温度计及恒温水浴夹层;下部有放置肝脏的漏斗和平板、灌流室、胆汁引流管、通气口及恒温水浴夹层)。用含0.15%葡萄糖的Krebs-Ringer碳酸氢盐缓冲液为灌流介质,流速2~3毫升/分钟/克肝,灌流4小时,在灌流期间持续通入95%O_2-5%CO_2。灌流后肝脏无坏死灶出现,肝切片显微观察,结构基本正常。通过胆汁分泌量及耗氧量测定,证明本法可维持肝脏正常功能至少4小时。我们将灌流液浓缩后,作脂质测定及脂蛋白电泳分析:总胆固醇为0.062±0.008毫克/克肝(n=7,p=95%);有一条相当于大鼠血清极低密度脂蛋白(VLDL)及两条相当于高密度脂蛋白(HDL)的色带。本装置构造简单,保证恒温,流速较稳定,适用于物质代谢及其调节与药物代谢的研究。目前,我们已将此法用于大鼠肝脏脂质代谢、脂蛋白代谢及肝脏肝素可释放脂酶活性的研究(均见另文)。  相似文献   
2.
高密度脂蛋白(High-density Lipoprotein,HDL)是血浆中重要的脂蛋白,其主要成分为载脂蛋白AⅠ(Apoliprotein AⅠ,ApoAⅠ为了大量制备该蛋白,首先尝试利用Pichia pastoris表达系统高效表达ApoAⅠ。通过PCR扩增获得天然含人载脂蛋白ApoAⅠ的基因片段,将其插入到P.pastoris分泌型载体pPIC9K上,BglⅡ酶切线性化后电转化P.pastoris GS115,将获得的1000多个转化子依次在含不同G418浓度的YPD平板筛选高抗性转化子,得到的22个高抗性转化子经甲醇诱导,SDS-PAGE检测得到6株高表达菌。然后对其中的高表达菌株AP16的培养及诱导条件进行了优化,结果显示:接种后培养24~28h,转入诱导阶段,培养基pH值在7—7.5,菌体密度OD600=80左右,以1%甲醇诱导96h最有利于ApoAⅠ的表达,表达水平达160mg/L。14L发酵罐结果显示表达水平与摇瓶相当,均高于其它表达系统,为大批量制备奠定了基础。  相似文献   
3.
参照Miller等人n 0]的大鼠离体肝脏灌流方法,我们设计制作了一套灌流装置,此装置由三部分组成:超级恒温器(维持灌流系统恒温用)、气体交换系统及灌流仪(用有机玻璃制作:上部有加热弯管,肝门静脉插管,温度计及恒温水浴夹层;下部有放置肝脏的漏斗和平板、灌流室、胆汁引流管、通气口及恒温水浴夹层)。用含O.15%葡萄糖的Krebs-Ringor碳酸氢盐缓冲液为灌流介质,流速2—3毫升/分钟/克肝,灌流4小时,在灌流期间持续通入95%Or-5?20灌流后肝脏无坏死灶出现,肝切片显微观察,结构基本正常。通过胆汁分泌量及耗氧量测定,证明本法可维持肝脏正常功能至少4小时。我们将灌流液浓缩后,作脂质测定及脂蛋白电泳分析:总胆固醇为0.062±0.008毫克/克肝(n=7,p=95%);有一条相当于大鼠血清极低密度脂蛋白(VLDL)及两条相当于高密度脂蛋白(HDL)的色带。本装置构造简单,保证恒温,流速较稳定,适用于物质代谢及其调节与药物代谢的研究。目前,我们已将此法用于大鼠肝脏脂质代谢、脂蛋白代谢及肝脏肝素可释放脂酶活性的研究(均见另文)。  相似文献   
4.
大鼠肝窦状隙细胞培养结果显示:氧化高密度脂蛋白2(ox-HDL2)对异硫氰酸荧光素(FITC)荧光标记ox-HDL2的细胞结合有竞争抑制作用,而HDL2则无。细胞内吞FITC-ox-HDL2的荧光强度(FS)和[3H]CE-ox-HDL2(r-ox-HDL2)的放射强度分别是内吞FITC-HDL2的45.5%和rHDL2的61.4%。内吞FS主要存在于三氯醋酸(TCA)沉淀部分,而放射强度主要存在于TCA上清液部分。细胞释放的FS和放射活性分别是内吞量的67.7%和10.9%,且主要存在于TCA可沉淀部分。结果提示:(1)大鼠肝窦状隙细胞可能存在着ox-HDL受体,该受体不同于HDL受体。(2)ox-HDL2在细胞内代谢方式与HDL2相似,均没有经历溶酶体分解途径。在细胞内载脂蛋白与胆固醇酯(CE)组分经历一个解离过程。细胞截留大部分CE后,将载脂蛋白(Apo)与剩余CE重组成脂蛋白并以逆向胞饮方式释放到胞外。(3)氧化修饰减弱HDL2逆向转运胆固醇能力  相似文献   
5.
HDL受体和肝性脂酶在肝选择性摄取HDL_2-CE中的协同作用   总被引:2,自引:0,他引:2  
体外重组3H-CE-无ApoE-HDL2(rHDL2)保持天然HDL2生物活性。大鼠肝窦状隙细胞与rHDL237℃培养3h(正常组);细胞内吞cpm为995±147(x±S.D.,n=2)。细胞进一步97℃培养2h.释放三氯醋酸(TCA)沉淀和TCA上清液中cpm为78±32和12±9。N-乙酰咪唑修饰组为339±62、19±11和9±5。肝素处理组为542±78、34±14和9±8。实验结果提示:(1)肝窦状隙细胞通过HDL受体内吞HDL2摄取HDL2-CE,并通过逆向胞饮将HDL3排出体外.(2)肝性脂酶(HL)直接介导细胞选择性摄取HDL2-CE,导致HDL3生成.(3)HL和HDL受体在介导细胞选择性摄取HDL2-CE中具有协同作用。  相似文献   
6.
载脂蛋白基因和功能研究   总被引:3,自引:0,他引:3  
绝大部分载脂蛋白(Apo)一级结构已阐明,目前进入基因水平的研究。Apo 结构多态性和功能之间关系值得注意。Apo 是脂蛋白必要的结构蛋白,它们作为配体与相应受体相互作用,同时调节脂蛋白代谢三个关键酶:脂蛋白脂酶,肝性甘油三酯脂酶和卵磷脂胆固醇酰基转移酶的活性。Apo 可能作为一种代谢程序剂,编序和调节脂蛋白代谢和体内胆固醇平衡。  相似文献   
7.
8.
胰岛素对大鼠肝脏和血浆脂质代谢的影响   总被引:1,自引:0,他引:1  
正常大鼠皮下注射胰岛素后血清总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)和甘油三酯(TG)显著下降(P<0.01、P<0.001和P<0.01),(血清HDL-C)/(血清TC)和(血清HDL-C)/(血清TC-(HDL-C))无变化,离体灌流肝脏分泌TC和TG显著增加(P<0.001,P<0.05)。这些结果提示:(1)胰岛素使血清HDL-C和较低密度脂蛋白[极低密度脂蛋白(VLDL) 低密度脂蛋白(LDL)]-胆固醇同等比例下降。(2)胰岛素促进正常大鼠肝脏合成分泌TG(VLDL-TG)增加和血浆TG(VLDL-TG)清除增加,可能以后一作用为主。(3)胰岛素促进正常大鼠肝脏合成分泌胆固醇增加和血浆胆固醇清除增加,可能以后一作用为主。(4)胰岛素使正常大鼠血清HDL-C下降,可能是由于激活LDL受体促进大鼠HDL通过LDL受体途径的分解代谢和/或激活肝内皮脂酶(HEL)促进HDL分解的结果。  相似文献   
9.
蛋白C抗凝系统—一种新的抗凝系统   总被引:2,自引:0,他引:2  
  相似文献   
10.
高密度脂蛋白 (High densityLipoprotein ,HDL)是血浆中重要的脂蛋白 ,其主要成分为载脂蛋白AⅠ(ApoliproteinAⅠ ,ApoAⅠ为了大量制备该蛋白 ,首先尝试利用Pichiapastoris表达系统高效表达ApoAⅠ。通过PCR扩增获得天然含人载脂蛋白ApoAⅠ的基因片段 ,将其插入到P .pastoris分泌型载体pPIC9K上 ,BglⅡ酶切线性化后电转化P .pastorisGS115 ,将获得的 1000多个转化子依次在含不同G418浓度的YPD平板筛选高抗性转化子 ,得到的2 2个高抗性转化子经甲醇诱导 ,SDS PAGE检测得到 6株高表达菌。然后对其中的高表达菌株AP16的培养及诱导条件进行了优化 ,结果显示 :接种后培养 24~ 28h ,转入诱导阶段 ,培养基pH值在 7~ 7.5 ,菌体密度OD600 =80左右 ,以 1%甲醇诱导 96h最有利于ApoAⅠ的表达 ,表达水平达 160mg/L。 14L发酵罐结果显示表达水平与摇瓶相当 ,均高于其它表达系统 ,为大批量制备奠定了基础.  相似文献   
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